Transcript Chlamydia Trachomatis

Chlamydia Trachomatis
HIGA Pte Perón
Avellaneda
Sergio Javier Cutufia R 3
Laura Isabel Bortolin R 2
Chlamydia Trachomatis - Descripción
• Microorganismo intracelular obligado que infecta
principalmente las mucosas de cerviz, recto,
garganta, uretra y conjuntiva, transmitidas por medio
de secreciones infectadas.
• Es el patógeno de transmisión sexual más comun y
difundido en países desarrollados y en desarrollo; y
es la causa bacteriana más frecuente de dichas
enfermedades.
Taxonomia
NOMBRE ANTERIOR
NOMBRE PROPUESTO
Chlamydia trachomatis
Chlamydia trachomatis

Biovar tracoma

Biovar tracoma

Biovar Linfogranuloma venéreo

Biovar Linfogranuloma venéreo


Biovar Mopn (neumonía murina)
Cepa S45 de cerdos


Chlamydia muridarum
Chlamydia Suis
Chlamydia pecorum
Chlamydophila pecorum
Chlamydia pneumoniae
Chlamydophila pneumoniae
 Biovar TWAR
 Biovar Koala
 Biovar Equino
Chlamydia
Chlamydia
Chlamydia
Chlamydia
Chlamydophila
Chlamydophila
Chlamydophila
Chlamydophila
Otros
psittaci
psittaci
psittaci
psittaci
(cepas aviares)
(cepas felinas)
(cepas de abortos)
(cepa GPIC)
psittaci
felis
abortus
caviae
Simkania negevensis, Parachlamydia
acanthamoebae, Neochlamydia hartmannellae
Ciclo de Vida: Formas de desarrollo
• Ciclo bifásico: Existen distintas formas de desarrollo:
Cuerpo Elemental (CE)
Cuerpo Reticulado (CR)
Infectivo
No Infectivo
No se replica
Replicación por fisión binaria
Metabólicamente inactivos
Metabólicamente activos
Tamaño 0,2-0,3 micrones
0,5-1,6 micrones
La rigidez de su membrana
permite la sobrevida fuera de la
célula
Existe 3ra Forma, Persistente (In vitro): Cuerpos Reticulares anormales.
Ciclo de Vida
1) Unión del Cuerpo Elemental a la célula huésped promoviendo la
entrada en la vesícula fagocítica de la célula del huésped.
2) El CE sufre una reorganización morfológica para dar un cuerpo
reticular. Duración 8-10hs
3) Replicación del CR dentro del endosoma en crecimiento que se
hace visible como una microcolonia (inclusión clamidial)
4) Luego de un período de crecimiento y replicación los CR se
reorganizan en CE.
5) Lisis celular o exocitosis.
Duración total del ciclo 48-72hs, según la cepa, huesped y
condiciones ambientales.
Ciclo de Vida
Entrada dentro de vacuola
Cuerpo
Elemental
Diferenciacion a
cuerpo reticulado
(8 a 10 hs)
Ingreso
Nucleo
Célula
Huésped
Vacuola
Cuerpo
Reticular
Replicacion por
fisión binaria
1 Ciclo = 48 - 72 hs
Liberación
Conversion de cuerpos
reticulados en cuerpos
elementales
Forma Persistente
Chlamydia Trachomatis:
Serovares y asociación con enfermedad
Serovares
A, B, Ba y C
Enfermedad
Humana
Tracoma
Ocular
D, Da, E, F,
G, H, I, Ia, J,
Ja, K
Enfermedad
Oculogenital
Ll, L2 y L3
Limfogranuloma
venereo
Diseminación
Patologia
Mano-Ojo,
Conjuntivitis y escarificación
fomites y moscas conjuntival y de la cornea.
Cervicitis, uretritis, endometritis,
enfermedad inflamatoria pélvica,
Sexual y perinatal infertilidad tubal, embarazo ectopico,
conjuntivitis neonatal y pneumonía
infantil
Invasión de nodos linfáticos y
Sexual
Submucosa, con granulomas
necróticos y fibrosis
Chlamydia Trachomatis - Clínica:
• Las manifestaciones clínicas son determinadas por el
mecanismo de acción de la cepa infectante.
