Transcript 本科实验二

医学微生物学
实验二
细菌的生理学
主要内容：
• 1、上次实验结果观察
• 2、培养基的制备
• 3、R质粒（耐药性）接合传递试验
• 4、药敏试验
• 5、高温对细菌的杀灭作用
• 6、高压灭菌器的使用
• 7、细菌接种培养法
培养基的制备
什么是培养基？
培养基是用人工将多种必
要的营养物质按微生物生
长繁殖的需要而合成的一
种混合营养料，用以分离
和培养微生物。
培养基的分类
• 1、按用途分为：基础培养基、
特殊培养基、选择培养基、鉴
别培养基
• 2、按坚度分为：液体培养基、
半固体培养基、固体培养基
液
体
培
养
基
固
体
培
养
基
（
平
板
）
固
体
培
养
基
（
血
平
板
）
固
体
斜
面
培
养
基
主要材料：
•牛肉膏、蛋白胨、氯化
钠、水、琼脂、（氢氧
化钠、酚红指示剂、标
准比色管）
液体培养基制备方法：
• 1、将牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g
加入1000ml水中，用玻棒搅拌使其溶解，
必要时加热促其溶解。
• 2、用氢氧化钠调整酸碱度至pH7.2
• 3、调整后，煮沸10分钟，补足失水，以
滤纸过滤使其澄清。
• 4、分装后，高压蒸气103.4kPa灭菌20分
钟
固体培养基制备方法：
• 1、在100ml牛肉汤培养基内加入琼脂2g
（即2%琼脂）
• 2、高压蒸气103.4kPa灭菌15分钟，趁热
将试管斜置，冷凝后即成普通斜面培养基
• 3、或待肉汤琼脂冷至50～600C时，以无
菌技术倾入灭菌的空培养皿内，冷凝后即
为普通琼脂平板
R质粒接合传递试验
（细菌的耐药性变异）
复习思考：
•什么是质粒？
•什么是接合？
• 目的要求：
•
了解R质粒在细菌变异中的作用
• 材料：
• 1、耐链霉素、氯霉素、四环素及磺胺药物
的福氏痢疾杆菌（供体菌）
• 2、对上述药物敏感但对利福平耐药的大肠
杆菌（受体菌）
• 3、含利福平和氯霉素的中国兰平板
• 4、肉汤培养基、灭菌吸管、试管
中国兰培养基：
• 成份：
• PH7.4的2%琼脂基础培养基
• 乳糖
• 1%中国兰溶液
• 1%蔷薇色酸酒精溶液
100ml
1g
0.5ml
1ml
H+
OH-
兰色
无色
蔷薇色酸 黄色
红色
中国兰
PH 7.4
呈淡红微带紫色
• 蔷薇色酸对一般革兰氏阳性菌有抑
制作用，所以革兰氏阳性菌在此培
养基上不能生长。
• 大肠杆菌因能分解乳糖产酸，故菌
落呈兰色且有深兰色的核心。伤寒
杆菌、痢疾杆菌等致病菌不能分解
乳糖，故菌落透明无色。
H+
OH-
兰色
无色
蔷薇色酸 黄色
红色
中国兰
普通
利福平
氯霉素
中国兰
痢疾
无色
杆菌
半透明
大肠
兰色
杆菌
不透明
含药
中国兰
敏感
耐药
不生长
（R质粒）
耐药
敏感
不生长
利福平
氯霉素
含药
中国兰
新的
兰色
大肠
杆菌
耐药
耐药
不透明
药敏试验
（抗生素敏感试验）
目的要求:
• 1、了解抗生素敏感试验的操作方法
• 2、初步作为抗生素敏感试验结果的
判断
• 3、了解常用抗生素的抗菌谱
纸片法
• 材料：
• 1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌、痢疾
杆菌、绿脓杆菌
• 2、培养基：普通琼脂平板
• 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉
素1单位，其它抗生素为10微克
绿
脓
杆
菌
葡
萄
球
菌
大
肠
杆
菌
高温对细菌杀灭作用
复习思考：
•消毒
•灭菌
•抑菌
•防腐
目的要求：
认识高温（煮沸法）对细菌繁
殖体和芽胞的作用
• 材料：
1、菌种：枯草杆菌（有芽胞）
大肠杆菌 （无芽胞）
2、肉汤培养基、水浴锅
枯
草
杆
菌
枯
草
杆
菌
100℃
5min
大
肠
杆
菌
大
肠
杆
菌
100℃
5min
37℃ 24h
菌
膜
澄
清
浑
浊
普通条件培养下细菌生长状况
枯草杆菌
大肠杆菌
高温灭菌后细菌生长状况
枯草杆菌
大肠杆菌
高压蒸气灭菌法
１、原理
２、重要参数
３、适用范围
４、意义
５、高压蒸气灭菌器结构
６、使用方法及注意事项
外锅
内锅
锅盖
• 细菌培养法
固体 ：平板
斜面
半固体：FeSO4
液体：糖发酵管
蛋白胨水
作业： 四、五
单号
双号
金葡、大肠杆菌混合液
金葡菌
绿脓菌
伤寒菌
伤寒菌
伤寒菌
痢疾菌
痢疾菌
痢疾菌
谢
谢
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