Transcript 초음파 추출 후 고분자 한외여과막을 통해 여과하는 방법

아토피
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요약
• 본 발명은 아토피 증상을 개선하기 위한 화장료 조성물에 관한 것으
로, 특히 하수오, 복령, 백출, 연자육, 금은화, 백선피, 우방자, 생지
황, 생백피, 석창포, 감초 및 생강으로 이루어진 군으로부터 선택되
는 단독 또는 2종이상의 한약재를 초음파로 추출한 후 10,000내지
200,000 달톤(dalton)정도의 분획분자량을 갖는 고분자 한외여과막
을 사용하여 추출물 내 존재하는 전분, 고무질, 회분, 단백질 및 당
분 등 불순물을 제거하여 2차 감염 등으로 인한 아토피성 피부염을
개선하는 아토피용 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
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원인
• 원인은 명확히 밝혀지지 않았으나 아토피 피부염 환자의 약 70%에
서 아토피 병력이 있었으며 알레르기성 체질인 사람에서 호발하고
특히 알러지성 비염, 천식 등을 동반하여 유전적 요인이나 면역 질
환의 하나로 이해하고 있다.
• 아토피성 피부는 심한 가려움증, 만성 피부발진이 특징인 질환으로
흔히 태열이라고도 부르며 유아습진의 가장 흔한 형태이다.
• 초기의 심한 가려움증에 의해 대부분이 피부를 긁는다.
• 이에 따른 2차 감염과 환자의 정신적 안정 및 감정의 상태에 따라 더
욱 악화될 수도 있다.
고분자 한외여과막을 통해
불순물을 여과 및 제거하는
경우, 아토피성 피부염의 개선효
과가 매우 향상!
열수추출
실온추출
가온추출
초음파추출
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• 하수오
– 마디풀과에 속한 다년생 초목
인 하수오의 덩이뿌리를 건조
한것
– 보익정혈(補益精血), 윤장통
변(潤腸通便)
– 면역증강, 항노화 및 간기능
보호효과
• 복령
– 구멍쟁이버섯과에 속한 진균
인 복령균의 균핵을 건조한
것
– 이수삼습(利水渗濕), 건비(健
脾), 영심안신(寧心安神)
– 이뇨, 면역증강, 진정효과
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• 백출
– 국화과에 속한 다년생 초본
인 삽추와 당백출의 뿌리줄
기 또는 주피를 제거하여
건조한 것
– 보기건비(補氣健脾), 조습
이수(燥濕利水), 지한(止汗),
안태(安胎)
– 이뇨, 항암, 강장, 항균작용
• 금은화
– 인동과에 속한 다년생 반상
록 덩굴성 관목인 인동 또
는 그 변종의 꽃봉오리를
건조한 것
– 청열해독(淸熱解毒), 풍열
해독(風熱解毒)
– 항균, 항바이러스, 면역증
강 효과
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• 우방자
– 국화과에 속한 2년생 초본인
우엉의 잘 여문 씨를 건조한
것
– 소산풍열(疏散風熱), 해독투
진(解毒透疹),이인소종(利咽
消腫)
– 향균, 혈당강하, 항암효과
• 생지황
– 현삼과에 속한 다년생 초본인
지황 또는 그밖의 동속식물의
신선한 뿌리
– 청열양혈(淸熱涼血) , 양음생
진(養陰生津)
– 진정, 소염, 면역증강
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• 상백피
– 뽕나무과에 속한 낙엽교목인
뽕나무 및 기타 동속식물의
뿌리껍질을 건조한 것
– 사폐평천(瀉肺平喘),이수소
종(利水消腫)
– 이뇨, 혈압강하, 진정효과
• 석창포
– 천남성과에 속한 다년생 초본
인 석창포의 뿌리줄기를 건조
한것
– 개규영신(開竅寧神), 화습화
위(化濕和胃)
– 진정, 항경련, 진해효과
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• 감초
– 콩과에 속한 다년생 초본인 유럽감초와 만주감초 또는 기타 동속
식물의 뿌리 및 뿌리줄기를 건조한 것
– 보비익기(補脾益氣), 청열해독(淸熱解毒), 윤폐지해(潤肺止咳), 완
급지통(緩急止痛)
– 소염, 항알러지 및 해독효과
사진출처 : encyber.com, 네이버블로그
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실시예
• 비교예 1. 열수 수출 방법
• 비교예 2. 초음파 추출 방법
– 하수오, 복령, 백출, 금은화, 우방자, 생지황, 상백피, 석창포 및
감초를 건조하여 세절한 후 추출물은 동량으로 혼합
– 추출용매(증류수 : 1,3-부틸렌글리콜 = 7:3)를 400ml첨가
– 약탕기(DWP-5000, 대웅약탕기) – 실온에서 초음파추출기(SM30에서 끓이면서 4시간동안 추출
CE, 소니메디)로 4시간동안 추
출
– 침전물이 생기지 않도록 0.2㎛
필터로 여과하여 최종 추출물을 – 침전물이 생기지 않도록 0.2㎛
얻음.
