Transcript 서던블롯 2조

Southern Blot
서던블
롯
201421009박준규
201421010김다솔
201421011권우경
목차
서던
서던
서던
서던
블롯의 정의
블롯의 목적
블롯 분석 과정
블롯 응용사례
1975년 서던(E. Southern)
에 의해 개발.
서던 블
롯
나이트로셀룰로오스
또는 나일론필터에
DNA절편을 옮겨서
DNA 탐침과 혼성화되
는지 여부를 확인하는
방법.
목적
분자 생물학에서
DNA 시료에 특정
DNA 서열을 찾기
위함.
1. DNA를 추출한다.
분석과
정
2. 추출된 DNA를 제한효소로
절단한다.
분석과
정
3.아가로스 겔 전기영동을 실
시하여 크기별로 DNA 조
각을 분리한다.
4. 이중나선 상태로 있는
분석과
정
DNA를 알칼리로 단일 가
닥 상태로 만들어 준 뒤
nitrocellulose filter나
nylon filter로 옮긴다.
분석과
정
5.Gel상에서 filter로
DNA를 옮기는 방법으로
capillary transfer 방법을
가장 많이 사용한다.
6.목적하는 유전자를 검
분석과
정
출하기 위해서 형광물질
이 부착된 탐침
(probe)DNA를 사용한다.
*probe:다양한 길이일 수 있는
DNA혹은 RNA 조각으로,방사선
동위원소나 효소, 혹은 발광 및
발색 반응을 낼 수 있는 효소결합
이 가능한 분자로 표지된 핵산조
각을 말함.
특정 DNA 염기서열의 존재 유무를 규
명하기 위한 방법으로 형광물질이 부착
된 탐침(probe) DNA를 사용한다.
혼성화
염색체에 탐침 DNA를 부착
시키는 검사과정을 혼성화
(hybridization)라 부르고,
염색체에 부착되는 탐침 DNA는 자외
선에 노출될 때 형광을 내면서 대응하
는 DNA 염기서열의 유무 및 위치를 보
여주게 된다.
분석과
정
7.표식된 probe(탐침)
와 hybrid를 형성한
DNA 단편은
autoradiography(자
기방사법)에 의해 검
출된다.
찾아낸 원하는 유전자를 포함한 벡터
를 박테리아에서 여러 대를 배양시켜
클론을 만든다.
응용
유전자 클로닝(cloning)은 원하는 유전
자를 증폭시키기 위하여 사용하는 데
유전자 배열결정(sequencing) 및 분석을
가능하게 해준다.
이뿐만 아니라 유전자 진단이나 유전
자 지도의 작성에도 응용이된다.
서던블롯
방법이
진단에
이용되는
질환
Trinucleotide repeat
disease
(트리뉴클레오티드 신장
병)
Fragile X syndrome
(취약 X 증후군)
Myotonic dystrophy
(긴장성근이영양증)
 http://www.google.co.kr/url?url=http://helpli
ne.nih.go.kr/cdchelp/file.
 http://biopedia.org/index.php/Southern_blot
 위키백과
 http://dasan.sejong.ac.kr/~yjlee/4-4.htm
출처
 [네이버 지식백과]
 유전실무자교육콘텐츠4장
 화학공학연구정보센터
 최신 진단분자 생물학실습-한국 임상병
리학과 분자생물학교수회 저 -청구문화
사
 임상분자생물학 -고려의학