Transcript 实验5 分光光度法测定青菜中的叶绿素

实验5 分光光度法测定青菜中
的叶绿素
江南大学《食品化学》课程小组
2015/4/12
江南大学《食品化学》课程小组
一、目的
了解叶绿素的分子结构、性质，理解叶绿
素性质不稳定的根源，从而提高解决青菜
类蔬菜在加工、储藏等过程中出现问题的
能力。
掌握食品中某些有效成分的提取、分离以
及测定方法。
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二、仪器及材料
天平、组织捣碎机、水循环真空泵、抽滤
瓶、滤纸、布氏漏斗、容量瓶（1000 mL、
100 mL）、分液漏斗2个、尖嘴管、铁架台、
铁圈2个、分光光度计；
青菜叶、碳酸钙、丙酮（80%）、乙醚、
无水硫酸钠。
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三、原理
组织破碎 叶绿素丙
青菜叶
酮溶液
转移叶绿素乙
醚溶液
测定
含量
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吸光度
总叶绿素 = 7.12 A660.0＋16.8 A642.5
叶绿素a = 9.93 A660.0－0.777 A642.5
叶绿素b = 17.6 A642.5－2.81 A660.0
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四、实验步骤
青菜叶+ CaCO3 +丙酮，捣碎
匀浆抽滤
85%丙酮洗涤残渣
滤液
定容
洗去丙酮
滤液
比色，计算叶绿素含量
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乙醚萃取
定容
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五、注意事项
使用乙醚萃取时，需在通风橱中操作，实验前
检查好分液漏斗的密封、通畅性，萃取时勿激
烈振摇，以防产生乳化层
叶绿素遇光照和高温不稳，在提取过程中必须
控制好这些因素，尽可能在低温、弱光下进行，
并缩短实验时间，防止叶绿素的破坏
使用分光光度计时，先要预热；测定时要用乙
醚作空白
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六、思考题
1、测定叶绿素a、b含量为什么要选用红光的波长？
2、在破碎青菜叶组织时，为什么要加入碳酸钙或碳
酸钠？
3、为什么叶绿素测定时应尽量可能在低温和避光的
条件下进行？
4、叶绿素a和叶绿素b的结构有何不同？
5、叶绿素在酶、热、酸的作用下会发生什么变化？
2015/4/12
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