Universidad de Chile Facultad de Medicina Curso Histopatología 2007

Tinción Histológica

Tutora: TM Solange Zapata Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz 3 de Mayo del 2007

Técnica Histológica

  Fijación Deshidratación   Aclaramiento Inclusión   Corte

Tinción



Montaje

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Tinción y Montaje

    Corte Desparafinado – Rehidratación Tinción Deshidratación  Montaje  Cubreobjetos: funciones   Protección del tejido ↓ refracción de luz polarizada

Colorantes

 ¿Por qué colorear una muestra?

Los diversos elementos de los tejidos prácticamente el poseen

mismo índice de refracción

, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil.

Definición de Colorante

  Un colorante es un puede

cuerpo coloreado comunicar su color

a otro cuerpo.

que La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una

absorción selectiva sobre la luz

. Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por transparencia o por difusión las radiaciones complementarias de las que él absorbe.

Tipos de Colorantes

 Colorantes que diferencian los componentes

ácidos y básicos

de la célula.

 Colorantes especializados que distinguen los

componentes fibrosos

de la matriz extracelular.



Sales metálicas

y forman que se precipitan en los tejidos depósitos de metales en ellos.

Tipos de Coloraciones



Directas

: se producen por colorante.

inmersión en el baño 

Indirectas

: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama

mordiente.

Fundamentos Químicos de la Coloración  Clasificación colorantes según afinidad:    Colorantes nucleares o básicos : su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos.

Colorantes activo es un citoplasmáticos o ácidos : su componente ácido coloreado que se combina con el citoplasma.

Colorantes neutros , tanto el coloreadas.

ácido como la base son

Colorantes básicos

ANILINA + Cl -

 Los colorantes GRUPOS básicos reaccionan con los ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los

ácidos nucleicos

(ADN y RNA), los grupos SULFATO de los

glucosaminoglucanos

GRUPOS CARBOXILO de las

proteínas

reacción de estos grupos varía según el pH.

y los . La

Colorantes ácidos

Na + ANILINA -

 Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes enlaces texturales por medio de electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas catiónicos, como los reaccionan con

grupos amino

de las proteínas.

grupos

ionizados

Entonces:

 Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son

basófilos :

 La Heterocromatina y los Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados.

  Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados. Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados  Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son

acidófilos

:   La mayor parte del citoplasma no especializado.

Filamentos Citoplasmáticos.

 Fibras extracelulares. Todos estos debidos a grupos Amino ionizados.

Metacromasia

  Fenómeno por el cual un colorante

cambia de color tras reaccionar con un componente textural .

Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de

POLIANIONES

, la molécula del colorante se polimeriza entre si y sus propiedades de absorción son diferentes de las propiedades de las moléculas individuales.

Cromótropos:

al teñir amiloide Glucosaminoglucanos sulfatados, nucleoproteínas, cartílago, gránulos de los mastocitos. El cristal violeta también genera metacromasia Azul de Toluidina tiñe gránulos mastocito púrpura

Tinción (coloración) de cortes

 Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.

Tinción (coloración) de cortes

Hematoxilina-Eosina

Técnica de tinción más usada.

 Hematoxilina:    Colorante natural.

Propiedades similares a las anilinas básicas.

Tiñe todas las estructuras celulares, pero principalmente el núcleo (Histonas).

 Eosina:    Colorante ácido.

Acción es la de una anilina ácida.

Tiñe ppalmente citoplasma celular.

Cortes de piel Tinción Hematoxilina-Eosina

Técnica de Tinción H/E

 Tinción con hematoxilina.

 Lavado con abundante agua.

 Aplicar Borato de Potasio.

 Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al azul.

 Aumenta el contraste de color.

Técnica Tinción H/E II



Diferenciación:

   Eliminación selectiva del exceso de colorante.

Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido.

Resalta núcleos.



Azuleamiento

:  La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso  Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de litio al 1% en agua.

 Eosina  Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y colágeno y fibras musculares rosado pálido.

Cubre-objeto

 Una vez teñido el tejido debe ser protegido con un cubre-objeto.

