Listeria monocytogenes

Gram+ rövid pálca 0,5-1 – 1-2 μm spóra nincs csilló 16 s zerotípus

Morfológia

Előfordulás

szaporodni képes: talaj (barna víz szennyvíz erdőtalaj) növények szilázs takarmány egészséges állatok és ember bélcsatornája élelmiszerek: nyers hús húskészítmény baromfi tej

Fertőzést okozó élelmiszerek

nyerstej lágysajtok

camembert, brie hús zöldség

Ellenállóképesség

Talaj, víz, szennyvíz: hónapokig túlél, sőt szaporodik is!!!

>60 °C, fertőtlenítőszerek: perceken belül elpusztul 10% NaCl koncentrációig szaporodik Min. pH=4,4 ( szerves savak jobban elpusztítják, mint a szervetlenek) Fagyasztást, szárítást jól bírja

Tenyésztés

Fakultatív anaerob

0-42 °C

(optimum: 37 °C) 20-25 °C: csillós,

bukfencező mozgás

Közönséges agar: apró, kerek.

Henry féle megvilágítás

ban kékesfehér fényű telep.

Véres agar (juh, szm., ló): keskeny,

β hemolízis

es udvar.

Dúsító

Fraser leves

LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid: gátlóanyagok eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát: differenciáló rendszer glükóz-eszkulin →

β-D-glükozidáz

enzim → glükóz + eszkuletin → eszkuletin + Fe 3+ →

olívazöld, fekete komplex

Fraser leves

Szilárd táptalajok

Oxford-agar

LiCl, nalidixinsav, akriflavin-hidroklorid, eszkulin, ammónium-vas(III)-citrát Barnászöld, fekete udvarú telepek

Palcam agar

P

olimixin-B,

a

kriflavin,

l

ítium-klorid, Na-

c

eftazimid,

a

esculin,

m

annit Szürkés-zöld, fekete udvarú telepek Ez jóval szelektívebb az Oxford agarnál

Oxford & Palcam agar

A vizsgálat menete

minta + első dúsító (feles erősségű Fraser leves) ↓ Inkubálás 30°C, 24±2h ↓ Szélesztés Palcam és Oxford agarra második ↓ leves) ↓ 0,1 ml tenyészet 10 ml dúsítóba (Fraser Inkubálás 30, 35 vagy 37°C, 24 ±2h (+24h ha szükséges) 48 ±2h ↓ Megerősítés ↓ Inkubálás 35 vagy37°C, ↓ Szélesztés Palcam és Oxford agarra ↓ Inkubálás 30, 35 vagy 37 °C, 24 ±2h(+24h ha

Megerősítés

Kataláz próba: + Gram festés: +, karcsú, rövid pálca Mozgásvizsgálat: telepet leoltani tripton szója-élesztő levesbe, 25 °C, 8-24 óra → 1 csepp tárgylemezre →

körkörös, bukfencező mozgás

lágy agarba szúrókaccsal mély leoltás, 25 °C 8-24 óra →

esernyő formájú növekedés

Megerősítés - Haemolysis

Hemolízis: juhvéres agaron, 37°C, 24 óra

L. monocytogenes

: egyenletes, tiszta, világos, keskeny β-hemolízis

L. ivanovii

: széles, világos β-hemolízis

L. innocua

: nincs feltisztulás

L. seeligeri

: gyenge β-hemolízis

Haemolysis

Haemolyis

Megerősítés – CAMP próba

CAMP próba (Christie, Atkins, Munch, Paterson) Juhvéres agarra oltókaccsal ismert β-hemolízáló

Staphylococcus aureus

és

Rhodococcus equi

csíkot húzunk →

Listeria monocytogenes

β-hemolízise felerősíti a

Staphylococcus aureus

haemolysisét →

feltisztulás csésze, ásó alakú

– (A

L. ivanovii

ugyanezt csinálja, csak a

Rhodococcus equi

-vel)

CAMP test

Megerősítés

Henry

féle megvilágítás: 45°-ban alulról világított Petri-csésze kékes szín Savtermelés cukrokból:

ramnóz(+) xilóz(-)

