Transcript Snímek 1
Sledování rezistencí k antimikrobikům
používaných v chovech hospodářských
zvířat
MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D.
MVDr. Petr Šatrán, Ph.D.
MVDr. Tomáš Černý
MVDr. Ivana Kucharovičová
Doc. MVD. Jan Bardoň, Ph.D.,MBA
Mgr. Lucie Pokludová, Ph.D.
26. 5. 2015
Rezistence bakterií k antimikrobiálním látkám
Rezistence na AML je schopnost bakteriální populace přežít účinek inhibiční
koncentrace příslušného antimikrobního přípravku (definice WHO).
Přirozená rezistence (primární): zpravidla vůči určité AML, je dána druhem
bakterie a jejími přirozenými vlastnostmi bez genetických změn (např.
rezistence stafylokoků nebo anaerobů k aminoglykosidům, G- bakterie k
vankomycinu).
Sekundární rezistence (získaná): většina rezistencí, původně citlivá bakteriální
populace se stane rezistentní, vzniká v průběhu nebo následkem léčby
antimikrobiálními látkami jako důsledek různých genetických změn (mutace,
transfer genů rezistence).
Hodnocení antimikrobiální rezistence
Epidemiologická kritéria - cut-off hodnoty:
Koncentrace AML, která diferencuje bakteriální populaci bez mechanismů
rezistence k dané antimikrobiální látce (wild typ) od populace se získanými
mechanismy rezistence (non-wild type).
Klinická kritéria – breakpointy:
Inhibiční koncentrace AML, řadí bakterie podle očekávaného úspěchu terapie
mezi citlivé, středně citlivé nebo rezistentní k dané AML, pokud je dávkována
jak je doporučeno a nejsou žádné další faktory, které by mohly ovlivnit
výsledek.
Přítomnost získané rezistence u non-wild type populace nemusí vždy
znamenat selhání terapie. Proto hodnoty cut-off, které jsou často nižší než
breakpointy, nemají žádný klinický kontext.
Kontrola rezistencí bakteriálních patogenů
k antimikrobikům
Racionální použití antimikrobiálních látek
cílená léčba – identifikace patogena, antibiogram
Znalost dat spotřeby antimikrobiálních látek
detekce jejich nepřiměřeného používání – vymezení rizikových faktorů pro
výskyt antimikrobiálních rezistencí
Kontinuální monitoring rezistencí
identifikace rezistencí a determinace jejich změny úrovně,
trendy rezistencí (sledování v dlouhodobém měřítku)
Stanovení rezistencí patogenů k AML
Mezinárodní standardizované metody:
CLSI – veterinární i humánní medicína (USA)
EUCAST – hlavně humánní medicína, veterinární komise (Evropa)
CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute):
Veterina – dokumenty VET 01-A4 a VET 01-S2 – SOP a interpretační kritéria
pro veterinární patogeny a specifické veterinární AML
1.
2.
