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Cortisol libre en saliva medido por un inmunoensayo electroquimio luminiscente ultrasensible (ECLIA): Verificación del desempeño
C. Acevedo, M. Morini, M. Gomez, A. Usguroglu, M. E. Almagro, M. G. Ropelato
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INTRODUCCION
El diagnóstico y tratamiento del Síndrome de Cushing (Hipercortisolismo) es un desafío en la clínica endocrinológica. La pérdida del ritmo circadiano del eje ACTH-cortisol es el principal indicador de la presencia de un hipercortisolismo verdadero. La determinación de Cortisol en saliva es especialmente útil en pacientes ambulatorios y en la población pediátrica dado que es un método no invasivo. Contar con muestras estables que puedan ser tomadas en forma ambulatoria para su evaluación es de gran valor en el diagnóstico y seguimiento de esta patología.
OBJETIVO
Evaluar el desempeño del método ECLIA para el dosaje de Cortisol en saliva.
MATERIALES Y METODOS
• • • en saliva.
• Se utilizó un inmunoensayo automatizado con señal electroquimioluminiscente (Modular E170-Roche®), que no requiere ninguna adaptación para dosar cortisol libre Se utilizaron muestras de saliva de individuos voluntarios sanos de 26 a 45 años de edad, IMC<25 kg/m 2 , relación mujer/hombre 13:7; recolectadas, según un instructivo específico, a las 8:00, 15:00 y 23:00 hs.
• Se evaluó Precisión: repetiblidad (cv intraensayo) y Precisión Intermedia (cv interensayo) según el protocolo EP15-A2 de la CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute), en 2 niveles de concentración, con pooles de muestras de saliva: • - P1: 0.30 µg/dL - P2: 0.60 µg/dL Se compararon los datos obtenidos con lo reportado por el fabricante.
Se determinó el límite de cuantificación (LoQ) definido como la menor concentración de un analito que puede ser cuantificada con un CV interensayo <20% (1) se procesaron 5 concentraciones de saliva cercanas al LoQ reportado por el fabricante durante 10 días.
• Se verificó el intervalo de referencia de 8:00 y 15:00 hs propuesto por el fabricante según C28 A3 de la CLSI y se calculó el percentilo 95 para la muestra de 23:00 hs ya que este intervalo no se encuentra reportado por el fabricante .
Se verificó la linealidad clínica en el rango de: 0.74 – 17.0 nmol/L Error total aceptable (ETa) seleccionado: 3xCV= 20%
Linealidad RESULTADOS Histograma de Intervalo de Referencia 8:00 horas 15: 00 horas Perfil ritmo circadiano cortisol
12,00 9,00 6,00 3,00 0,00 Csol 8 hs Csol 15 hs Csol 23 hs 12,00 9,00 6,00 3,00 0,00 CSOL 8 hs Csol 15 hs Csol 23 hs Concentración asignada
CONCLUSIONES
La evaluación de desempeño del método permitió verificar las especificaciones de precisión e intervalo de referencia propuestos por el fabricante. La verificación del LoQ y de la linealidad nos permite asegurar la precisión de nuestros resultados en la zona baja de medición del ensayo.
OBJETIVO A FUTURO
Confirmar nuestros resultados preliminares del intervalo de referencia en muestras de 23:00 hs. será de gran utilidad en la evaluación de la hiperfunción de la corteza suprarrenal.
Poder determinar nuestros valores de referencia para la población pediátrica de cortisol en saliva, es nuestro mayor desafío.