• Clasificación epidemiológica:
A) Tracoma
B) Enfermedades de transmisión sexual.
C) Infecciones perinatales oculares y del tracto
respiratorio.
A) TRACOMA
• Importante causa de ceguera en áreas de condiciones
sanitarias precarias y de escasa higiene personal.
• Transmisión entre niños por medio de DEDOS,
FOMITES y MOSCAS.
• Comúnmente asociado a los serovares A, B y C.
• Caracterizado por queratoconjuntivitis folicular crónica,
cicatrices
conjuntivales
y panus (invasión Tardia
de vasos
Temprana
Intermedia
sanguíneos en la córnea)
TRACOMA
Cronología de la Enfermedad
• Inicio brusco con inflamación de conjuntivas.
• Exudados y formación de folículos blandos o necróticos
debajo de la superficie conjuntival.
• Cicatrización espontánea completa en ausencia de reinfección. Infección bacteriana   prob. cicatrices
• Infección repetida: Progreso a PANUS.
• PANUS + cicatrices conjuntivales + infección
bacteriana  Ceguera.
• En zonas endémicas la conjuntivitis aguda es rara en
adultos o lactantes. Alta cronicidad.
B) ENFERMEDADES DE TRANSMISIÓN SEXUAL
• C. trachomatis es la causa más frecuente de ETS en varios países.
• Factores de riesgo:
– Edad menor a 25 años.
– Iniciación sexual temprana.
– Múltiples parejas.
– Raza negra.
– Antecedentes de ETS.
– Ectopía cervical.
• Causa el 40-60%, de las uretritis no gonoccócicas.
• Origen del 70-90% infecciones endocervicales en mujeres
asintomáticas, pudiendo persistir de meses a años.
• La búsqueda de Chlamydia, Ureaplasma y micoplasma muchas
veces se inicia por Infertilidad causada por complicaciones de ETS
B1) Linfogranuloma Venéreo:
Definición:
• ETS endémica en África, India, Sur Este Asiático,
América del Sur y Caribe. Es 3 veces más frecuente en
hombre que en mujeres y en personas de bajos recursos
económicos o homosexuales.
• Relacionado con serotipos: L1; L2 ; L3
Linfogran. Venéreo - Etapas de la enfermedad
Fase Primaria:
• Aparece vesícula indolora, de pequeño tamaño, en genitales
externos entre los 3 días a 3 semanas del contagio, que luego
desaparece sin dejar cicatriz. NO hay linfoadenopatía.
• Puede aparecer infección anorectal en vez de la infección genital.
• La infección intrauretral produce URETRITIS SINTOMÁTICA
Linfogran. Venéreo - Etapas de la enfermedad
Fase Secundaria:
• Inicia días a semanas después de la fase primaria.
• Linfoadenopatía inguinal dolorosa y unilateral en 2/3 de
casos.
• Otros síntomas:
–
–
–
–
–
–
Fiebre.
Escalofríos.
Anorexia
Cefalea
Mialgias
Artralgias
Linfogran. Venéreo - Etapas de la enfermedad
Fase Secundaria (cont.):
 Laboratorio:
– Leucocitosis
– Eritrosedimentación aumentada
– Prueba de Función Hepática Normal.
• Examen Histológico:
– Ganglios linfáticos con granulomas que rodean abcesos
estrellados.
– Los abcesos sufren coalescencia y necrosis y, eventualmente,
los ganglios supuran por múltiples fístulas, que cicatrizan en
meses persistiendo las cicatrices y masas.
Linfogran. Venéreo - Etapas de la enfermedad
Fase Terciaria:
• Progresan aproximadamente 5% de los hombres con LGV genital.
• Como resultado de la fibrosis y el drenaje linfático anormal de la
fase secundaria se produce estrechamiento uretral o rectal e
induración y edema del sistema linfático de los genitales.
• Puede existir compromiso ulcerativo o infiltrante crónico y
progresivo en pene o vulva y uretra con fístulas, úlceras y
estenosis uretral.
B2) Cepas no LGV:
• Son la infecciones por Chlamydia Trachomatis más comúnes en
adultos en países desarrollados
• Producido por serovares: D, E, F, G, H, I, J, K
Hombres
URETRITIS
EPIDIMITIS
PROCTITIS.