Diluční metody – stanovení minimálních inhibičních koncentrací (MIC)
AML pro daný patogen (mikrodiluční metoda)
Disková difúzní metoda (měření inhibičních zón kolem disků se známou
koncentrací AML)
Mikrodiluční metoda
Ve sloupcích je dvojková ředící řada
AML (v řádku A nejvyšší ředění)
MIC – odpovídá koncentraci AML v
první jamce, ve které je viditelně
inhibován růst bakterií
Výhody: umožňuje přesně stanovit
MIC testované AML, která je
podstatná pro dávkování AML
Nevýhody: časová a finanční
náročnost provedení
Monitorovací systémy rezistencí – Evropa a ČR
• Souhrnná data o rezistencích na AML cílových patogenů hospodářských
zvířat a údaje o jejich spotřebě shromažďovaná a vyhodnocovaná za
standardizovaných podmínek
• Evropa – DANMAP, SVARM, NORM-vet, GERM-vet, MARAN
• ČR – jednotný monitoring rezistencí cílových patogenů hospodářských
zvířat není prováděn, neexistuje legislativní podklad pro standardizaci a
harmonizaci diagnostických metod
Pilotní studie sledování rezistencí k
antimikrobiálním látkám
•
•
•
•
•
•
Od 1. 3. 2015 do 31. 12. 2015
Ministerstvo zemědělství ČR
Státní veterinární správa ČR
Státní veterinární ústavy – Praha, Jihlava, Olomouc
Výzkumný ústav veterinárního lékařství Brno
Ústav pro státní kontrolu veterinárních biopreparátů a léčiv
• Rezistence/citlivosti patogenních izolátů hospodářských zvířat jsou
stanovovány podle breakpointů na základě definování MIC
• Vyšetření je bezplatné, náklady hradí stát prostřednictvím Státní
veterinární správy do 1,5 mil. Kč
Cíle sledování rezistence k antimikrobikům u
veterinárně významných patogenů
• Vytvoření harmonizované normy sledování rezistencí
• Sjednocení vyšetřovacích metod testování citlivosti k antimikrobikům ve
veterinárních diagnostických laboratořích
• Sjednocení spektra použitých antimikrobiálních látek
• kvalitní výsledky využitelné v běžné klinické veterinární praxi
• monitorování různých typů rezistencí
• Sjednocení interpretační kritéria podle mezinárodně platných standardů
• Příprava doporučených terapeutických postupů
Metodika sledování citlivosti/rezistence
• Způsob a četnost odběrů vzorků a jejich přeprava (veterinární lékař)
• Zpracování vzorků v laboratoři a vyšetření citlivosti/rezistence na
srovnatelné úrovni ve všech zapojených laboratořích včetně odborné
interpretace výsledků (SVÚ Praha, Jihlava, Olomouc)
• Sběr, zpracování a vyhodnocení dat včetně zpětné vazby pro praxi (VÚVeL,
ÚSKVBL, SVS)
Sety pro stanovení MIC veterinárně
významných patogenů
• VÚVeL – vývoj a výroba setů pro stanovení MIC antimikrobiálních látek u
veterinárně významných patogenů hospodářských zvířat pro G-, G+ a
veterinárně specifické patogeny
– výběr antimikrobiálních látek k testování (dostupnost, vhodnost
použití)
– zvolit rozmezí testovaných AML (rozdělení podle citlivosti, požadavky
testování kontrolních kmenů)
• Každý set má originální zastoupení antimikrobiálních látek používaných v
praxi k léčbě bakteriálních infekcí u hospodářských zvířat
• Speciální sety pro růstově náročné bakterie (liší se v použitém médiu)
Sledované patogeny podle druhů zvířat
• Prasata:
Actinobacillus pleuropneumoniae, Pasteurella multocida, Escherichia coli (klinicky
významné izoláty), Streptococcus suis, Staphylocuccus hyicus;
• Skot:
Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida, Escherichia coli (klinicky významné
izoláty), Histophilus somni;
• Skot – mastitidy:
Streptococcus agalactiae, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus uberis,
Staphylococcus aureus, Escherichia coli (klinicky významné izoláty), Klebsiella spp.
(Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, aj., Raoultella spp.)
• Drůbež hrabavá:
Escherichia coli (klinicky významné izoláty), Pasteurella multocida, Enterobacter spp.,
Enterococcus spp., Staphylococcus aureus.
Testované antimikrobiální látky
• Gramnegativní bakterie (Enterocateriaceae)
ampicilin, cefotaxim, ceftiofur, cefchinom, cefalotin, tetracyklin, enrofloxacin, florfenicol,
trimethoprim/sulfamethoxazol, kolistin, marbofloxacin, apramycin, doxycyklin,
gentamicin, amoxicilin/klavulanová kyselina
• Grampozitivní bakterie (streptokoky, stafylokoky, enterokoky)
penicilin, ampicilin, ceftiofur, erythromycin, klindamycin, gentamicin,
trimethoprim/sulfamethoxazol, enrofloxacin, tetracyklin, florfenicol, rifampin, cefoxitin,
oxacilin
• Veterinárně specifické patogeny (respirační – Bo, Su a Streptococcus suis)
penicilin, ampicilin, ceftiofur, tulathromycin, tilmikosin, tiamulin, tetracyklin,
enrofloxacin, florfenicol, spektinomycin, doxycyklin, tildipirosin, gamithromycin
Dílčí výsledky
• Výsledky za první 2 měsíce sledování
• Celkem bylo vyšetřeno 357 kmenů
• Častý výskyt multirezistentních kmenů – až k antimikrobikům (koliformní
bakterie, Streptococcus suis)
• Mastitidy – nalezen 1 kmen MRSA
Gramnegativní bakterie (168)
Enterobacter
cloacae
Kraj
Středočeský
Enterobacter
spp.
