Transcript ANATOMIE-PATHOLOGIQUE

ANATOMIE ET CYTOLOGIE
PATHOLOGIQUES EN
CANCEROLOGIE
• Introduction
• Technique « standard » (différentes étapes)
• Examen extemporané
• Technique immunohistochimique
PATHOLOGISTE
• Rôle diagnostique et pronostique
– Pathologie tumorale: Bénin/Malin
• Tumeur maligne:
– DIAGNOSTIC POSITIF
– classification histopronostique (TNM)
– BILAN PRETHERAPEUTIQUE
PATHOLOGISTE
• Biopsie
• Pièces d’exérèse chirurgicale
– Examen extemporané
– Examen histologique standard
• Prélèvement cytologique
• Nécropsie
EXAMEN HISTO-PATHOLOGIQUE «
STANDARD »
Différentes étapes
•
•
•
•
•
•
•
•
Fixation/Congélation en banque
Enregistrement du prélèvement
Inclusion en paraffine
Coupe du bloc inclus en paraffine
Coloration (Hématoxyline-phloxine-safran, HPS)
Examen microscopique
Rédaction du compte-rendu
Archivage des lames, des blocs d’inclusion et du
double du compte-rendu
CONGÉLATION
• Pratiquée de plus en plus souvent
• Fragment tissulaire choisi par le
pathologiste sur une pièce opératoire
• Congélation dès que possible (minuté)
• Vise à conserver intacts les acides
nucléiques, les protéines, les germes,…
• Stockage en azote liquide (-196°C) ou en
congélateur (-80°C)
• Utile pour les soins et la recherche
FIXATION
• La pièce opératoire ou la
biopsie fraîches seront
adressées
immédiatement à la
structure d’anatomie
pathologique où elle sera
prise en charge.
• Si la pièce doit être fixée
sur place, l’ouvrir pour
bien la fixer et la plonger
dans 15 fois son volume
de fixateur (protocole à
établir avec le
pathologiste). Les
fixateurs sont des
produits très toxiques.
• Ne pas mettre les pièces
dans du sérum
physiologique ou de
l’eau, de l’alcool...
MACROSCOPIE
• Après fixation de 12 à 24H (parfois délai
supplémentaire de décalcification), des
prélèvements systématiques et dans les
zones pathologiques sont réalisés sur la
pièce opératoire (2,5 cm de côté, 3 mm
d’épaisseur):
– Limites de résection
– Tumeur ou autre lésion
– Ganglions du curage
– Parenchyme à distance
Curage
Mammectomie
Couper la pièce en tranches
fines
Cancer
Encrer les limites
d’exérèse
Cancer
Dissection du curage
Tumeur
Mamelon
Prélèvements systématiques au niveau des
différents quadrants
Zone de mastopathie
Curage
TECHNIQUE
STANDARD
•
Inclusion en paraffine
–
Déshydratation dans
bains d’alcool
Eclaircissement en
bains de toluène
Imprégnation en
paraffine à 56°C
–
–
1
2
3
TECHNIQUE STANDARD
•
Inclusion en
paraffine
– Bloc refroidi, confère
rigidité au prélèvement
permettant de le couper
au microtome
TECHNIQUE STANDARD
• Coupe de 4m étalée sur
lame
• Passage dans bains de
toluène, d’alcool et d’eau
(déparaffinage, réhydratation)
• Coloration par l’HPS
TECHNIQUE STANDARD
• Examen microscopique
• Elaboration du compte-rendu
• Frappe du
compte-rendu
• Envoi du compte-rendu
• Archivage
COMPTE-RENDU
(PATHOLOGIE TUMORALE)
•
•
•
•
•
Identification du patient, N° propre au Service
Description macroscopique
(Description des prélèvements)
Description histologique
Conclusion
–
–
–
–
–
Type histologique de la tumeur
Taille
Limites de résection chirurgicales
Métastases ganglionnaires
Grading histopronostique (pTNM,…)
DELAIS DE REPONSE
•
•
•
•
•
•
•
0 à 72H
Acheminement du prélèvement
6 à 48 H
Fixation
4 à 16H
Techniques standard
Examen microscopique
1 à 48H
Rédaction, frappe du compte-rendu
0 à ?H
Acheminement du compte-rendu
En pratique : Réponse en 24H minimum
pour les biopsies et 48H pour les pièces
opératoires
EXAMEN EXTEMPORANE
•
•
•
•
•
Diagnostic histopathologique rapide
En cours d’intervention chirurgicale
Dans le but de modifier le geste chirurgical
Technique « grossière »
Réponse « grossière »
– Bénin/Malin (Douteux…)
– Taille de la tumeur (macroscopique)
– Limites
EXAMEN EXTEMPORANE
1. Prélèvement sur la
pièce fraîche
2. Collée sur un plot
3. Congélation rapide à
-30°C
2
1
3
EXAMEN EXTEMPORANE
4. Coupe au cryostat
(20 m)
5. Etalement sur la lame
6. Coloration express
au bleu de toluidine
7. Lecture au
microscope
8. Communication du
résultat (en 5’)
4
6
CYTOLOGIE
• Techniquement plus simple:
–
–
–
–
Fixation instantanée
Pas d’inclusion en paraffine, mais dépôt sur lame
Coloration
Examen
• Inconvénients :
– Pas d’architecture tissulaire
– Peu de techniques complémentaires possibles
• Applications :
–
–
–
–
Dépistage (frottis du col utérin)
Trépied diagnostique : clinique, imagerie, cytologie (sein)
Ponction diagnostique à l’aiguille fine (FNAB)
Liquides organiques : extension de cancers
IMMUNOHISTOCHIMIE
• Mises en évidence d’antigènes sur les
préparations à l’aide d’anticorps
spécifiques, révélés par une technique
d’immunoperoxydase indirecte.
