Transcript 서던블롯피피티 (871Kbyte)

S o ut h e r n Bl o t
2조
201421049장유림
201421052김다현
201421053김아인
목
차
1
Southern blot의 정의
2
원리
3
응용
Southern blot 이란?
-고분자의 획득과 판별에는southern,
northern, western, eastern blotting
이 사용된다. 최초로 생물학자 Edwin
Southern이 DNA를 획득하는 방법을
발견하고 자신의 이름을 따 Southern
blotting이라는 것을 개발했다.
-한 가닥으로 된 핵산이 이와 상보적인
염기 서열의 또 다른 한 가닥의 핵산과
적당한 조건에서 만나게 되면 이중나
선(DNA-DNA or DNA-RNA)을 형성
하는 현상(hybridization)의 원리를 응
용한 것으로 DNA 샘플 속에 특정 서
열이 존재하는지를 판별할 때 사용된
다.
3
Southern Blotting 원리
-해석할 DNA를 적당한 제한효
소로 절단
- 절단된 DNA를 agarose
gel(아가로스 겔) 전기영동에
의해 분자량의 순으로 분리
- 변성된 DNA를 agarose gel
로부터 nitrocellulose filter에
흡착시켜 고정
- 준비된 filter와 방사선 동위
원소로 표지한 probe(탐침)를
수용액 중에서 hybridization
(혼성화)시킴
- Filter를 X선 필름에 노출시
켜 방사선으로 감광된 band를
검출함으로써 목적하는 DNA
의 존재를 확인하는 것
4
Southern hybridization
핵산분리
Gel 전처
리
5
제한효소
처리
Southern
blot
Agarose
전기영동
Hybridization
& detection
6
병원에서의 응용방법
• 비증폭적인 방법 중 전기영동 시킨 DNA 필터를 옮
기는 방법으로 유전자 검색의 가장 기본적인 방법
이다. 그러나 진단 목적으로 사용되기에는 많은 시
간이 소요되며 실험이 어렵다.
• DNA 샘플에서 바로 서열을 분석하는 PCR등의 기
법들이 존재하기 때문에 southern bbtting 자체는
실험실에서 그리 많이 쓰이지는 않는다. 그렇지만
배아줄기세포의 유전자 결여 연구 등에 쓰이고 있
다.
• 유전병을 알아내는 데 사용될 수 있다.
• DNA절편의 확인을 위해서도 쓰이고 플라스미드,
코스미드,박테리오 피지 등의 DNA를 탐색 하는 데
도 널리 쓰이고 있다.
7
출처
• 다음백과사전(실험과정)
• 강원대학교 생명과학과
http://biology.kangwon.ac.kr(원리)
• http://cms.donga.ac.kr유전자와유전체분
석 (실험과정 사진)
8
THANK YOU