Transcript 厌氧性细菌及检验
厌氧菌 概念: 是一大群必须在无氧环境条件下才能生 长繁殖的细菌 特点: 种类多 分布广 感染可发生于人体各个部位 课件制作 陆曙梅 厌氧菌特点 特点 芽胞厌氧菌 无芽孢厌氧菌 种类 1个菌属 40多属 分布 自然界 人和动物体内 致病 外源性感染 多以外毒素致病 内源性感染 多为条件致病菌 课件制作 陆曙梅 厌氧菌感染的临床及细菌学特征 感染发生于黏膜附近 深部外伤 感染局部有气体产生 分泌物有恶臭或暗血红色 某些抗生素治疗无效的感染 标本直接涂片细菌染色不均 镜检见细菌,需氧培养无细菌培养 课件制作 陆曙梅 厌氧菌感染的原因 局部形成厌氧微环境 局部或全身免疫功能下降 菌群失调 寄居部位发生改变 课件制作 陆曙梅 厌氧菌－－标本采集与送检 采集 部位恰当 正确采集 避免污染 严格厌氧 及时送检 运送 针筒运送法 无氧小瓶运送法 标本充盈运送法 组织块运送法 厌氧袋运送法 棉拭运送法 课件制作 陆曙梅 厌氧菌－－常用培养基 非选择性培养基 心脑浸液＋％5脱纤维羊血＋氯化血红素＋维 生素K 选择培养基 七叶苷胆汁平板－－培养脆弱类杆菌 卡那万古冻溶血琼脂平板－－培养 FS培养基－－培养梭杆菌属 VS培养基－－培养韦容球菌 CCFA培养基－－培养艰难梭菌 课件制作 陆曙梅 厌氧菌－－厌氧培养法 厌氧罐培养法 厌氧器袋法 厌氧手套箱法 疱肉培养法 课件制作 陆曙梅 标本 肉眼观察 染色镜检 血标本 厌氧培养 分离培养 厌氧培养 增菌 挑取菌落 需氧培养 生长 厌氧培养 生长 不生长 专性厌氧菌 专性厌氧菌 形态染色 菌落特征 生化反应 药敏鉴定 气相色谱 课件制作 陆曙梅 厌氧菌－－标本观察和涂片镜检 肉眼观察：观察标本的性状（脓性、带 血、气味、硫磺样颗粒、坏死组织等） 涂片染色镜检：估计细菌数量、观察细 菌形态、染色性，以便选择培养基和培 养方法 课件制作 陆曙梅 厌氧菌－－分离培养 初代培养： 厌氧培养48h 次代培养：挑5个以上不同菌落做耐氧试 验，每个菌落接种2个平板，分别进行需 氧培养和厌氧培养，挑取有氧培养中不 生长、厌氧培养生长的菌落进行鉴定 课件制作 陆曙梅 厌氧菌－－鉴定 菌体形态： 菌落性状：形状、色素、荧光、溶血 药敏鉴定试验： 卡那霉素：梭杆菌属多敏感，类杆菌属 多耐药 聚茴香脑磺酸钠：快速鉴定厌氧消化链 球菌 生化反应 气相色谱技术 课件制作 陆曙梅 破伤风芽孢梭菌－－主要性状 革兰阳性细长杆菌，有周鞭毛，芽孢位 于菌体顶端，圆形大于菌体，呈“火柴 棒状” 专性厌氧 在血平板上呈扩散生长，菌落边缘不整 齐，呈羽毛状 在疱肉培养基中，肉渣变黑，有腐败恶 臭味 课件制作 陆曙梅 破伤风芽孢梭菌－－临床意义 致病物质： 破伤风痉挛毒素，属神经毒素，阻止中 枢抑制性神经介质的释放，导致骨骼肌 强制性痉挛 所致疾病：破伤风 感染途径：伤口 致病条件：伤口内形成厌氧微环境 课件制作 陆曙梅 破伤风芽孢梭菌－－检查方法 显微镜检查：菌体形态、芽孢特征 分离培养：厌氧培养，菌落特征 动物实验： 毒力试验： 毒素注射小鼠→小鼠出现症状 保护试验： 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状 课件制作 陆曙梅 产气荚膜梭菌－－形态与培养 革兰阳性粗大杆菌，有荚膜，芽孢位于 菌体中央或次级端，小于菌体，无鞭毛 专性厌氧 血平板菌落特征：圆形、凸起、光滑、 湿润，双层溶血环 卵黄琼脂平板：Nagler反应 牛乳培养基：“汹涌发酵”现象 生化反应：生化反应活泼，分解多种糖 课件制作 陆曙梅 产气荚膜梭菌－－临床意义 致病物质：荚膜、多种毒素和侵袭性酶 所致疾病： 气性坏疽 食物中毒 坏死性肠炎 课件制作 陆曙梅 产气荚膜梭菌－－检查方法 标本涂片染色镜检：观察形态、染色性、 荚膜 分离培养：注意观察双圈溶血环 生化反应：汹涌发酵现象 动物实验： 培养物→小鼠腹腔注射→处死小鼠→培 养→解剖小鼠→肉眼观察泡沫肝＋涂片 染色镜检 课件制作 陆曙梅 肉毒梭菌－－形态与培养 革兰阳性粗大杆菌，有鞭毛，芽孢位于 菌体次级端，大于菌体，呈“网球拍状” 无荚膜 专性厌氧 菌落大而不规则；消化肉渣，肉渣变黑， 有腐败恶臭 课件制作 陆曙梅 肉毒梭菌－－临床意义 致病物质：肉毒毒素，为神经毒素，引 起肌肉驰缓型麻痹。 