Transcript Tudok előadás

Tumorőssejt markerek azonosítása
valós idejű polimeráz
láncreakcióval
dermatofibroszarkoma tumorokból
Készítette: Czigléczki Gábor
„Minél előbbrehalad a tudás,
annál jobban megkettőzi
erőfeszítéseit a butaság, hogy
fenntartsa az előítéletek
hatalmát.”
Nicolas-Sebastian Roch de
Chamfort
Tartalomjegyzék
1.
2.
3.
4.
5.
Őssejtek, tumorőssejtek
Dermatofibroszarkóma
PCR
RT-PCR
Saját kísérletek:
– RNS- izolálás
– Reverz transzkripció
– Valós idejű kvantitatív PCR
Az őssejt
• Az őssejt olyan sejt, amely képes
osztódni, és amelyből további sejtek
keletkeznek, ami biztosítja a szervezet
növekedését és megújulását.
• Csoportjai:
• embrionális őssejtek
• germinális őssejtek
• szomatikus őssejtek
Őssejtek
Multipotens
progenitorok
Elkötelezett
progenitorok
Érett sejtek
Normális
Őssejt mutáció
Proliferáció
Újabb mutáció(k) az
őssejtben
vagy a progenitor sejtekben
 Proliferáció
 Sejt halál
 Önmegújulás
 Immunválasz
elkerülése
Az őssejtek és daganatok
hasonlóságai
• a korlátlan proliferáció
• szövetspecifikus differenciációs képesség
• klónképzés
• Keletkezhetnek e daganatok őssejtekből?
Célzott terápiák
Konvencionális
kemoterápia
Betegség kiújulása
Célzott LSC
terápia
Tumor
visszahúzódás
Tumor sejtszám
csökkenés
Célzott LSC +
konvencionális
terápia
Betegség
enyhülése
A dermatofibrosarcoma
A polimeráz láncreakció
• Angol név: Polymerase Chain
Reaction
• Felfedezője: Kary B. Mullis-1985
• Lehetővé teszi a DNS egy kis
darabjának megsokszorosítását
A reakció összetevői
• DNS templát
• Taq-polimeráz—Thermus aquaticus
baktériumból
• Nukleotidok
• Puffer
• Primerek
Hőmérsékleti profil
Az agargél-elektroforézis
Felhasználása
•
•
•
•
Fertőző betegségek kimutatása
Igazságügyi orvostani vizsgálatok
Ősi DNS elemzése
Örökletes betegségek kimutatása
A SOX-2 gén vizsgálata
• A SOX-2 transzkripciós faktor, valamint
tumormarker is
• Kérdés: A SOX-2 jellemző-e a tumor
fibroszfer
és
adherens
állapotára
egyaránt, és ha igen, akkor mekkora a
génkifejeződés mértéke?
RNS-izolálás tumoros
sejtekből
1.
2.
3.
4.
5.
Homogenizálás
Kloroform hozzáadása3 fázisra különül el
Felső fázis (RNS) elkülönítése
RNS kicsapása izopropanollal
Felesleges izopropanol eltávolítása abszolút
alkohollal
6. Koncentrációmérés
Reverz transzkripció
1. Master mix összeállítása:
•
•
•
•
•
Fiziológiás oldat
Nukleotidok
Random primer
Rn-áz gátló
Reverz transzkriptáz
2. Megfelelő hőmérséklet biztosítása
termosztáttal
A PCR-gép
átlag
dCT
20,5 20,105
20,53
20,44
20,48 20,695
19,81
19,99
20,15
20,47
20,54 20,675
ddCT
átlag
DFS L1
DFS L2
DFS L3
DFS B1
DFS B2
DFS B3
MoHGPRT
MoHGPRT
MoHGPRT
MoHGPRT
MoHGPRT
MoHGPRT
CT
19,71
20,35
20,91
20,17
20,79
20,81
expr
DFS
DFS
DFS
DFS
DFS
DFS
L1
L2
L3
B1
B2
B3
moSOX2
moSOX2
moSOX2
moSOX2
moSOX2
moSOX2
22,79
22,04
22,26
19,96
20,36
20,5
22,24
22,01
22,14
19,83
20,55
21,06
22,515
22,025
22,2
19,895
20,455
20,78
2,41
1,585
1,505
-0,095
-0,015
0,105
-2,505
-1,6
-1,4
-1,835 3,567714
DFS
DFS
DFS
DFS
DFS
DFS
L1
L2
L3
B1
B2
B3
mocatb
mocatb
mocatb
mocatb
mocatb
mocatb
18,32
18,57
18,36
17,66
18,22
18,65
18,28
19
18,11
17,61
18,27
18,55
18,3
18,785
18,235
17,635
18,245
18,6
-1,805
-1,655
-2,46
-2,355
-2,225
-2,075
-0,55
-0,57
0,385
-0,245 1,185093
Köszönetnyilványítás
• Ezúton is szeretnék köszönetet mondani
Dr. Hegyesi Hargitának, aki minden
segítséget
megadott,
hogy
ez
a
beszámoló létrejöhessen, és Dr. Falus
Andrásnak, aki engedélyezte a kutatásba
való bekapcsolódást
Felhasznált irodalom
• Kary B. Mullis: A polimeráz láncreakció
felfedezése
• Dr. Hegyesi Hargita: Bevezetés a
humángenetikába
• Kopper László, Hajdú Melinda: Tumorőssejtek
• Dr. Tóth Sára: Tumor őssejtek
Köszönöm a figyelmet!