Transcript Možnosti diagnostiky zápalových ochorení čreva v skríningu

Možnosti diagnostiky
zápalových ochorení čreva
v skríningu
nepriamou
imunofluorescenciou (NIF)
P. Gomolčák, K. Beráková, D. Paulenová
Cytopathos, spol. s r.o. Bratislava
Košice, 25.septembra 2010
Princíp a definícia NIF
Detekcia cirkulujúcich
orgánovo špecifických a
orgánovo nešpecifických
protilátok na tkanivových
rezoch, bunkových náteroch a
bunkových kultúrach
nepriamou
imunofluorescenčnou
metódou(NIF) je IN SITU
vyšetrenie, pri ktorom
dokazujeme prítomnosť
protilátok v sére pacienta
demaskovaním komplexu
pomocou fluorochrómom
značenej protilátky.
Cytopathos, spol. s r.o.
01.01.2010 – 31.08.2010
Podiel špecifických a nešpecifických
zápalových ochorení čreva na všetkých
ochorenia tráviacej sústavy
Podiel ochorení tráviacej sústavy
v biopsií
3%
11%
29%
20%
62%
Choroby traviacej sústavy
Iné vyšetrenia
9%
Špecif a nešpecif ochorenia
66%
Crohnova choroba
Celiakia
Ulcerózna kolitída
Iné špecif. a nešpec. ochorenia
Chronické zápalové ochorenia neurčitej etiológie sú
vysoko komplexné a úzko integrované zahrňujúce
väzby:
-genetické
-environmentálne
-neuroendokrinné
IBD je chronické ochorenie čreva
neznámej etiológie zahrňujúce dve hlavné
entity :
Ulcerózna kolitída (UC)
Crohnová choroba (CD)
Diagnostika IBD a diferenciácia
medzi CD a UC sú založené na kombinácii
výsledkov:






klinických prejavov
laboratórnej diagnostiky
radiológie
endoskopie
histopatológie
serológie
10 – 17 % pacientov nedeterminovaná kolitída (IC).
Zhonghui Wen., Claudio Fiocchi:
Inflamatory bowel disease: Autoimmune or immune-mediated pathogenesis Clin. Develop. Immunology., 9/10, 2004, Vol. 11(3/4), pp195-204.
AUTOIMUNITNÝ
Prítomnosť protilátok a
autoprotilátok (ASCA, ANCA,
cirkulujúci komplement fixačný
faktor, anti-F(ab)2, a iné),
potenciálne autoantigény (hTM5, IFP,
kardiolipin, pankreatický proteín a
iné),
IMUNITOU OVPLYVNENÝ
Nerovnováha Th1/Th2 lymfocytov,
Th1 odpoveď s vysokou produkciou
IL-12, IL-18, a interferon-γ pri CD,
Th2 odpoveď CD1d-restricted NK T
bunkami s vysokou produkciou IL-13
pri UC
aktivácia dendritických buniek,
aktivovaný komplement,
mikrocievach mukózy, črevnom
epiteli v spojení s IgG1 protilátkami,
neboli nájdené orgánovo – špecifické
protilátky.
Črevná flóra „No bacteria, no colitis“
Autoprotilátky pri IBD





ANCA (NSA) – neutrophil – specific antibodies
ASCA – Anti Saccharomyces ceravisiae antibodies
AGCA (GAB) – Anti goblet cells antibodies
APACA (AICA) - Anti pancreas acinus cell antibodies
AhTMA – anti human tropomyosin antibodies
AECA (AEndA) – Anti endothelial cells antibodies
ANA - anti nuclear antibodies
pANCA (NSA)
neutrophil – specific antibodies
atyp. pANCA
cANCA
Hlavné autoantigény asociované s UC sú lokalizované na periférii jadier neutrofilov. NSA
väčšinou nereagujú s azurofílnymi granulárnymi komponentami PR3 a MPO.
Pacienti s UC, ktorí majú zároveň PSC - frekvencia NSA takmer 85 %.
