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Emoglobina glicata
Kit per la determinazione quantitativa della emoglobina A1c
(HbA1c) nel sangue intero su fotometro Spectra 8P - Metodo
diretto turbidimetrico al lattice – 2 Reagenti.
PRINCIPIO
L’emoglobina A1c (HbA1c) è un’emoglobina glicata che si forma dalla reazione
non-enzimatica del glucosio con l’emoglobina nativa. Questo processo avviene
continuamente durante il ciclo vitale delle cellule rosse (durata di vita media 100
– 120 giorni). Il tasso di glicazione è direttamente proporzionale alla
concentrazione del glucosio nel sangue. Il livello ematico di HbA1c rappresenta il
livello medio di glucosio nel sangue durante le precedenti 6 – 8 settimane (a
causa delle cinetiche del turnover degli eritrociti questo periodo è più influenzato
dal livello del glucosio che nelle settimane precedenti). Pertanto, HbA1c è adatta
al monitoraggio retrospettivo a lungo termine della concentrazione di glucosio nel
sangue in individui con diabete mellito. Studi clinici hanno dimostrato che
l’abbassamento del livello di HbA1c può aiutare a prevenire o ritardare
l’incidenza delle complicazioni tardive da diabete. Poiché la quantità di HbA1c
dipende anche dalla quantità totale di emoglobina, il valore riportato di HbA1c è
indicato come una percentuale della concentrazione totale dell’emoglobina.
Falsi valori bassi (HbA1c bassa nonostante alto livello di glucosio nel sangue)
possono verificarsi in soggetti con condizioni di ridotta sopravvivenza di cellule
rosse nel sangue (disfunzioni emolitiche) o significanti perdite recenti di sangue
(maggiore frazione di eritrociti giovani).
Falsi valori alti (HbA1c alta nonostante un normale valore di glucosio nel sangue)
sono stati riscontrati in casi di anemia da carenza di ferro (alta proporzione di
vecchi eritrociti). Queste circostanze sono state considerate nella interpretazione
clinica dei valori di HbA1c.
Questo metodo è basato sulla agglutinazione al lattice. HbA1c presente nel
campione è adsorbita sulla superficie delle particelle di lattice, la quale reagisce
con anti-HbA1c (reazione antigene-anticorpo). La turbidimetria causata
dall’agglutinazione del lattice è misurata a 660nm e la concentrazione di HbA1c
nel sangue intero si ricava dalla curva di calibrazione.
COMPOSIZIONE
R1: Lattice 25mmol/L, tampone 1,5%, Stabilizzante 0,95 g/L
R2: Tampone 15 mmol/L, Anti-HbA1c Anticorpo monoclonale murino 5,6 mg/dL,
Anti-topo IgG 12 mg/dL, Stabilizzante 0,95 g/L
PREPARAZIONE DEI REATTIVI
Reattivi liquidi pronti all’uso.
CONSERVAZIONE E STABILITÁ
Conservare il kit a 2-8°C. NON congelare i reattivi.
I reattivi sono stabili fino alla data di scadenza riportata in etichetta, se si evitano
contaminazioni ed evaporazioni e conservati al riparo dalla luce. I flaconi dopo
l’apertura sono stabili 30 giorni se conservati a +2°/+8°C.
CAMPIONI
Utilizzare sangue intero raccolto con EDTA. Scartare i campioni contaminati.
Per preparare il campione è necessario il Reattivo R3: soluzione emolisante.
Pipettare 20µl di sangue in 1000µl di R3 (già predosato in provetta), mescolare e
lasciar riposare per 5 minuti o fino a quando appare la lisi completa.
Il sangue intero è stabile 1 settimana a 2° - 8°C
L’emolisato è stabile 10 ore a 15° - 25°C e 10 giorni a 2° - 8°C.
VALORI DI RIFERIMENTO
%NGSP
%IFCC
%JDS
IFCC(mmol/mol)
4–6
3–4
4.3 – 5.8
20 - 42
Obiettivo della terapia
<7
<5
< 6.5
< 53
Modifica della terapia
>8
>6
>8
> 64
Non diabetici
I valori di riferimento sono da considerarsi indicativi in quanto ogni laboratorio
dovrebbe ricercare quelli della popolazione su cui opera. I risultati del test
dovrebbero essere interpretati unitamente alle informazioni derivanti dalle
valutazioni cliniche del paziente.
CONTROLLO DI QUALITÁ
E’ consigliabile, nell’esecuzione della metodica, utilizzare un siero di controllo i
cui valori di Emoglobina Glicata siano noti, per controllare la rispondenza dei dati
ottenuti con quelli previsti e validare di conseguenza i dati.
