Диагностические и терапевтические подходы с использованием нового СС хемокина CLTAP Грачёв Алексей Николаевич CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью Функции макрофагов в организме Детекция патогена Поддержание.
Download ReportTranscript Диагностические и терапевтические подходы с использованием нового СС хемокина CLTAP Грачёв Алексей Николаевич CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью Функции макрофагов в организме Детекция патогена Поддержание.
Диагностические и терапевтические подходы с использованием нового СС хемокина CLTAP Грачёв Алексей Николаевич CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью Функции макрофагов в организме Детекция патогена Поддержание концентраций цитокинов Координирование обновления тканей Стимуляция воспалительной реакции Уничтожение патогена Подавление нежелательных иммунных реакций Уничтожение трансформированных клеток Стимуляция системы приобретенного иммунитета Фагоцитоз апоптотических клеток и клеточного дебриса Стимуляция миграции и деления клеток Стимуляция ангиогенеза Подавление активности клеток иммунной системы CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью Возникновение макрофагов ассоциированных с опухолью (МАО) Опухоль привлекает моноциты периферической крови. МАО развиваются под воздействием цитокинов, производимых опухолевыми клетками и гипоксии, характерной для опухоли. Взаимодействие опухолевых клеток с макрофагами является важным факторов развития опухоли ТФРбета это один из ключевых факторов влияющих на развитие МАО VEGF M-CSF Хемокины CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью МАО - типичные макрофаги 2 типа Макрофаги ассоциированные с опухолью (МАО) поддерживают рост опухоли секретируя ростовые факторы и цитокины TGFb, EGF, CXCL8, CXCL12 МАО подавляют противоопухолевый иммунитет TGFb, IL-10 (Иммуносуппрессия) СCL17, CCL18, CCL22 (привлечение Т-клеток, не имеющих цитотоксической активности) МАО поддерживают ангиогенез VEGF МАО перестраивают внеклеточный матрикс: MMP, белки внеклеточного матрикса, трансглютаминазы МАО поддерживают миграцию опухолевых клеток: MMP, хемокины CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью CLTAP был обнаружен в макрофагах стимулированных ТФР бета TGFb CLTAP CC-chemokine Like TGFbeta Activated Protein •Нет гомологов на уровне белка •Нет гомологов на уровне мРНК •Нет консервативных доменов ID3 OLR1 HAMP LTA4H ALOX5AP Dex CD163 Stab1 CD14 TLR4 TLR2 SI-CLP CLTAP Фагоцитоз эндоцитоз IL-4 MMR FN1 bIGH3 MMP2 MMP12 TTG AMAC-1 IL-1ra IFNg NO H2O2 FcgR STAT1 MCP2 LPS TNFa IL-1b IL-12 IL-10 Перестройка Бактерицидная Продукция внеклеточного активность воспалительны матрикса х цитокинов Макрофаги 2-го типа (M2) Макрофаги 1-го типа (M1) CLTAP – маркер макрофагов, ассоциированных с опухолью Экспрессия CLTAP в макрофагах активируется только ТФР бета 9 8 7 control 6 5 4 +Dex 3 2 +Dex/TGFbeta 1 0 Control IL-4 IL-13 M-CSF GM-CSF Структура CLTAP в сравнении со структурой CCL25 CCL25 CLTAP Сигнальный пептид или трансмембранный участок Экспрессия CLTAP в различных тканях Экспрессия CCL25 в различных тканях Структура белка и высокая тканеспецифичность указывает на возможную принадлежность CLTAP к семейству СС-хемокинов Экспрессия мРНК CLTAP образцах почечноклеточной карциномы (GEO) Экспрессия CLTAP значительно снижена в образцах почечноклеточной карциномы Моноклональные антитела к CLTAP Получены моноклональные антитела к CLTAP (Клон 7A5) Антитела пригодны для проточной цитометрии (левая панель) и иммунофлуоресценции (средняя панель) Вестерн блоттинга (правая панель) Внутриклеточная окраска CHO - CHO+ A498 Caki-1 Caki-2 CLTAP локализован в везикулярных структурах Экспрессия CLTAP в почках CLTAP экспрессируется в клетках эпителия проксимальных канальцев Экспрессия мРНК CLTAP в почечноклеточной карциноме Относительная экспрессия 2.5 2 1.5 нормальная ткань опухоль 1 0.5 0 1 2 3 Во всех исследованных случаях обнаружена полная потеря экспрессии Экспрессия мРНК CLTAP в опухолях шейки матки 60 относительная экспрессия 50 40 нормальная ткань 30 опухоль 20 10 0 234 414 434 448 450 409 726 681 703 В отдельных случаях наблюдается повышение экспрессии CLTAP 734 Роль CLTAP в развитие опухолей Почечноклеточная карцинома • CLTAP участвует в регуляции апоптоза эпителиальных клеток • потеря экспрессии CLTAP ведет к устойчивости клеток к апоптозу Опухоли шейки матки • Повышенная экспрессия CLTAP является маркером количества МАО Перспективные диагностические стратегии 1. Стратегии •Исследование экспрессии CLTAP в различных опухолях с целью выявления МАО с высоким иммуносуппрессорным потенциалом •Ассоциация уровня экспрессии CLTAP с прогнозом заболевания 2. Методика Иммуногистохимический анализ экспрессии CLTAP в парафиновых срезах при помощи имеющихся антител. 3. Состояние проекта •Отработана методика, получены первые данные на клиническом материале. •Необходимо проведение широкомасштабных клинических исследований. Перспективная терапевтическая стратегия 1. Стратегия Активация апоптоза в клетках почечноклеточной карциномы за счет экспрессии рекомбинантного CLTAP. 2. Методика Внесение экспрессионного конструкта при помощи аденовирусов или иммунных нанолипосом. 3. Состояние проекта •Показано участие CLTAP в регуляции апоптоза в клетках почечноклеточной карциномы. •Получены конструкты, содержащие кодирующую последовательность CLTAP. •Необходима подготовка средства доставки (аденовируса или иммунных нанолипосом). Спасибо за внимание!