Pacienti s UC bez súčasnej PSC - frekvencia NSA je okolo 15 %.
Takmer 50 %pacientov nedeterminovanou kolitídou nemá ANCA ani ASCA
protilátky.
Budúce štúdie by mali objasniť, či táto skupina pacientov nereprezentuje
samostatnú klinickú entitu.
Vybrané autoimunitné ochorenia a asociovane
protilátky (upravené)
Orgánovo – špecifické autoprotilátky
zdroj: EUROIMMUN
Diagnóza
Ulceratívna kolitída
Crohnova choroba
TYP
Prevalencia
pANCA
50% - 80%
cANCA
43%
pANCA
10% - 20%
Antigén
cathepsin G, laktoferín
BPI
neznámy
Wegenerova granulomatóza
iniciačná
fáza
cANCA
50%
PR3
pANCA
15%
MPO
aktívna fáza
cANCA
90%
PR3
remisia
cANCA
30% - 40%
PR3
pANCA
60%
MPO
cANCA
0% - 30%
PR3
pANCA
75%
MPO
cANCA
15%
PR3
Pauci-imunna nekrotizujúca GN
(RPGN)
pANCA
60% - 90%
MPO
PSC
pANCA
60%
cathepsin G
cANCA
35%
BPI
RA
pANCA
20%
laktoferín, elastáza, cathepsin G,
lyzozým
Reumatoídna vaskulitída
pANCA
50%
laktoferín, elastáza, cathepsin G,
lyzozým
SLE
pANCA
25%
laktoferín, elastáza, lyzozým
Feltyho syndrom
pANCA
50%
laktoferín, elastáza, cathepsin G,
lyzozým
Churg-Strauss syndrom
Mikroskopická palyangitída
AGCA (GAB)
Anti goblet cells antibodies
AUTOANTIGÉN
V roku 1959 Broberger a Perlmann
autoprotilátky proti zložkám mucínu
produkovaného črevnými GC
Metódou voľby pre dôkaz AGCA je nepriama IFL metóda na
nefixovanom ľudskom fetálnom čreve skupiny „0“.
Fetálne črevo eliminuje nešpecifickú reakciu proti bakterialným a
potravinovým antigénom.
V pozitívnych prípadoch sú AGCA viditeľné v epitelových bunkách
sliznice čreva.
Testy môžeme vykonávať aj na bukových kultúrach adenokarcinómu
hr. čreva línia HT29-18-N2, ktoré diferencijú do mucin produkujúcich
buniek.
AGCA (GAB)
Anti goblet cells antibodies
HT29-18-N2
Goblet cells majú makro aj mikroskopicky rovnakú lokalizáciu ako ochorenie.
V tenkom čreve sú menej časté, ale jedna vedľa druhej v hrubom čreve smerom k rektu.
Najvyšší výskyt pohárikovitých buniek je v kryptách.
Deplécia GC je charakteristickejším znakom pri UC ako pri CD.
Doposiaľ nie je jasné čí AGCA majú primárnu alebo sekundárnu úlohu v patogenéze UC.
Sú AGCA jednoducho epifenoménom spojeným s T-ly riadenou deštrukciou GC?
Primárny efekt je oveľa pravdepodobnejší, pretože AGCA majú nízky výskyt u pacientov
s rozvinutou aktívnou formou UC.
Sekundárny efekt môže spočívať v porušení funkcie mucínu ako ochrannej bariery.
Tropomyozín
AhTM5
Tropomyozíny sú IFP nájdeme vo
všetkých eukaryotických bunkách a
sú asociované s aktínom.
Vi
CK
Ak
TM
Nárast protilátok bol zaznamenaný pri UC, RA, SS
Popísaných je 5 izoform hTM1 – 5
izoformy hTM1, hTM2 a hTM3 sa vyskytujú hlavne v hladkej svalovine
tenkého čreva a v stenách ciev nie však v epiteli.
izoforma hTM4 je lokalizovaná v bunkách endotelu a bazálnej membráne
epitelu hrubého čreva
Tropomyozín
AhTM5
AhTM5 sú špecifické IgG
protilátky v sére pacientov s
UC, ktoré indukujú vznik C3b
depozít a deštruujú epitel
čreva.