MATERIALI AUSILIARI
Materiali necessari non contenuti nel kit: soluzioni diluenti, vetreria e monouso,
sistemi di dosaggio e misurazione.
PRECAUZIONI ED AVVERTENZE
I reattivi contengono componenti inattivi, quali conservanti (sodio azide o altri),
tensioattivi etc. La concentrazione totale di questi componenti è inferiore ai limiti
riportati dalle Direttive CEE 67/548/EEC e 88/379/CEE e successive modifiche
sulla classificazione, imballaggio ed etichettatura delle sostanze pericolose. É
consigliabile tuttavia maneggiare il prodotto con cautela secondo le norme di
buona pratica di laboratorio
HbA1c
Evitare l’ingestione ed il contatto con pelle, occhi e mucose.
SMALTIMENTO RIFIUTI
Il prodotto deve essere smaltito secondo le locali normative in materia di gestione
dei rifiuti.
PROCEDIMENTO
Portare i reattivi a temperatura ambiente prima dell’uso. Cinetica a 37°C e
660 nm
OPERAZIONE PRELIMINARE: Per ottenere il campione, aggiungere 20 µl di
sangue intero raccolto con EDTA nella provettina contenente la soluzione
emolisante R3(1000 µl). Agitare ed attendere 5 min (o fino ad apparizione della
lisi completa).
1) Dispensare 300 µl di Reagente 1 in una delle cuvette in dotazione.
2) Preriscaldare per 60 secondi la cuvetta contenente reagente.
3) Aggiungere 10 µl di campione e agitare delicatamente per qualche secondo.
4) Incubare per 120 secondi nella camera di incubazione del fotometro e digitare
Enter.
5) Aggiungere 100 µl di Reagente 2 e agitare delicatamente per qualche
secondo.
6) Inserire la cuvetta nella cella di lettura e attendere la fine del periodo di
incubazione ( 256 secondi) per il risultato.
CALCOLO DEI RISULTATI
Il fotometro SPECTRA 8P esegue automaticamente il calcolo dei risultati che
verranno visualizzati sul display al termine della procedura automatica e dopo il
suono del beep. Tali risultati possono essere stampati tramite stampante termica
integrata allo strumento.
CALIBRAZIONE
I reattivi presenti nel kit sono già stati calibrati. I valori di calibrazione sono
contenuti nella Smart Card presente nel kit e sono validi solo per il lotto presente
sull’etichetta della Smart Card. Ogni Kit deve essere utilizzato con la propria
Smart Card in dotazione.
PRESTAZIONI DEL REATTIVO
Interferenze
Le seguenti sostanze normalmente presenti nel sangue producono una
deviazione inferiore al 10 % alle seguenti concentrazioni: Bilirubina (<50 mg/dl)
Bilirubina coniugata (<50 mg/dl) Trigliceridi (<2000 mg/dl) Acido. ascorbico (<60
mmol/l) RF (<250IU/ml) Emoglobina Carbamilata (<7,5 mmol/mol) Emoglobina
Acetilata (<5,0 mmol/mol). Nessuna interferenza osservata con Uremia,
intermedi labili(Schiff base), e le varianti di Emoglobina HbS e HbA2. Valori
elevati di HbF possono indurre a falsi valori bassi di HbA1c. L’alcolismo e
l’ingestione di grandi dosi di Aspirina possono indurre a risultati inconsistenti.
Linearità
La reazione è lineare per una concentrazione di HbA1c compresa tra 6 e 26 g/dl.
Precisione
Determinata su 20 replicati di 3 campioni a differente concentrazione di HbA1c.
Precisione “intra-Assay” (NELLA SERIE)
Campione1 Campione2 Campione3
Media%
3.50
8.07
11.4
DS%
0.05
0.11
0.21
CV%
1.37
1.36
1.80
Precisione “inter-Assay” (TRA LE SERIE)
Campione1 Campione2 Campione3
Media%
3.65
8.33
11.6
DS%
0.07
0.14
0.18
CV%
1.82
1.67
1.58
Sensibilità analitica
Soglia di sensibilità espressa dal metodo: 1% HbA1c.
Correlazione
Uno studio comparativo tra 109 campioni ha dato un fattore di correlazione
r = 0.995
BIBLIOGRAFIA
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Verlagsgesellschaft; 1998 p. 142-48.
Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tiez Textbook of
Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B. Saunders Company;1999. P.790-6
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Emoglobina glicata
HbA1c
SIMBOLOGIA
consultare le istruzioni per l’uso
Marchio CE (Dir. 98/79/CE)
temperatura di conservazione
Dispositivo medico-diagnostico in vitro
Fabbricante
CONFEZIONE EMOGLOBINA GLICATA
Ref.:
SPE21
Cont.
: 20 tests
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