Transcript Profil N° 62 FINANCEMENT Demandé Acquis Fiche Résumé du

Profil N° 62
FINANCEMENT Demandé
Acquis
Fiche Résumé du sujet de thèse 2014
Champs disciplinaire Autres et Autres
Titre de la thèse : (1-2 lignes)
Le rôle d'Exosc10 au cours de la gamétogenèse chez la souris
3 mots-clés : (1 ligne)
Exosc10 / knockout conditionnel / spermatogenèse
ACRONYME
EXOGAM
Unité/équipe encadrante :
Inserm U1085/Equipe " Réseaux transcriptionnels en gamétogenèse et cancer"
Nom du responsable scientifique
Soazik Jamin
nom du codirecteur le cas échéant :
Fabrice Petit
Contact :
[email protected]
Contexte socioéconomique et scientifique : (10 lignes)
L'objectif principal est de déterminer le ou les rôles de Exosc10 au cours de la
gamétogenèse dans le modèle murin. Exosc10 est une protéine de l'exosome très
conservée au cours de l'évolution impliquée dans la modification et la dégradation de
transcrits codants et non-codants dans le noyau et le cytoplasme. Par ailleurs, de
nombreux ARN non codants (notamment les longs ARN non codants ou lncARN) sont
exprimés dans le testicule. L’originalité de ce projet repose sur le fait qu’une protéine
de l’exosome pourrait avoir un rôle important dans la spermatogenèse et la fertilité
masculine en influençant les niveaux d’ARNm et d’ARN non codants (ARNnc). De plus,
cette approche pourrait mettre en évidence des ARNm et surtout des ARNnc impliqués
dans le développement des cellules germinales.
Les hypothèses et questions posées (8 lignes)
Notre hypothèse de travail est qu'Exosc10 soit essentiel pour la transition entre la
croissance mitotique et la différentiation méiotique. Cela pourrait impliquer la
dérégulation des lncRNAs y compris certains qui joueraient un rôle important dans des
processus biologiques clefs de la lignée germinale comme la recombinaison, la
suppression de la phase S entre les divisons méiotiques, la régulation de l'expression
des gènes, les modifications de la chromatine avant et pendant la spermatogenèse, et
la production des ribosomes dans les cellules germinales.
Les grandes étapes de la thèse et démarche (10-12 lignes)
La thèse se déroulera en trois étapes majeures : 1) génération et analyse des souris
mutantes conditionnelles pour Exosc10 par la technique du Cre-lox 2) identification des
ARNm et des longs ARN non codants dépendants de la protéine Exosc10 par une
approche de RNA-seq 3) caractérisation fonctionnelle de nouveaux longs ARN non
codants régulateurs important pour la différenciation méiotique.
L'équipe dispose de toutes les lignées murines nécessaires à la génération de souris
mutantes conditionnelles ou cKO (Exosc10+/-, Exosc10fx, Stra8-cre et Vasa-cre).
Après avoir généré les souris cKO pour Exosc10 dans les spermatogonies et les
spermatocytes, la fertilité des mâles sera étudiée de façon très précise (suivi des
portées, recherche des marqueurs, dosages hormonaux ...). Une analyse globale du
transcriptome sera réalisée par RNA-seq ce qui permettra d'identifier de nouvelles
cibles de la protéine Exosc10. Ces cibles seront ensuite étudiées au niveau fonctionnel.
Approches méthodologiques et techniques envisagées (4-6 lignes)
Les approches méthodologiques seront nombreuses. Le sujet nécessite de réaliser des
croisements de différentes lignées murines, les génotyper, les analyser à des temps
définis (fertilité principalement). Des analyses histologiques, immunohistochimiques
seront nécessaires pour déterminer le défaut de spermatogenèse. Enfin des analyses
transcriptomiques (RNA-seq) et fonctionnelles seront réalisées pour définir les cibles
(ARNm ou lncARN) de la protéine Exosc10.
Compétences scientifiques et techniques requises par le candidat (2 lignes)
Le candidat devra avoir des compétences en biologie cellulaire et moléculaire. Il devra
également apprendre à travailler avec le modèle murin.