Transcript (lemezöntés, szélesztés, MPN). Penész

Élősejtszám meghatározás
2. gyakorlat
Értékelés


Telepszámlálás
MPN
Telepszámlálás



Az inkubálás után megszámoljuk a telepeket
A telepeket valamennyi, legfeljebb 300 telepet
tartalmazó, lemezen megszámoljuk
Az értékelésben a 10 és 300 közötti telepet
tartalmazó lemezek vesznek részt
Telepszámlálás

Problémák
–
–
Szétfutó telepek
Összefolyó telepek
Lehetséges megoldás a lemez részekre osztása,
és az így kapott mikrobaszám extrapolálása
Az eredmény kiszámítása
90 mm átmérőjű Petri-csészék használatakor:


Maximálisan számolható telep: 300/lemez
Ha a Petri-csésze átmérője nem 90 mm
(vagy membránt használtunk) a számolható
telepek mennyiségét méretarányosan
növelni, vagy csökkenteni kell
Az eredmény kiszámítása


Két hígításból számolunk, úgy hogy legalább 10 telep
legyen egy Petri-csészén
A minta mikrobaszámának megadása (N) a következő
egyenlettel történik:
N
C
V 1,1 d
Ahol
SC a két lemezen megszámolt összes telep
V az inokulum térfogata (ml)
d az első megszámolt lemez hígítási foka (a hígítatlan mintáé 1)
Az eredmény kiszámítása
Példa:
az első megszámolt hígításban (d=10-2): 168 telep
a második megszámolt hígításban: 20 telep
Inokulum (V): 1 ml
N
C
V  1,1 d

168 20
 17091
2
1 1,1 10
az eredmény: 1,7 x 104 cfu/g(ml)
MPN (Most Probable Number) módszer




Meghatározzuk a különböző hígításokhoz tartozó
pozitív csövek számát
A pozitív csövek száma alapján kulcsszámot
képezünk
Kulcsszám alapján MPN értéket (táblázatból)
határozunk meg
MPN alapján a hígítás figyelembe vételével
kiszámítjuk a kiinduló sejtszámot
Értékelés
Példa: hígításonként 3 párhuzamos leoltás
Hígítás (d)
Pozitív
csövek száma
10-1
10-2
10-3
10-4
10-5
3
3
0
0
0
A kulcsszám első tagja az az utolsó hígítás, amelyben
még maximális a pozitív csövek száma: 300
A figyelembe veendő hígítás (d): 10-2
Értékelés

A kulcsszámhoz
tartozó MPN érték
(táblázatból)
MPNd(300) = 2,3
Kulcsszám
MPN
300
2,3
310
4,3
320
9,3
321
15
330
24
331
46
332
110
Értékelés

A minta sejtszámának (MPN0) kiszámítása a
kulcsszám és a hígítás figyelembe vételével:
MPN0 = MPNd/d = 2,3/10-2
MPN0 = 2,3 x 102 /g(ml)
Értékelés

Kategóriák (a kulcsszámok előfordulásának
valószínűsége szerint)
1.
2.
0.
Figyelembe venni általában csak az 1.és néha a 2.
kategóriába tartozó eredményt szabad. A 0.
kategóriába tartozó eredmény nem vehető
figyelembe!