Transcript 웨스턴 블롯ppt B반 4조 (218Kbyte)

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김주연 201421007
고은경 201421016
김영경 201421017
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* 웨스턴 블롯이란?
* 웨스턴 블롯의 원리
* 검사기법과 연관시켜 어떻게
응용되어 실제로 쓰이는가?
* 항원결정기 (epitope)와 반응하는 항체의 성질을
이용 해서 단백질 복합물 중 특정 단백질을
확인하는 방법
* 찾고자 하는 단백질에 특징적으로 반응하는
항체와의 결합을 통해 검출하므로
면역전이 (immunoblotting) 라고도 함
* 1979년 H.Towbin에 의해 개발.
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* ①Protein Extraction(단백질 추출):
Cell 또는 조직에서 Protein을 추출해내는 과정
* ②Protein assay (단백질 정량)
분리해낸Protein의 농도를 측정.
* ③SDS-PAGE (SDS 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동법)
SDS buffer로(-) charge를 띄게 한 후(+) charge를 연
결해 Protein 분자량 별로 분리해내는 과정
* ④Transfer (전이)
gel내부의 단백질은 항원이 결합할 수 없기 때문에 항
원이 결합할 수 있는Membrane(막)으로size 별로 분리
된 단백질을 그대로 이동시키는 과정.
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* ⑤ Blocking
단백질의Transfer되지 않은 부분이 다른 단백질로 오염
되거나 antibody(항체)가 붙을 수 없도록Skim milk 나
BSA 등으로Block 해주는 과정.
* ⑥ 항원-항체반응
1차 항체를 넣어 특정 단백질과 반응시키고 1차 항
체의 결합 유무를 보기 위해 1차 항체와 결합할 수 있
는 2차 항체를 반응시킴.
* ⑦ Detection(검출)
2차 항체에 형광 반응 이나 효소 반응을 일으킬 수 있
는 보고자를 표지하여 반응을 확인.
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*가장 대표적으로는 HIV감염을 확실히 판단하기
위해 선별 검사에서 양성이 나오면 다시 확진검사
를 할 때 쓰인다. 우리나라에서는 질병관리 본부
에서만 이를 시행한다. 이 웨스턴 블롯법은 HIV가
만드는 여러 단백질에 대한 항체형성 유무를 확인
하는 방법이다. 그러므로 HIV가 체내에 침투한 수
인체 내에서 HIV에 대한 항체가 만들어 지기 까지
보통 6주가 걸리기 때문에 이 시기가 지나고 검사
를 해야 한다. 이 검사법은 특이도가 99% 이상으
로 높기 때문에 현재 세계 각국에서 HIV 감염확진
검사법으로 이용되고 있다.
출처* 임상분자 생물학/ 주)정문각
* (주)서린바이오사이언스
* 네이버 건강백과 국가건강정보포털 의학정보
http://terms.naver.com/entry.nhn?docId=2119886&cid=
51004&categoryId=51004#TABLE_OF_CONTENT5
* 국가건강정보포털
http://health.naver.com/medical/disease/detail.nhn?se
lectedTab=detail&diseaseSymptomTypeCode=AA&disea
seSymptomCode=AA000029&cpId=ja2
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