实验五 氨基酸薄层层析实验 (4学时) 一、实验目的 1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的 使用方法位置 2.对氨基酸液测定 二、实验原理 • 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度 分开。 • 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固 定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组 分分离开。 • 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和 分配两个原理把物质分开。 • 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层 上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量 的目的。 三、实验步骤 1.薄层板的制备 在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学 号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸 湿，污染展层液。 称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌 成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上 （1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G 铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可 制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是 影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅 胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长 （或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。 制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、 光洁。 2.点样 已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸） 和未知氨基酸样品。 在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min 活化。 距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离 2cm。 先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl 容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl 分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴 第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm （滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作， 将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越 小越好。 注意：微量进 样器的吸头在 吸取A、B液 时，必须分别 放置，不可混 用。 在操作过程中，手必须干净，只能接触 玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话， 以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻 板点样点吹风。 样品滴加完后，将薄板置室温下风干， 以备展层。为避免薄层层析时的“边缘 效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄 层的左右两边各刮掉0.5cm。 3.展层 取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度 的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展 开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过 垫高前后缸底来调整液面深度。 4.显色 待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出， 标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ， 用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注 意要喷的细而均匀，不能有液滴。 待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min， 即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各 色斑中心点。 四、实验结果 各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系 数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的 速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的 速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。 移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特 定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。 用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中 心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待 测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。 溶质移动距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 • 计算Rf值： • • • • • • • 原点到溶剂前沿的距离： cm 标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值 色氨酸： cm Rf值： 。 丙氨酸： cm Rf值： 。 赖氨酸： cm Rf值： 。 样品提取液： cm Rf值： 。 