Mujeres
URETRITIS
CERVICITIS
ENDOMETRITIS
SALPINGINITIS
PROCTITIS
EPI
Cepas no LGV - Signos
• 1/3 de pacientes SIN signos de infección en la exploración física
• Signos más comunes:
– exudado mucopurulento en el endocervix.
– Ectopía cervical e hipertrofia.
• En tracto genital inferior y uretral
– aumento del flujo vaginal
– disuria
– sangrado post-coital
• En tracto genital superior:
– sangrado irregular
– molestias abdominales o pélvicas.
• La infección del tracto genital superior es generalmente silente.
Cepas no LGV - Complicaciones
• Infección NO tratada: Graves complicaciones reproductivas
–
–
–
–
Infertilidad
Embarazos ectópicos
Dolor pélvico crónico
Enfermedad Pélvica Inflamatoria
• Efectos adversos durante la gestación:
–
–
–
–
–
–
Parto prematuro.
Ruptura prematura de membrana
Bajo peso al nacer
Muerte neonatal
Endometritis post-parto
Transmitición durante el parto al recién nacido (50-75%)
Cepas no LGV – Complicaciones (cont)
En el hombre:
• Manifestación más frecuente es URETRITIS.
– Período de incubación de 7 a 21 días.
•
Síntomas
–
–
–
–
–
–
–
–
•
Disuria
Exudado uretral mucopurulento
Prurito uretral
Epidimitis
Proctitis aguda
Conjuntivitis
Sme de Reiter (uretritis-conjuntivitis-artritis-lesiones mucocutáneas)
Artritis reactiva
Secuelas
– Infertilidad
– Proctatitis crónica
– Estenosis uretral
C ) Enfermedad Perinatal
C1) Conjuntivitis de Infección perinatal
– Adquirido en canal de parto.
– 20- 50 % de niños nacidos de madres infectadas tendran conjuntivitis neonatal.
– Incubación de 5 a 12 días (incluso hasta 6 semanas).
• Manifestaciones Clínicas:
–
–
–
–
Similares a las del adulto.
Exudados progresivamente más purulentos.
Enrojecimiento y engrosamiento conjuntival.
Folículos conjuntivales aparecen en la semana 3 a 6, pudiendo progresar a
lesiones corneales o invasión de vasos sanguíneos (PANUS).
• Resolución en 3 a 12 meses, pero puede persistir subclínicamente y producir
lesiones corneales.
• Asociado a la conjuntivitis puede haber: rinitis purulenta y, en niñas,
vulvovaginitis.
• Tratamiento ERITROMICINA (10 días)
C2) Neumonía del lactante
•
•
•
•
En el 10 al 20% de los niños de madre infectadas.
Pueden presentarse entre los 4 a 17 días de nacido.
50% de los niños afectados padecieron conjuntivitis.
+ del 50% de niños afectados sufren alteraciones en el oído medio.
• Manifestaciones Clínicas
– Obstrucción nasal
– Mucosidad abundante
– Taquipnea y tos paroxística
– Ausencia de fiebre (CARACTERÍSTICO)
– Infiltrados intersticiales bilaterales en rayos X
– En niños más pequeños: Episodios de apnea e insuficiencia respiratoria.
• En algunos casos el cuadro es más leve pero más persistente (a nivel
nasofaríngeo, aparato urogenital o recto).
Tratamiento
•
•
•
•
Azitromicina
Doxyciclina
Eritromicina
Ofloxacina
1 dosis
2 dosis/día 7 dias
“
“
“
“
• Azitromicina se recomienda para pacientes con dificultades en el
seguimiento ó para cumplir el tratamiento.
• Todas las parejas sexuales dentro de los últimos 2 meses deben
ser testeados y tratados.
• Abstención sexual hasta 7 dias del tratamiento y hasta los 7 dias
de tratamiento de todas las parejas sexuales (Reinfección).