Klebsiella
oxytoca
1
Jihočeský
3
Plzeňský
1
Klebsiella
Raoultella Escherichi Escherichia
pneumoniae terrigena a coli - Bo coli - Ga
Escherichia
coli - Su
Escherichia
coli - Ma
1
7
5
5
1
1
5
5
6
3
6
1
2
1
5
3
Karlovarský
2
Ústecký
Liberecký
4
Královéhradecký
1
3
Pardubický
7
Vysočina
4
6
1
11
Jihomoravský
5
8
5
Olomoucký
2
1
4
6
9
4
2
6
3
52
41
45
12
Moravskoslezský
2
1
2
Zlínský
2
celkem
4
2
8
2
2
5
Grampozitivní bakterie (125)
E.
durans
Kraj
Středočeský
Jihočeský
1
Plzeňský
E.
faecalis
E.
faecium
4
1
1
1
E.
hirae
E.
Str.
gallinarum agalactiae
Str.
dysgalactiae
2
1
1
Str.
uberis
S. aureus
- Ma
S. aureus
- Ga
S.
hyicus
1
2
1
1
7
4
1
5
2
3
Karlovarský
Ústecký
4
1
Liberecký
1
Královéhradecký
2
1
1
Pardubický
Vysočina
1
1
Jihomoravský
2
1
1
Moravskoslezský
1
1
1
1
16
6
4
1
2
3
2
7
11
4
4
3
10
5
1
3
2
1
11
43
30
2
1
1
1
Zlínský
celkem
1
2
Olomoucký
2
4
4
4
Veterinárně specifické patogeny (64)
Actinobacillus
Histophilus
pleuropneumoniae somni
Kraj
Středočeský
Mannheimia
haemolytica
3
Jihočeský
3
Streptococcu Pasteurella
s suis
multocida - Bo
3
2
2
Pasteurella
multocida Su
3
1
Plzeňský
2
4
Karlovarský
Ústecký
Liberecký
1
Královéhradecký
Pardubický
5
Vysočina
7
Jihomoravský
2
2
1
1
Olomoucký
2
Moravskoslezský
5
2
4
1
4
4
Zlínský
celkem
15
5
8
7
21
8
Escherichia coli – Bo – 52 izolátů
Antimikrobiální látka
ampicilin
cefotaxim
ceftiofur
cefalotin
cefchinom
tetracyklin
enfofloxacin
florfenikol
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
kolistin
marbofloxacin
apramycin
doxycyklin
gentamicin
amoxicilin/kyselina klavulanová 2/1
C
I
R
(%)
(%)
(%)
36,5
78,8
90
42,3
86,5
30,7
82,7
53,8
53,8
94,2
90
94,2
38,5
78,8
36,5
0
27
5,8
0
11,5
0
4,2
7,7
2
-
63,5
21,2
10
30,7
7,7
69,3
5,8
46,2
46,2
5,8
5,8
5,8
53,8
19,2
63,5
Escherichia coli – Su – 45 izolátů
Antimikrobiální látka
ampicilin
cefotaxim
ceftiofur
cefalotin
cefchinom
tetracyklin
enfofloxacin
florfenikol
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
kolistin
marbofloxacin
apramycin
doxycyklin
gentamicin
amoxicilin/kyselina klavulanová 2/1
C
I
R
(%)
(%)
(%)
51
86,7
88,9
44,4
91,1
55,6
82,2
53,3
82,2
100
91,1
97,8
51,1
100
51,1
0
20
6,7
0
8,9
0
0
15,6
-
49
13,3
11,1
35,6
2,2
44,4
8,9
46,7
17,8
0
8,9
2,2
33,3
0
48,9
Escherichia coli – Ga – 41 izolátů
Antimikrobiální látka
ampicilin
cefotaxim
ceftiofur
cefalotin
cefchinom
tetracyklin
enfofloxacin
florfenikol
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
kolistin
marbofloxacin
apramycin
doxycyklin
gentamicin
amoxicilin/kyselina klavulanová 2/1
C
I
R
(%)
(%)
(%)
53,7
90,2
90,2