필터로 여과하여 최종 추출물을
얻음.
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• 실시예 1. 초음파 추출 후 고분자 한외여과막을 통해 여과
하는 방법
– 하수오, 복령, 백출, 금은화, 우방자, 생지황, 상백피, 석창포 및
감초를 건조하여 세절한 후 추출물은 동량으로 혼합
– 추출용매(증류수 : 1,3-부틸렌글리콜 = 7:3)를 400ml첨가
– 실온에서 초음파추출기(SM30-CE, 소니메디)로 4시간 동안 추
출
– 캐트리지형 전처리 여과기 통과 시킨 후 한외여과막으로 여과하
여 최종추출물 얻음.
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•실험예 1. Lipoxygenase 저해 활성 측정
– 상기 실시예 1 및 비교예1,2에서 제조한 한약재 추출물의 항염효
과를 알아보기 위해 Lipoxygenase 저해 활성 측정을 실시함.
– 리폭시게나제(5- LO, 5-lipoxygenase)는 리놀산, 리놀렌산, 아라
키돈산과 같이 분자 내에 1,4-cis,cis-pentadiene(1,4pentadiene) 구조를 갖는 불포화 지방산에 분자상 산소를 첨가하
여 1,3-cis, trans-diene 5-hydroperoxide를 생성하는 산화효소
로 아라키돈산으로부터 각종 염증 및 알르지성 질환에 관여하는
로이코트리엔(leucotriene)생합성의 첫번째 반응에 관여하는 효소
– 따라서 구조적, 메커니즘적으로 5-LO와 유사한
SLO(soybeanlipoxygenase)를 이용하여 리폭시게나제의 저해활
성을 측정하여 항염효과를 평가할 수 있다.
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• 하기 표 1의 Lipoxygenase 저해 효과 측정은 5회 반복 시험하여 구하였다.
–
표1. Lipoxygenase 저해효과
Lipoxygenase 저해효과
46.5
Lipoxygenase
inhibition(%)
50
39
40
32
30
24
20
15
8.5
10
0
22
12
0
1
–
열수추출
초음파추출
초음파+한외여과막
10
농도(mg/mL)
20
상기 결과에서도 알수 있듯이 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물
은 Lipoxygenase 저해효과가 우수함을 알수 있어 2차 감염으로 인한 아토피성 피부염이 악
화되는 것을 개선하는 효과가 우수함을 알 수 있었다.
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실험예2. LPS에 의한 TNF alpha 생성에 미치는 효과
–
–
상기 실시예 1 및 비교예1,2에서 제조한 한약재 추출물이 염증성 사이토카인인 TNF-α의 생
성에 어떠한 영향을 미치는지 효소면역반응법(ELISA)을 이용하여 확인
표2. 대식세포에서 한약재 추출물의 TNF-α생성 억제 효과
TNF-α생성 억제 효과
TNF-α생성 억제 효과(%)
•
30
25
25
20
14
15
11
10
5
8
3
열수추출
초음파추출
초음파+한외여과막
0
-5
-2 25
50
농도(ug/mL)
–
표 2의 결과에서 볼 수 있듯이 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물
이 TNF-α생성 억제 효과가 높아 아토피 증상 완화 효과가 우수함을 확인할 수 있었다.
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•
실험예 3. 세포독성 평가
–
–
–
–
상기 실시예 1의 한약재 추출물에 대해 V79-4세포(차이니스 햄스터, 폐조직 섬유아세포의
연속 세포주)를 배양하여 MTT시험을 하는 방법(Mossman T. J. Immunol. Meth. 5563(1983))을 수행하여 세포 독성을 시험
이때 대조군으로 SLS를 사용
표 3. 세포 독성 평가
시료
IC50 (%, w/v)
SLS
0.005
스쿠알란
0.05
초음파+한외여과막
10.00
표 3에서 볼 수 있듯이 초음파 추출 후 고분자 한외여과막으로 여과한 한약재 추출물의 IC50
값은 10%로 SLS에 비해 2배 이상 세포독성이 낮게 나타나 안전성이 우수함을 확인 할 수
있다.
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