 Deshidratar  Medio de montaje

Limpieza de láminas

Análisis de placas

TÉCNICAS ESPECIALES ± 10% biopsias DIAGNÓSTICO 80-90% bp

Tinciones Especiales

Tinciones para Amiloide

H/E Rojo Congo (cortes ± 30 m m)

Tinciones para Amiloide

Birrefringencia

Bacterias

a b a y b Gram positivos: tinción azul c c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas d d FITE: bacilos ácido resistentes se tiñen rojo

Bacterias II

Ambas placas con tinción Ziehl Neelsen Bacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante

Calcio

Von Kossa-Azul Toluidina Von Kossa: depósitos de calcio Se tiñen café oscuro-negro

Colágeno I

: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural a b b a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e e Van Gieson: colágeno I rojo c d c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

Colágeno III

: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras

Eosinófilos

Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

Fibras elásticas

HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa: fibras de coloración pardo oscura

Fibrina

ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro También PAS

b

Hemosiderina

a a Gránulos de Hemosiderina sin teñir, de colora ción amarillo-café

birrefringentes

b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul

b

Hongos

a a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea c Tinción de PAS evidenciando Blastomicosis b b PAS para Criptococo (rojo)

Hongos II

c Tinción de Gomori para Criptococo

a

a PAS esporas fungicas b PAS Coccidiomicosis en ambas, hongos se tiñen rojos b

c

Lípidos sólo en tj fijado en formalina + cortes por congelación a a Sudan IV: adipocitos anaranjados c c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

Mastocitos

ambas, Tinción con Azul de Toluidina: gránulos de Mastocitos azul-púrpura (metacromasia)

Mastocitos

ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de los Mastocitos son teñidos púrpura

Melanina

ambas, Tinción de Fontana Masson pigmento melánico se tiñe negro

Principales colorantes

Tricrómico de Masson  Principal Uso: Colágeno.

 Tiñe:  Colágeno  Verde.

 Núcleo, músculo y nervios  Rojo oscuro.

 Citoplasma  amarillo

Van Gieson  Principal Uso: Tejido Fibroso  Tiñe:  Colágeno  rojo.

 Núcleo  azul negro  Músculos, nervios  amarillos  (+Verhoeff) fibras elásticas  negro

Fontana Masson  Principal Uso: Melanina  Tiñe:  Melanina  Negro.

Plata Metenamina  Principales Usos: Hongos y Cuerpos de Donovan  Tiñe:  Paredes micóticas  Negros.

 Cuerpos de Donovan  negro

PAS  Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal.

 Tiñe:  Glucógeno  Diastasa lábil.

 MPS neutros y Paredes micóticas  Diastasa resistentes.

 Reacción

positiva para glucógeno y polisacáridos neutros

.

 Reacción positiva

sólo para polisacáridos neutros.

+ DIASTASA

Azul alcián  Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos  Tiñe  Mucopolisacáridos ácidos (mucina)  Azul.

Azul de toluidina  Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos  Tiñe  Mucopolisacáridos ácidos  Purpura metacrómico.

Giemsa  Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea  Tiñe:  Gránulos mastocitarios, Mucopolisacaridos ácidos  Púrpura.

 Eosinófilos, leishmanias  Rojo.

Eosinófilos en mucosa gástrica

Ferrocianuro de Potasio de Perls.

 Principal Uso: Hemosiderina  Tiñe:  Hemosiderina  Azul

Rojo Congo

 Principal Uso: Amiloide.

 Tiñe  Sustancia amiloide  Roja con luz, Verde con luz polarizada

Von Kossa  Principal Uso: Calcio  Tiñe:  Calcio  Negro.

Naftol AS-D cloroacetato esterasa  Principal Uso: Mastocitos y Neutrófilos  Tiñe:  Gránulos de mastocitos y neutrófilos  Rojo

Orceína ácida de Pinkus/Giemsa

 Principal Uso: Fibras elásticas.

 Tiñe:  Fibras elásticas  Pardo oscuro.

Histopatología es como la espada del augurio hacen ver

más allá de lo evidente