51,2
95,1
68,3
39
87,8
85,4
100
80,5
97,5
68,3
95,1
56,1
0
19,5
0
2,5
36,6
0
0
9,7
0
-
46,3
9,8
9,8
29,3
4,9
29,5
24,4
12,2
14,6
0
19,5
2,5
22
4,9
43,9
Escherichia coli – Ga – 12 izolátů
Antimikrobiální látka
ampicilin
cefotaxim
ceftiofur
cefalotin
cefchinom
tetracyklin
enfofloxacin
florfenikol
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
kolistin
marbofloxacin
apramycin
doxycyklin
gentamicin
amoxicilin/kyselina klavulanová 2/1
C
I
R
(%)
(%)
(%)
100
100
100
16,7
100
83,3
100
33,3
100
100
100
100
100
100
91,7
0
58,3
0
0
0
0
0
0
0
-
0
0
0
25
0
16,7
0
66,7
0
0
0
0
0
0
8,3
Ostatní G- bakterie
• Klebsiella oxytoca: 8 izolátů, téměř 90 % rezistentních k ampicilinu a k
amoxicilinu s kyselinou klavulanovou, 25 % rezistencí ke ko-trimoxazolu
• Klebsiella pneumoniae: 2 izoláty, oba rezistentní k ampicilinu a amoxicilinu
s kys. klavulanovou, 1 rezistentní k tetracyklinu, doxycyklinu a florfenikolu,
u 1 izolátu snížená citlivost k enrofloxacinu
• Raoultella terrigena: 2 izoláty, oba rezistentní k tetracyklinu a doxycyklinu
• Enterobacter cloacae: 4 izoláty, 100 % rezistence k ampicilinu, amoxicilinu
s kyselinou klavulanovou, cefalotinu, cefotaximu, 75 % rezistentních k
florfenikolu, 50 % rezistentních k tetracyklinu, marbofloxacinu,
enrofloxacinu a ceftiofuru
• Enterobacter spp: 2 izoláty, oba rezistentní k ampicilinu a amoxicilinu s
kyselinou klavulanovou, 1 rezistentní k cefalotinu a cefchinomu, u 1 izolátu
snížená citlivost k enrofloxacinu
Staphylococcus aureus – Ma – 30 izolátů
Antimikrobiální látka
C
I
R
(%)
(%)
(%)
penicilin
60
-
40
ampicilin
50
-
50
ceftiofur
83,3
13,4
3,3
erytromycin
96,7
0
3,3
klindamycin
90
3,3
6,7
gentamicin
80
-
20
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
100
0
0
enrofloxacin
100
-
0
tetracyklin
90
0
10
florfenikol
90
-
10
rifampicin
76,7
23,3
0
cefoxitin
96,7
-
3,3
oxacilin
76,7
-
23,3
Streptococcus uberis – Ma – 43 izolátů
Antimikrobiální látka
C
I
R
(%)
(%)
(%)
penicilin
100
0
0
ampicilin
100
0
0
ceftiofur
100
0
0
erytromycin
86,1
2,3
11,6
klindamycin
58,1
-
41,9
gentamicin
83,7
-
16,3
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
97,7
2,3
0
tetracyklin
48,8
4,6
46,6
florfenikol
90,7
-
9,3
rifampicin
14
81,4
4,6
100
-
-
enrofloxacin
cefoxitin
oxacilin
Streptococcus dysgalactiae – Ma – 11 izolátů
Antimikrobiální látka
C
I
R
(%)
(%)
(%)
100
-
0
100
0
0
81,8
0
18,2
100
0
0
tetracyklin
9,1
27,3
63,6
florfenikol
100
-
0
rifampicin
72,7
23,3
0
penicilin
ampicilin
ceftiofur
erytromycin
klindamycin
gentamicin
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