毒素分为8个型别，我国以A型最多见 所致疾病 肉毒食物中毒 婴儿肉毒病 课件制作 陆曙梅 肉毒梭菌－－检验程序 标本 毒素测定 疱肉培养 毒素测定 分离培养 可疑菌落 革兰染色 生化反应 课件制作 陆曙梅 肉毒梭菌－－检验方法 标本采集：可疑食物、呕吐物等 分离培养：疱肉培养、分离培养 毒素测定 毒素定性检验： 毒素注射小鼠→小鼠出现症状 毒素＋抗毒素→注射小鼠→小鼠无症状 毒素型别鉴定： 鉴定依据：形态、芽孢特征、疱肉培养 物、肉毒毒素 课件制作 陆曙梅 艰难梭菌 革兰阳性粗大杆菌、芽孢位于菌体次级端，无 荚膜 严格厌氧 在果糖卵黄琼脂平板上形成粗糙的黄色菌落 脂酶－、卵磷脂酶－ 人和动物肠道中的正常菌群 肠道菌群失调时可引起伪膜性肠炎 粪便标本直接涂片检查见优势生长的革兰阳性 粗大杆菌并有芽孢，具有诊断价值 课件制作 陆曙梅 革兰阴性无芽孢厌氧菌 类杆菌属 肠道和女性生殖道主要菌群 临床最重要的无芽孢厌氧菌 普雷沃菌属 卟啉单胞菌属 梭杆菌属：菌体细长，两端尖细，中间 膨大，革兰染色可见菌体中有紫色颗粒 课件制作 陆曙梅 革兰阳性无芽孢厌氧菌 丙酸杆菌属 痤疮丙酸杆菌寄居人和动物皮肤、皮脂 腺等部位，与痤疮有关 优杆菌属 乳杆菌属：女性生殖道主要正常菌群 双歧杆菌属：人和动物肠道中重要的正 常菌群，对维持人体内微生态平衡发挥 重要作用 课件制作 陆曙梅 厌氧性球菌 消化球菌属：革兰阳性球菌 消化链球菌属：革兰阳性球菌 韦荣球菌属：革兰阴性球菌 课件制作 陆曙梅 测验1 正常人肠道中数量最多的细菌是 A 大肠埃希菌 B 乳酸杆菌 C 粪肠球菌 D 无芽孢厌氧菌 E 芽孢厌氧菌 课件制作 陆曙梅 测验2 在无芽孢厌氧菌感染中，临床标本检出 阳性率最高的是： A 脆弱类杆菌 B 双歧杆菌 C 丙酸杆菌 D 梭形杆菌 E 消化链球菌 课件制作 陆曙梅 测验3 下列对厌氧要求不严格的细菌是 A 双歧杆菌 B 产气荚膜梭菌 C 破伤风梭菌 D 艰难梭菌 E 产黑色素类普雷沃菌 课件制作 陆曙梅 测验4 下列哪种细菌是条件致病菌 A 脆弱类杆菌 B 淋病奈瑟菌 C 溶血性链球菌 D 肠产毒素性大肠杆菌 E 乙型副伤寒沙门菌 课件制作 陆曙梅 测验5 在牛乳培养基产生“汹涌发酵”现象的 是 A 破伤风梭菌 B 产气荚膜梭菌 C 肉毒梭菌 D 艰难梭菌 E 诺维梭菌 课件制作 陆曙梅 测验6 关于艰难梭菌特点错误的是 A 革兰阳性粗大杆菌 B 为肠道内正常菌群 C 在组织和培养时不易形成芽孢 D 是伪膜性肠炎最常见的病原菌 E 所致疾病与长期使用抗生素有关 课件制作 陆曙梅 测验7 菌体细长，两端尖细，中间膨大，菌体 中常有紫色颗粒（革兰染色），可能的 细菌是 A 产气荚膜梭菌 B 具核梭杆菌 C 放线菌 D 双歧杆菌 E 脆弱类杆菌 课件制作 陆曙梅 Nagler反应 在卵黄琼脂平上，产气荚膜梭菌产生的 卵磷脂酶分解卵磷脂，菌落周围出现白 色混浊圈；若培养基中加入相应抗体， 则不出现混浊。此现象成为Nagler反应。 课件制作 陆曙梅 “汹涌发酵”现象 产气荚膜梭菌在牛乳培养基中分解乳糖 产酸使酪蛋白凝固，同时产生的大量气 体使凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，气势凶 猛，成为“汹涌发酵”现象。 课件制作 陆曙梅 破伤风梭菌 课件制作 陆曙梅 双圈溶血环 课件制作 陆曙梅 产气荚膜梭菌－－革兰染色 课件制作 陆曙梅 肉毒梭菌－－革兰染色 课件制作 陆曙梅 气性坏疽 课件制作 陆曙梅 破伤风 课件制作 陆曙梅