IF test 79 % senzit., 100 % špecifitu
-hTM5 je predominantná izoforma epitelu hrubého čreva a niektorých
extraintestinálnych orgánov
-nevyskytuje sa v epiteli tenkého čreva, a ezofágu, žlčových
kanálikoch
- silno reaguje s epitelom kože, extrahepatálnych žlčovodov, veľkých
interlobárnych duktoch a s epitelom močového mechúra.
hTM5
ULCERATÍVNA KOLITÍDA
64%
asociovaný s aktivitou ochorenia
ASCA
10 %
ASCA
pANCA/NSA
AGCA
28 %
83 %
76 %
4%
6%
2%
13 %
0%
1%
IgG
IgA
IgM
2%
AICA
pANCA
AGCA
3%
8%
69 %
IgA
IgA
58 %
39 %
23 %
IgG
IgG
darcovi krvi
APACA (AICA)
pancreas acinus cell
antibodies
AICA môžu mať význam pri
vyhľadávaní pacientov so skorým
alebo stredným stupňom CD.
AICA protilátky neboli nájdené ani
u jedného pacienta s UC resp.
negat. kontrol.
Protilátky proti sekréčnym komponentom pankreasu sú pravdepodobne
epifenoménom , ktorý môže byť spôsobený krížovou reakciou s iným
antigénom napr. bakteriálneho pôvodu a sú zodpovedné za spustenie
a udržanie zápalu čreva s adjuvantným efektom v dôsledku čoho sú pacienti
silno imunizovaní proti baktériam črevnej flóry.
APACA (AICA)
pancreas acinus cell antibodies
Drop-like staining
Speckled staining
Typ I.
Typ II.
-obidva typy sú špecifické pre CD
- vyskytujú sa aj u prvostupňových príbuzných pacientov s IBD
Seibold, F., Scheurlen, M., Muller, A. et al. Impaired pancreatic function in patients with Crohns disease with and without
pancreatic abnormalities. J Clin Gastroenterology, 1996, 22(3), 202-206.
Seibold, F., Mork, H., Tanza, S.et al.: Pankreatic autoantibodies in Crohns disease: a family study. Gut, 1997, 40, 481-484.
ASCA
Saccharomyces ceravisiae
ASCA protilátky sú namierené proti zbytkom manózy polysacharidu
mannan v bunkovej stene kvasiniek Saccharomyces cerevisiae.
Objavujú sa tiež žvýšené hodnoty protilátok proti pektínu a iným
polysacharidom.
ASCA je skôr asociovaná s ťažkým ochorením tenkého čreva, s penetráciou
CD a môže byť diagnostikovaná aj roky pred manifestáciou klinických
prejavov.
CROHNOVA CHOROBA
AICA
AICA
ASCA
39 %
67 %
80 %
9%
0%
55 %
36 %
2%
7%
IgA
IgG
pANCA/NSA
2%
ASCA
6%
26 %
31 %
IgA
55 %
8%
2%
14 %
IgG
IgM
darcovia krvi
Anti-glykanové protilátky
nové možnosti diagnostiky IBD.
anti-laminaribiosid carbohydrat – IgG (ALamCA) S.c.
anti-mannobiosid cyrbohydrat – IgG (AManCA) S.c.
anti-chitobiosid carbohydrat
– IgA (AChiCA)
44 %
ASCA negatívnych sér pacientov s CD obsahuje ALamCA, alebo AChiCA.
Pacienti s IBD s pozitivitou protilátok ALamCA, AChiCA, alebo ASCA
mali CD so senzitivitou
77,4 % a špecifitou 90,6 %.
Pri pozitívite najmenej dvoch týchto protilátok sa špecifita zvýši na
99,1 %.
Ďakujeme
za pozornosť