enrofloxacin
cefoxitin
oxacilin
Enterococcus faecalis Ga – 16 izolátů
Antimikrobiální látka
C
I
R
(%)
(%)
(%)
penicilin
87,5
-
12,5
ampicilin
93,8
-
6,2
43,8
12,4
43,8
gentamicin
87,5
-
12,5
trimethoprim/sulfamethoxazol 1/19
62,5
37,5
0
enrofloxacin
100
-
0
tetracyklin
25
0
75
florfenikol
100
-
0
rifampicin
6,3
25
68,7
ceftiofur
erytromycin
klindamycin
cefoxitin
oxacilin
Ostatní G+ bakterie
• Staphylococcus aureus Ga: 2 izoláty, 1 izolát (50 %) rezistentní k penicilinu
a ampicilinu
• Staphylococcus hyicus: 5 izolátů, 80 % rezistentních k penicilu a ampicilinu,
60 % rezistentních k tetracyklinu
• Streptococcus agalactiae: 4 izoláty, jeden rezistentní k tetracyklinu
• Enterococcus durans: 1 izolát, rezistentní k enrofloxacinu, tetracyklinu a
rifampinu
• Enterococcus faecium: 6 izolátů, 1 rezistentní k ampicilinu a rifampinu, 3
rezistentní k penicilinu a 4 rezistentní k erytromycinu a tetracyklinu
• Enterococcus gallinarum: 4 izoláty, 50 % rezistentní k erytromycinu a
rifampinu, 25 % rezistentní k tetracyklinu
• Enterococcus hirae: 4 izoláty, 25 % rezistentních k erytromycinu,
enrofloxacinu, tetracyklinu a rifampinu
VSP – Actinobacillus pleuropneumoniae – 15 izolátů
Antimikrobiální látka
C
I
R
(%)
(%)
(%)
ampicilin
86,7
0
13,3
ceftiofur
86,7
0
13,3
tulatromycin
100
0
0
tilmikosin
46,7
-
53,3
60
-
40
tetracyklin
86,7
0
13,3
enrofloxacin
86,7
0
13,3
florfenikol
86,7
0
13,3
0
0
100
doxycyklin
86,7
-
13,3
tildipirosin
20
-
80
penicilin
tiamulin
spektinomycin
gamitromycin
VSP – Pasteurella multocida – Bo – 21 izolátů
Antimikrobiální látka
C
I
R
(%)
(%)
(%)
penicilin
100
0
0
ampicilin
100
-
0
ceftiofur
100
0
0
100
0
0
81
9,5
9,5
enrofloxacin
95,2
4,8
0
florfenikol
100
0
0
spektinomycin
90,5
9,5
0
doxycyklin
81
-
19
tildipirosin
100
0
0
gamitromycin
100
-
0
tulatromycin
tilmikosin
tiamulin
tetracyklin
Ostatní VS patogeny
• Pasteurella multocida Su: 8 izolátů, 2 rezistentní k tiamulinu, 1 rezistentní
k tetracyklinu a tildipirosinu, 1 středně citlivý k tiamulinu a tetracyklinu
• Histophilus somni: 5 izolátů, jeden izolát rezistentní k teracyklinu,
doxycyklinu a enrofloxacinu, 1 izolát středně citlivý k penicilinu
• Mannheimia haemolytica: 8 izolátů, 50 % rezistentních k penicilinu a
ampicilinu, 25 % středně citlivých k penicilinu a tetracyklinu
• Streptococcus suis: 7 izolátů, 1 rezistentní ke spektinomycinu, 2 rezistentní
k enrofloxacinu a tiamulinu, 6 rezistentních k doxycyklinu a všechny
rezistentní k tetracyklinu, 2 izoláty středně citlivé k tiamulinu
Děkuji za pozornost