IMMUNOHISTOCHIMIE
Ac secondaire biotinylé
Ac primaire
Ag
Prélèvement
Lame
• Incubation de l’Ac
primaire (Ac souris)
(30’ dans tampon
PBS/BSA)
• Incubation de l’Ac
secondaire (Ac lapin
anti-souris) biotinylé
(8’ dans tampon
PBS/BSA)
IMMUNOHISTOCHIMIE
Ac secondaire biotinylé
Complexe
streptavidine
peroxydase
Ac primaire
Ag
Prélèvement
Lame
• Application des
complexes
StreptavidinePeroxydase (forte
affinité avec la
biotine)
Complexe
streptavidine
peroxydase
IMMUNOHISTOCHIMIE
Ac secondaire biotinylé
DAB
DAB
DAB
Ac primaire
Ag
• Révélation avec la
Diaminobenzidine
(chromogène qui
réagit avec la
peroxydase en
présence d’eau
oxygénée pour
donner un produit
coloré visible en MO)
Prélèvement
Lame
• Contre-coloration à
l’hématoxyline de
Meyer)
Anticorps anti-cytokératine
IMMUNOHISTOCHIMIE
Intérêt
• Tumeur indifférenciée
– Carcinome (marqueurs épithéliaux:
Cytokératine, EMA)
– Mélanome (marqueurs mélanocytaires:
PS100, HMB-45, Melan-A)
– Sarcome (marqueurs musculaires: actine,
desmine, marqueurs vasculaires: CD31,
CD34, marqueurs nerveux: PS100)
– Lymphome (marqueurs lymphoïdes: CD3
(marqueur T), CD20 (marqueur B).
Tumeur thyroïdienne indifférenciée
PS100 - (marqueur mélanocytaire)
CD45 - (marqueur lymphoïde)
Cytokératine + (marqueur épithélial)
IMMUNOHISTOCHIMIE
Intérêt
• Différenciation particulière
– Carcinome: différenciation endocrine (Ac
antichromogranine, Ac anti-synaptophysine)
– Lymphome: Typage (lymphome B, T,
anaplasique, maladie de Hodgkin)
• Recherche de micrométastases d’un
carcinome
CD20 -
CD3 -
CD30 +
MALADIE DE HOGKIN
CD15 +
IMMUNOHISTOCHIMIE
Intérêt
• Différenciation particulière
– Carcinome: différenciation endocrine
– Lymphome: Typage (lymphome B, T,
anaplasique, maladie de Hodgkin)
• Recherche de micrométastases d’un
carcinome
Ganglion axillaire (curage d’un
carcinome lobulaire du sein)
Métastase ganglionnaire
CK
IMMUNOHISTOCHIMIE
Intérêt
• Signes d’infection virale
– CMV, EBV
• Recherche de facteurs pronostiques
– Récepteurs hormonaux (RO, RP)
– Marqueurs thérapeutiques (CD20 pour les
lymphomes B, C-erbB-2 pour les cancers du
sein, c-kit pour les tumeurs stromales)
Carcinome lobulaire du sein
RP+
RO+
C-erbB-2 -
C-erbB-2
AUTRES TECHNIQUES
• Hybridation in situ
– Applique sur lame de sondes
d’ADN ou d’ARN
monocaténaire marquées,
complémentaires de séquences
d’ADN ou d’ARN que l’on
recherche sur la coupe
• Révélation par autoradiographie
• Révélation histoenzymologique
(sonde EBER pour le virus EBV)
T
G
G
A
G
G A
A G
C
T
G
A
A
G
C
G
T
A
G
C
Sonde marquée
C
A
A
G
A
A
G
Au total
• Diagnostic
• Classification histopronostique
• Bilan pré-thérapeutique