Transcript Enzim_Pullulanase

Oleh:
Riong Seulina Panjaitan (20511313)
Nelson Gaspersz
(20512021)
 Klasifikasi Enzim
 Mekanisme Reaksi Enzim
 Isolasi, Pemurnian dan Karakterisasi Enzim
 Struktur 3D Enzim Pullulanase
 Inhibitor Enzim
 Kegunaan dan Aplikasi Enzim
 Klasifikasi Enzim
EC. 3. 2. 1. 41
Pullulanase
Pada senyawa pullulan, pati dan
amilopektin
Menghidrolisis ikatan
glikosida
Kelas
Hidrolase
Recommended Name: pullulan 6-glucanohydrolase
Synonim Name:
 α-dextrin endo-1,6-α-glucosidase
 amylopectin 6-glucanohydrolase
 limit dextrinase
Pullulanase
Inkubasi, t= 24 jam, T
=37 oC, diinduksi dengan
IPTG pada 600 nm
kultur inokulasikan
dalam media LB 500 mL
Kultur
bakteri
Supernatan :
dimurnikan dan uji
aktivitas enzim
ekstraseluler
Sentrifugasi
pada 6000 rpm,
t=20 menit,
T=4oC
pellet
Sentrifugasi
14000 rpm, t=30
menit, T=4oC
Sonikasi
Supernatan :
dimurnikan dan uji
aktivitas enzim
intraseluler
Buffer trisHCl pH 8,1
Crude
Extract
Supernatan :
fraksinasi
Amonium Sulfat
60 % dan
sentrifugasi
Sentrifugasi
pellet
Enzim
Pullulanase
Dialisis dengan
buffer
Supernatan
Pellet
dilarutkan
buffer
tris-HCl
Protein dialirkan ke
dalam kolom dan
dielusi dengan garam
500 µL pullulan 1
% + 450 µLbuffer
asetat 0,2 M pH
5,4 dibiarkan
selama 15 menit
∑ Gula
pereduksi
diukur dengan
kurva standar
glukosa
+ 50 µL enzim
inkubasi T= 37°C
t= 4 menit
absorban diukur
540 nm
+ 1 mL pereaksi
DNS
campuran
divorteks,
didihkan, t=5
menit
Analisis Berat
Molekul
SDS-PAGE
Kristalisasi dan
Penentuan
Struktur 3D
dengan XRD
Tabel Hasil Pemurnian Enzim
SDS-PAGE Enzim
Struktur Enzim Pullulanase
Struktur Kristal Enzim Pullulanase
Struktur 3D Enzim Pullulanase
Inhibisi Enzim
Mekanisme Inhibisi Enzim dapat dibagi 2 yaitu:
1. Inhibisi reversibel
• Membentuk kompleks enzim inhibitor yang meningkatkan
laju reaksi
2. Inhibisi irreversibel
• Membentuk senyawa yang stabil dengan enzim melalui
ikatan kovalen dengan residu asam amino pada sisi aktif
Enzim ini dapat menginhibisi produk dan sustrat :
• Untuk inhibisi substrat  banyak substrat yang dapat
digunakan oleh organisme ketika konsentrasi enzim
rendah dan ketika konsentrasi enzim tinggi substrat dapat
bertindak sebagai inhibitor pertumbuhan yang beracun
• Untuk inhibisi produk  Inhibisi produk akan meningkat ketika
produk mengikat enzim bebas dan memblok akses ke substrat.
Sehingga enzim ini bersifat sebagai inhibitor kompetitif
Kegunaan dan Aplikasi Enzim
Industri
Aplikasi
Pengolahan Pati
Sirup Fruktosa
Sirup Maltosa, Maltotriosa
Pemanis makanan
Pembuatan Bir
Pada pembuatan malt bir
Produksi Alkohol
Produksi Etanol, butanol,
aseton
Pembuatan Roti
Mengubah pati menjadi gula
fermentasi
Tekstil
Pada proses pembuatan kain
katun untuk memperkuat
benang dan men cegah
kerusakan pada proses
penenunan
Detergen
Sebagai aditif pada detergen
pencuci piring dan pakaian
REFERENSI
Malle, D., T. Itoh, W. Hashimoto, K. Murata, S. Utsumi and B.
Mikami, 2006, Overexpression, purification and preliminary X-ray
analysis of pullulanase from Bacillus subtilis strain 168, Acta
Cryst. (2006). F62, 381-384.
Singh, Ram S., G. K. Saini, J. F. Kennedy, 2010, Maltotriose syrup
preparation from pullulan using pullulanase, Carbohydrate
Polymers 80 (2010) 401–407.
Zhang, H., Y. Tian, Y. Bai, X. Xu, Z. Jin, 2012. Structure and
properties of maize starch processed with a combination of αamylase and pullulanase. Int. J. Biol. Macromol. 3407 (2012) 1-7.