• La reinfección es común, por lo que debe re-testearse a los 3 a 4
meses postratamiento
Diagnóstico - Muestras
Enfermedad
Cervicitis
Síndrome Uretral agudo en mujeres
Muestra de elección
Hisopado cervical
Orina (por PCR)
Hisopado uretral
Endometritis Aguda
Orina (por PCR)
Aspirado Endometrial
Salpingitis Aguda
Biopsia de Trompa de Falopio
Uretritis no gonococcica en Hombres
Hisopado uretral
Orina (por PCR)
Conjuntivitis de Inclusión
Hisopado o raspados conjuntivales
Tracoma
LGV
Neumonitis (niños)
Aspirado Nódulo Linfático
Suero
Biopsia de lesión ulcerosa
Suero
Aspirado traqueobronquial
• Los especimenes deben recogerse directamente de la superficie afectada y contener una
muestra adecuada y representativa de las células epiteliales.
• Los hisopos de Dacron o Rayon sin mango de madera, ya que es tóxica para la bacteria.
Diagnóstico – Métodos
A) Cultivo celular
B) Métodos no basados en cultivo
B1) Fluorescencia directa con anticuerpos
B2) EIA
B3) Hibridación de Acidos Nucleicos
B4) Amplificación de Acidos Nucleicos
C) Pruebas serológicas
D) Citologia
Diagnóstico – Métodos
A) Cultivo celular:
• Método de referencia para el diagnóstico; pero de difícil
aplicación en el laboratorio diagnóstico.
• Al ser parásito intracelular obligado se requieren líneas celulares
eucariotas susceptibles.
• Línea celular:
– Mc Coy
– Mono verde Búfalo
• Se debe mantener la cadena de frío de la muestra para que los CE
mantengan su viabilidad e infectibidad.
• Cultivo por shell vial e IFD
• Duración de la prueba 48-72hs
B) Métodos NO basados en cultivo:
B1) Fluorescencia directa con anticuerpos.
• Permite la visualización directa de los CE en frotis de muestras
clínicas
• Duración de la prueba 30- 60 min.
• Único método que permite determinar la calidad de especímenes:
– Muestras con células columnares o metaplásicas escamosas son adecuadas.
– Muestras con excesiva cantidad de mucus o cél escamosas no son
aceptables.
•
•
•
•
Interpretación es subjetiva y lleva a gran fatiga del analista.
Reactividad cruzada con otras clamidias y/u otras bacterias.
Sensibilidad del 50-100% (según población en estudio).
Especificidad superior al 95%.
B2) EIA
• Detecta el LPS de la clamidia mediante Ac Mo marcados.
• Duración: 1) Sistema de membranas 15-30min
2) Fase sólida
1-3hs.
• Objetiva interpretación de los resultados
• Facilidad de uso
• Sensibilidad 70-100%
• Especificidad 95%
• Falsos + pueden ser por infecciones urinarias bacterianas o
contaminación con moco cervical o secreciones vaginales.
B3) Hibridación de Acidos Nucleicos
• Detecta el ARNr de la clamidia mediante sonda de DNA
marcada con ester de acridina.
• Permite la detección directa en muestras urogenitales y
conjuntivales.
• Duración 2-3hs.
• Sensibilidad 76-97%
• Especificidad 97% o más.
B4) Amplificación de Ácidos Nucleicos:
• Los blancos moleculares son :
– RNA r 16s
– Secuencia 207 pb del plásmido críptico de la bacteria (Test
Amplicor- ROCHE)
•
•
•
•
Duración 4-5hs
Sensibilidad 90%
Se puede realizar con el primer chorro de orina (menos invasivo)
Mediante Nested-PCR mayor disponibilidad de tipos de muestras.
• Detección de Clamidia por PCR es tanto o más sensibles que el
cultivo en células eucariotas siendo más rápido y sencillo.
D) Pruebas serológicas:
• Muy poca utilidad para el diagnóstico.
– Anticuerpo para CT persisten durante bastante tiempo después de remitida
la infección: serología positiva no implica infección activa.
– Muchas pruebas serológicas no son específicas,(anticuerpo contra antígeno
de género)
• Útil para el diagnóstico de LGV y neumonitis perinatal por CT
• En LGV, el largo período de latencia y el retraso en el diagnóstico
permite encontrar durante la fase aguda de la enfermedad
anticuerpos pero no observar la seroconversión.
• Se usa para el diagnóstico presuntivo de LGV un título único o
estable de 1/64 o mayor por fijación de complemento.
