Transcript Isozymy

3. ISOENZYMY (isozymy) – způsob regulace
v různých tkáních a za různých vývojových stádií.
• Isozymy nebo isoenzymy jsou enzymy lišící se sekvencí a
složením aminokyselin katalyzující stejnou reakci.
• Obvykle mají různé kinetické parametry, jako Km, nebo různé
aktivátory a inhibitory.
• Isoenzymy od sebe obvykle odlišíme dle jejich různé
elektroforetické pohyblivosti.
• Jako typický příklad lze uvést isoenzymy
laktátdehydrogenasy (LDH). LDH se uplatňuje při anaerobní
metabolismu glukosy a syntéze glukosy (glukoneogeneze).
• U člověka rozeznáváme dva isoenzymové polypeptidové
řetězce:
• H isoenzym – vysoký obsah v srdečním svalu a
• M isoenzym – skeletální svaly. Řetězce jsou ze 75 % shodné.
• Funkční enzym je tetramer.
Lokalizace isoenzymů LDH
• LDH-1 (H4) - srdce
• LDH-2 (H3M1) – retikuloendothel, krevní sérum.
• (Retikuloendotel, roztroušené buňky v různých oblastech těla, které jsou schopné
zneškodnit choroboplodné látky.
• LDH-3 (H2M2) - plíce
• LDH-4 (H1M3) – ledviny, placenta a pankreas
• LDH-5 (M4) – svaly, játra
LDH a poškození srdečního svalu
• LDH-2 je převažující forma v krevním séru.
Pokud dojde ke stavu, kdy je v séru
koncentrace LDH-1 vyšší než LDH-2 je to
znakem infarktu myokardu (poškozením
srdečního svalu se do oběhu uvolňuje LDH1, bohatě zastoupená v srdečním svalu).
Využívalo se k diagnóze infarktu myokardu.
Dnes se diagnostikuje pomocí stanovení
troponinu I nebo T.
Lidská LDH M4 (EC 1.1.1.27)
• H4 isozym je hojný v srdečním svalu a má větší
afinitu k substrátům než M4 isoenzym.
• Vysoká hladina pyruvátu allostericky inhibuje H4 a
ne M4. Proč ??
• Další kombinace, jako je H3M, mají vlastnosti mezi
H4 a M4.
• M4 isozym je optimální za anaerobních podmínek,
H4, za aerobních.
• Přítomnost různých kombinací isoenzymů se mění
s vývojem, např. srdce.
• Přítomnost různých isozymů v krvi je indikátorem
poškození tkáně a tento fakt se využívá k
diagnostickým účelům.
• Např. zvyšující se hladina H3M v krevním séru je
indikací infarktu myokardu.
Isozymy LDH – krysí srdeční sval.
• Krysí srdeční LDH
isoenzym. Profil se
mění s vývojem.
• H isoenzymy jsou
červené čtverce, M
jsou modré kroužky.
Troponin = komplex tří regulačních proteinů.
Spojení se svalovou funkcí skeletu a srdce. Není
přítomen v hladkém svalstvu.
Troponin
Funkce troponinu ve svalu.
• Troponin je navázán na tropomyosin a je situován ve žlábku
nezi vlákny aktinu ve svalové tkáni. V relaxovaném stavu,
tropomyosin blokuje místo tvorby myosinového můstku a tím
zabraňuje kontrakci.
• Za stavu, kdy je sval stimulován ke kontrakci akčním
potenciálem, vápníkové kanálky jsou otevřeny – membrána
myoplasmy vpouští vápenaté ionty do myoplasmy, se vápenaté
ionty váží na troponin, který tak mění svůj tvar umožňující
tvorbu vazebných míst pro myosin (aktivní místa) na
aktinových vláknech. Myosin navázaný na aktin tvoří můstky a
dochází ke kontrakci.
Stanovení AST –
EC 2.6.1.1. (aspartátaminotransferasay) v krevním
séru
• 2-oxoglutarát + L-Asp = oxaloacetát + L-Glu
• Oxaloactát v silně kyselém prostředí dekarboxyluje
na pyruvát.
• Pyruvát + 2,4-dinitrofenylhydrazin =
• 2,4-dinitrofenylhydrazon pyruvátu
• Hydrazon v alkalickém prostředí l max = 510 nm.
Vysoká hladina pyruvátu allostericky inhibuje
H4 a ne M4.
• Srdeční sval je aerobní, to znamená, že veškerý
pyruvát je pyruvátdehydrogenasovým komplexem
převáděn na acetyl-CoA. Bylo by nelogické
převádět pyruvát na L-laktát !!!
• Sval pracuje převážně anaerobně a pyruvát vzniklý
glykolýzou je za této situace převáděn na L-laktát,
který je transportován Coriho cyklem do jater !!
• Pokud by nadbytek pyruvátu blokoval LDH,
nedostávalo by se energie pro svalovou práci !!