Transcript 实验1、2、3 微生物实验基本操作

微生物学实验
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实验一 微生物实验规则与安全、无菌概
念及无菌操作技术的介绍
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实验二 培养基的制备
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实验三 消毒与灭菌
一. 微生物实验规则与安全
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轻松的心态，认真的实验态度
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微生物实验的特殊性
------- 把所有的微生物都看成是具有潜在致病性
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充分预习
-------了解实验目的、原理和方法，实验中要思路清楚
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实验记录
-------观察的结果或现象，分析
实验报告
1. 实验目的和原理
2. 实验材料
3. 实验方法或步骤
4. 实验结果或绘图
5. 思考题
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实验操作应严格按操作规程进行

有机溶液或溶剂不要接触火源，如乙醚或丙酮等 （酒精
灯的使用）

使用一些贵重仪器：显微镜，灭菌锅、电泳装置、凝胶
成像仪等，要细心操作，特别爱护

称量药品时严禁药匙交叉使用，也严禁取出的药品又倒
回药瓶中，造成污染

嘴吸取试剂或菌液？遇有盛菌的试管或试剂瓶打破要及
时报告
……
二. 无菌概念及无菌操作技术
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无菌概念
------实际上只是一种习惯用语，因为实验，科研，或生
产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，也就是除
实验用菌外，无其他杂菌的污染。
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介绍器具的使用：
------ 标记，接种环，培养皿，涂布棒，接种等，超净台的
使用，培养皿的倒置，斜面的形成
组号
日期
菌名
A
C
B
D
实验二 培养基的制备
一、实验目的
了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤
二、实验原理
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代
谢产物所需要的营养物质的混合物。
原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微
生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制
方法。
------目前可培养微生物仅占微生物总量的1%左右
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牛肉膏蛋白胨培养基：一种应用最广泛和最普
通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
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高氏I号培养基（Gause I）：培养和观察放线
菌形态和特征的合成培养基。
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马铃薯培养基（PDA）：培养基是分离真菌和
细菌的常用培养基。用于培养霉菌的加入蔗糖，用
于培养酵母菌的加入葡萄糖。
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2216E培养基：分离海洋微生物的培养基配方
蛋白胨 5克
酵母膏 1克
磷酸高铁 0.01克
琼脂 15-----20克 （固体培养基）
陈海水 1000毫升 （已过滤）
煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8
LB: (溶菌肉汤，lysogeny broth）：
培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增
的工程菌。通过培养工程菌，我们可以表达大量的外源蛋白，
也可以拿到带有外源基因的质粒。
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胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L
酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
氯化钠(NaCl) 5g/L
补水至1000ml
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根据经验值用NaOH调节该培养基的pH---7.4 (该pH适合目前
使用最广的原核表达菌种E.coli的生长)
三、注意事项
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调pH: 1mol/L NaOH，1mol/L HCl
避免回调----影响培养基内各离子的浓度
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定容
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分装：液体----试管(管高）1/4，
三角瓶（容积）1/2
固体----试管（斜面）1/5，三角瓶1/2
半固体---- 试管1/3
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Gause I: 淀粉先用冷水调成糊状后加入沸水中使之完全溶
解，然后按配方顺序依次溶解各成分（磷酸盐和镁盐混合易
产生沉淀）。
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PDA: 用土豆应去皮切小块，避免带入杂质，产生泡沫，影
响通气。
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灭菌：含糖培养基用0.06MPa，112℃ ，15min或将其他成
分先行灭菌0.1MPa， 121℃ ，20min
实验三 消毒与灭菌
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消毒---- 指消灭病原菌和有害微生物的营养体，
但不一定能杀死细菌芽孢的方法
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灭菌---- 指消灭一切微生物的营养体，包括芽孢
和孢子。
灭菌的类型
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干热灭菌：利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝
固变性而达到灭菌。 160~170 ℃ ，1~2h
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高压蒸汽灭菌：增加锅内压力，使沸点增高，
高于100 ℃ ，导致细胞内的蛋白质凝固变性而达
到灭菌
蛋白质含水量增加 湿热穿透力大 蒸汽有潜热
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紫外线灭菌：波长200~300nm，
Thymine dimer（胸腺嘧啶二聚体，TDdimer），
O2---O3
紫外线对细菌、病毒的杀菌作用一般在一秒内完
成，而对臭氧方法来说，要达到紫外线的效果一般
需要 20分钟至一小时的时间
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过滤除菌：微孔滤膜过滤器
---- 孔径0.22um除大部分细菌