• Neumonitis: el diagnóstico puede hacerse detectando Ig M
específica por IFI en un título 1/32 o mayor
E) Citologia (Mayor aplicación en veterinaria)
• Detección microscopía directa de las inclusiones
intracitoplasmáticas clamidiales en raspados celulares
teñidos con Giemsa (poco sensible y de difícil
interpretación)
• Útil en la conjuntivitis de inclusión y en el tracoma
Vacuola Clamidial
(= Inclusion clamidial)
Sensibilidad y Especificidad
%
Cultivo
EIA
IFD
AAN
S
40-60
65-75
70-75
90-98
E
100
90-95
90-97
98-99
Límites de detección relativos de diferentes métodos para el diagnóstico de C. trachomatis.
Los números en la parte superior representan la cantidad de CE detectados.
Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMérieux)
• Es un método de inmunoensayo con detección final por
fluorescencia – ELFA (Enzyme Linked Flourescent Assay)
 Toma de muestra
– La calidad de la muestra condiciona el resultado.
– La mayor cantidad de células epiteliales porque es un parásito intracelular
– Se utilizan equipos VIDAS Chlamydia Specimen Collection Kit
 Mujeres: escobillón endocervical
– Eliminar el exceso de moco con el primer escobillón (desecharlo).
– Insertar 2º escobillón en el cuello rotándolo durante 15-30seg (al retirar no
tocar las paredes vaginales)
– Colocar el escobillón en el tubo de transporte
 Hombres: escobillón uretral
– El paciente no debe miccionar en la hora previa a la toma de muestra
– Rotar durante 10seg y retirar
– Colocar el escobillón en el tubo de transporte
Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMérieux)
 Transporte de la muestra
– Al llegar al laboratorio colocar la muestra a 2-8ºC
– No congelar.
– Analizar dentro de los 7 días siguientes.
 Preparación de la muestra
– Incubar las muestras con tampón de extracción (PBS en medio detergente)
15-30 min a temp ambiente.
– Vortexear los tubos 30 seg
– Eliminar escobillones
– Calentar los tubos a 15-30 min con calefactor eléctrico ó a baño maria
– Analizar la muestra inmediatamente (se conserva 24 hs, sin congelar 2-8ºC)
– Agitar el extracto 10 segundos antes de cargar la muestra.
Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMérieux)
Cartucho
Equipo
MiniVidas
Conos
Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMérieux)
METODOLOGÍA:
• Muestra en el cartucho en el 1º pocillo.
• El cono sirve como: - Fase sólida
- Sistema de pipeteo
Cono-LPS +Ac Mo
Cono con Ag (LPS) fijado Cono-LPS
Lavados+Ac Mo+Conjug
4 metil umbeliferona
350 ml
UV 450 nm
a-Raton
Lavados
+ FAL
4 metil umbeliferil fosfato
Ac MoConjugado
a-LPS (Raton)
Cubeta de lectura
+ Sustrato
• Duración 60 min
Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMérieux)
Interpretación de Resultados
VALOR
INTERPRETACIÓN
< 60
Negativo
60-80
Dudoso
> 80
Positivo
• Ante un resultado dudoso, se repite la determinación
• Si nuevamente resulta dudosa, se solicita una nueva muestra o puede realizarse
la determinación Vidas Chlamydia Blocking Assay con la muestra original.
Vidas Chlamydias - MiniVidas (BioMérieux)
Estadística (HIGA Presidente Perón 2005-2006)
2005
Tipo de
Endocervical
muestra
procesada
Nº de muestras
11
procesadas
Nº de muestras
--positivas
Uretral
Otro tipo de
muestra
procesada
5
1
3
---
Uretral
Otro tipo de
muestra
procesada
2
---
---
---
2006
Tipo de
Endocervical
muestra
procesada
Nº de muestras
27
procesadas
Nº de muestras
--positivas
Agradecimientos
•
•
•
•
•
Bioq. Mabel Straccia
Bioq. Lorena Vico
Bioq. Diana Lanzetta
A todos los Jefes y Niveles superiores
Servicios Anatomia Patológica
Urologia
Neonatologia
MUCHAS GRACIAS