写出未知样品是何物？要求画出薄板图 （做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ） 五、讨论分析 1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格 的硅胶板？ 2、显色过程中应注意哪些问题？ 3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出 每次的作用。 你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的 请分析失败的原因？ 注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一 次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘 干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）； 第三次显色（0.5h-1h）。 • 仪器和试剂 • 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵， 层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器， 0.5-10ul微量进样器，层析玻板。 • 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨 酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。 • 展开剂：正丁醇：乙酸：水.
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
Slide 18
实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
Slide 10
实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
Slide 18
实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
Slide 19
实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G
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实验五
氨基酸薄层层析实验
(4学时)
一、实验目的
1.掌握硅胶一般的制作方法、玻璃喷雾器的
使用方法位置
2.对氨基酸液测定
二、实验原理
• 利用混合物中各个成分在相界面的不同分布程度
分开。
• 流动相的液体从固定相的间隙中通过时，由于固
定相和流动相之间分配系数不同，使得流动相组
分分离开。
• 薄层层析是根据被分离物质的性质以适应吸附和
分配两个原理把物质分开。
• 把已知样品点在薄层上，把未知样品也点在薄层
上，用合适的溶剂展开，达到分离、鉴定和定量
的目的。
三、实验步骤
1.薄层板的制备
在洁净的玻板背面两侧要留出5cm的距离，标记班别、学
号、姓名，要标在玻板的中间，防止记号笔颜料被展层液浸
湿，污染展层液。
称取2g硅胶G，放入研钵中，加蒸馏水5ml，研磨1min，拌
成稀糊状后，迅速均匀地倒在已备好的干燥、洁净的玻板上
（1min内完成），手持玻板在桌上轻轻振动，使糊状硅胶G
铺匀，然后置桌面上，于室温下干燥过夜，上述2g硅胶G可
制5×20cm薄层板一块。制薄板时，研磨时间及加水比例是
影响所制薄板质量的关键。研磨时间太短（或加水过多）硅
胶G吸水膨胀不够，薄层易裂，不易铺匀；研磨时间太长
（或加水过少）硅胶G倒玻板上后，很快凝固，也不易铺匀。
制作成功的关键是速度要快！硅胶玻板从斜面对光下看均匀、
光洁。
2.点样
已知氨基酸样品（色氨酸、丙氨酸、赖氨酸）
和未知氨基酸样品。
在使用薄层板点样之前，要进行烘干5min
活化。
距玻板一端2cm处为点样线，样点之间距离
2cm。
先在圆点上轻轻做好2点标记，用0.5-10μl
容量的微量进样器吸取提取液（未知液）10μl
分3次点于B点上，必须在第一滴样品干后再滴
第二滴，样点扩散后的直径不超过2～3mm
（滴加次数视氨基酸浓度而言）。以同样操作，
将氨基酸标准溶液分别在A点上。点样圆点越
小越好。
注意：微量进
样器的吸头在
吸取A、B液
时，必须分别
放置，不可混
用。
在操作过程中，手必须干净，只能接触
玻板非点样端边缘，不要对着薄板说话，
以防唾液掉在板上，也不要用嘴对着玻
板点样点吹风。
样品滴加完后，将薄板置室温下风干，
以备展层。为避免薄层层析时的“边缘
效应”，可预先用刀片将薄层板上的薄
层的左右两边各刮掉0.5cm。
3.展层
取干净的层析缸一只，皿中注入约0.5cm深度
的展开剂，放入点了样的薄板后，密封层析缸，展
开方式为上行法。不要直接浸没点样点，可以通过
垫高前后缸底来调整液面深度。
4.显色
待展开剂上升到距玻板三分之二处，将薄板取出，
标好溶液前沿距离位置，用80℃烘箱烘干5min ，
用玻璃喷雾器将显色剂均匀地喷在薄板上，注
意要喷的细而均匀，不能有液滴。
待干后将薄板置60～80℃烘箱中显色1～2min，
即可显出各种氨基酸的层析斑点，然后标出各
色斑中心点。
四、实验结果
各种溶质因为分配系数不同，在两相分配的数量也不同，分配系
数大的溶质在静止相中分配的数量大且多，随着有机溶剂向前移动的
速度缓慢，而分配系数小的溶质在流动相中分配的数量较多，移动的
速度也快，所以各种溶质在层析中由于移动的速度不同可以彼此分开。
移动速度一般用移动速率Rf表示。一定条件下，特定的物质有特
定的Rf值（测量距离以原点或色斑的中心为界限）。
用尺量出原点（点样点）到溶剂前沿距离，量出原点到各色斑中
心点的距离，并计算各色斑的Rf值。根据标准氨基酸的Rf值，判断待
测液中的氨基酸种类。距离：色氨酸最远、丙氨酸中间、赖氨酸最近。
溶质移动距离
Rf =
原点到溶剂前沿的距离
• 计算Rf值：
•
•
•
•
•
•
•
原点到溶剂前沿的距离： cm
标准氨基酸溶液中各溶质移动距离和Rf值
色氨酸：
cm Rf值：
。
丙氨酸：
cm Rf值：
。
赖氨酸：
cm Rf值：
。
样品提取液： cm Rf值：
。
写出未知样品是何物？要求画出薄板图
（做成功或失败的都要画出来,也可拍照 ）
五、讨论分析
1、制作硅胶板应注意哪些问题？如何制作一块合格
的硅胶板？
2、显色过程中应注意哪些问题？
3、为什么硅胶板要用烘箱进行3次烘干？分别说出
每次的作用。
你做的板是否成功？能否准确计算Rf值？不成功的
请分析失败的原因？
注意：本实验时间较长，且需要分3次进行：第一
次做硅胶板（0.5h，至少要提前1天做成且要烘
干）；第二次点样（0.5h；展层时间需2h）；
第三次显色（0.5h-1h）。
• 仪器和试剂
• 主要仪器：离心机，烘箱，吹风机，研钵，
层析缸及培养皿，漏斗，玻璃喷雾器，
0.5-10ul微量进样器，层析玻板。
• 氨基酸标准溶液：色氨酸、丙氨酸、赖氨
酸各0.05 mol•L-1，溶于10%异丙醇中。
• 展开剂：正丁醇：乙酸：水 = 4 ：1 ：1
（体积比）
• 显色剂：1%水合茚三酮的丙酮溶液
• 吸附剂：硅胶G