Henry féle megvilágítás

Azonosítás

Fajok

L. monocytogenes

L. innocua

L. ivanovii

L. seeligeri L. welshimeri L. grayi subsp. grayi L. grayi subsp. Hemo lízis + Savtermelés ramnó z + xilóz + (+) V V V + + + CAMP-teszt

S. aureus

+

Rh. equi

(+) + -

Campylobacter jejuni

Gram-, S alakú, hajlott pálca öreg tenyészetben coccoid 0,2-0,8 – 0,5-5 μm, spórátlan

Dugóhúzó

szerű mozgás poláris flagellum a sejt egyik v. mindkét végén

•

Campylobacter jejuni

•

Campylobacter jejuni

Általános tulajdonságok

Microaerophil

30,5-45 °C ( (3-5% O itt is hosszú: ~ 1 óra) 2

optimum: 42

és 2-10% CO 2 )

°C

– generációs idő még Energiát aminosavak, trikarboxi-savak bontásából nyer,

szénhidrátokat nem bont Kataláz+, Oxidáz+

Általános tulajdonságok

Metilvörös-, Voges-Proskauer Indol , lipáz-, lecitináz Zselatint, keményítőt, kazeint nem bontja Nitrátredukció+ Fumarátot redukálja szukcináttá

Hippurát-hidrolízis+

(csak

C. jejuni

!) Rezisztencia: nalidixsav cephalotin+

Előfordulás

Állatok, ember bélcsatornájának természetes lakója; madarak tűnnek a természetes rezervoárnak; környezetben nem bizonyított, de feltételezhető a túlélése Közvetítő: főleg baromfihús (csirke), de más élelmiszerek (tej, víz) közvetítő szerepe is lehetséges

Fertőzési források (fontossági sorrendben)

Rosszul hőkezelt baromfi Nyers baromfi feldolgozása Háziállatokkal való érintkezés Utazás, kirándulás Nyerstej fogyasztása

Ellenállóképesség

Élelmiszerekben hűtve sokkal jobban túlél, mint szobahőmérsékleten Felületeken, kézen ~1 óráig túlél Fagyasztás sem pusztítja el teljesen Vákuumcsomagolást jól bírja, oxigénre érzékenyebb 55 °C-on hamar elpusztul Szárítást nem bírja, de bizonyos (alacsony) hőmérsékleten így is túlél Sózásra, savanyú pH-ra érzékeny

Tenyésztés

1. lépés: dúsítás 42°C-on, 24-48 óráig 2. lépés: izolálás szelektív agaron 42°C-on, 24-48 óráig, microaerophil körülmények között 3. lépés: megerősítés

Dúsítók

Preston leves: Fe(II) szulfát, Na-metabiszulfit, Na-piruvát, vér: oxigén-gyökök megkötése Polymyxin-B Bolton leves: a ketolgutársav, Na-metabiszulfit, Na piruvát, Na karbonát Lóvér Cycloheximide, cefoperazone, vancomycin, trimethoprim

Táptalajok

Mikroaerofil tenyésztés!!!

Skirrow agar, Butzler agar, Preston agar, Blaser Wang agar:

hasonlók, a különbség a szelektív adalékokból adódik: (vancomycin, polymyxin, thrimethoprim, bacitracin, cycloheximide, colistin-sulphate, cephazolin sodium, novobiocin, cephalotin, amphoterecin B, stb.)

Karmali agar:

aktív szén, haematin

mCCDA agar: modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar

:

mCCDA

Megerősítés

1. Kataláz+ 2. Oxidáz+ 3. Gram festés: 4. Natív kenet, függőcsepp-készítmény:

dugóhúzó-szerű

mozgás

Megerősítés

5. Hippurát-hidrolízis: 0,4 cm 3 Na hippurát-oldat beoltása → 37°C, 2 óra → + 1 csepp ninhidrin reagens → 5 perc 100°C → +: lila szín Csak

C. jejuni

+ 6. Tenyésztés 25°C-on: nem nő 7. Rezisztencia (érzékenység-) vizsgálat: nalidixinsavas korong → rátenni egy szelektív komponenseket nem tartalmazó, a vizsgált tenyészettel beoltott agarra → 42 ±1°C, 16-24 óra → pozitív esetben gátlási