Transcript 第六章 动物药、矿物药的分析

第六章
动物药、矿物药的分析
1、牛黄及其制剂的分析中，掌握胆汁酸的化学反
应，胆红素化学反应，人工牛黄的定性鉴别，人
工牛黄的含量测定，熟悉含牛黄制剂分析
3、熟悉麝香、蛇胆、蟾酥、雄黄、朱砂及其制剂
的分析的定性鉴别，含量测定
4、熊胆及其制剂的分析，掌握熊去氧胆酸的定性
鉴别，熊胆中结合胆汁酸含量测定
5、熟悉其他矿物药的分析
第一节 含动物药中药制剂的分析
一、牛黄及其制剂的分析
天然牛黄，人工牛黄所含成分
胆酸(cholic acid, CA)：mpl98℃、pK= 6.4 、溶
解度0.28 g/L(水)、30.5 g/L( 乙醇)、1.22 g/L(乙醚)、
5.0 g/L(氯仿)、0.36 g/L(苯)、28.24 g/L(丙酮)、胆
酸钠盐568.98/L(水15℃) 。
去氧胆酸(deoxycholic acid,HDCA)：mp 176～
178℃、pK = 6.58、溶解度1:4(冷乙醇)、
0.248/L(水)、0.128/L(苯)、10.468/L(丙酮)、去氧
胆酸钠盐＞333 g/L(水15℃) 。
胆红素
• 溶解性：不溶于水，溶于苯、二硫化碳、氯仿、
碱液、微溶于乙醇、乙醚，其钠盐易溶于水，不
溶于氯仿，其钙盐、镁盐不溶于水
• 性质：在碱溶液中或遇三价铁极不稳定易氧化
• 稳定性：天然胆红素在提取过程中，受酸碱的影
响，双吡咯环产生异构化，即胆红素-Ⅸa,胆红
素-Ⅲa,及胆红素—ⅩⅢa。胆红素Ⅸ，是天然产
物的原型物(bilirubin-Ⅸ。)
另含脂类，蛋白质、肽、氨基酸类，无机元素等
我国部颁标准中人工牛黄的质量标准
• 组成：胆酸、胆红素、胆固醇与无机盐
等配合而成。
• 含量：胆酸：标示量的90%～110%。总胆
酸>25%，胆红素含量>90%
• 性状：人工牛黄应为黄色疏松的粉末，
味苦，微甘
(一) 胆汁酸的化学反应
• 1.Pettenkofer 反应
蔗糖 浓硫酸 羟甲基糠醛+胆汁酸→紫色
糠醛+胆汁酸 浓硫酸→红色
• 2. Gregory Pascoe 反应（可作胆酸定量反应）
糠醛+胆汁酸 浓硫酸 羟甲基→胆酸溶液显蓝色
• 3. Hammarsten反应 铬酸(醋酸+盐酸)+胆酸类
胆酸、阿朴胆酸及3α，12α-二羟基-Δ’-胆烯酸
呈紫色；
去氧胆酸和鹅去氧胆酸呈阴性反应；
3-酮基-7α，12α-二羟基胆烷酸呈黄色→绿色→
紫色；
(二) 胆红素的化学反应
（1） 重氮化反应：胆红素+重氮化试剂(对氨基苯磺酸重
氮盐) →呈色（比色法含量）
（2） Gmelin反应：+硝酸 →呈绿、蓝、紫、红、黄等颜
色环
(三) 人工牛黄的定性鉴别
• （1） +硫酸+过氧化氢→绿色；
• （2） +糠醛+硫酸→蓝紫色。
• （3） 显微鉴别
• （4） 453 ±2 nm
• （5）人工牛黄与天然牛黄的IR吸收光谱有明显差别：
天 然 牛 黄 在 745 ～ 755cm- １ 、 980 ～ 990cm- １ 、 1240 ～
1250cm-１、1565～1570cm-１、1620～1630cm-１、1655～
1665cm-１，处均有明显吸收峰
(4) 薄层色谱鉴别：
•胆酸的鉴别：供试液：样品粉末10mg，加氯仿
20ml，超声提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣
加乙醇1ml使溶解
•混合对照液：胆酸、去氧胆酸对照液
•薄板：硅胶G
•展开剂：异辛烷-醋酸乙酯-冰醋酸(15:7:5) /氯
仿-乙醚-冰醋酸(15:7:5)
•显 色 ： 10% 硫 酸 乙 醇 溶 液 ， 105℃ 烘 约 5 分 钟 ，
UV(365 nm)下检视/10%磷钼酸乙醇液，于105℃烘
约5分钟
胆红素的鉴别
•对照液：胆红素氯仿液
•薄板：硅胶G
•展开剂：甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(10:1:0.5)
(四) 人工牛黄的含量测定
1. 胆酸的含量测定
标准曲线制备
Gregory Pascoe 反应
样品测定
2. 总胆酸的含量测定
酸碱滴定法
3. 胆红素的含量测定
重氮化试液显色法
部颁标准测定法：在453 士2nm处测定吸收度，
按C33N4O6的E为1038计算
(四) 人工牛黄的含量测定
4. HPLC法测定胆红素的含量
• 氯仿-1%盐酸甲醇溶液(5:1)为溶剂：牛黄中的
胆红素以钙盐形式存在，游离型胆红素不溶于水，
易溶于氯仿
• 超声处理数分钟：以便游离型和结合型的胆红素
均能溶出
(五) 含牛黄制剂的分析
1. 牛黄珍珠胶囊中胆红素的测定
在453 ±1nm波长处测定吸收度，按胆红素
C33H36N4O6吸收系数(E)为1083计算含量
2. 牛黄降压丸中胆酸和去氧胆酸的测定
薄层扫描法
3. 六神丸中胆酸、猪去氧胆酸的测定
• 反相高效液相色谱法
• 胆汁酸类成分衍生化法：胆汁酸结构中缺乏共轭
结构，无近紫外吸收生色基团，一般高灵敏度的
紫外检测器或荧光检测器不能检测。利用衍生化
技术，使胆汁酸类成分形成对硝基苯甲酸甲基酯，
在254mm波长处检测
• 方法：精密吸取胆汁酸适量置反应瓶中，加氢氧
化钾试液100μl，蒸干，加18-冠醚-6-试液和1溴乙酰基对硝基苯(l-bromoacetylnitrobenzene)
(简称BANB)衍生试液各100μl，密塞，立即放入
已恒温至60℃的烘箱中，加热40分钟，取出冷却
至室温，即可进样