Transcript MALDI-TOF Mass의 원리 및 응용

MALDI-TOF Mass의 원리 및 응용
(Matrix Assisted
Laser Desorption Ionization – Time Of Flight Mass Spectrometry)
MALDI 시료 플레이트에 준비
Sample
plate
Laser
AH+
+20 kV
1.
시료 (A) 가 과량의 매트릭스 (M)
과 혼합되어 MALDI plate에 건
조됨.
2.
레이저 섬광이 매트릭스 분자들
을 이온화함.
3.
시료분자들이 매트릭스로부터
proton transfer 에 의해 이온화됨:
hn
Variable Ground
Grid
Grid
MH+ + A  M + AH+.
• 매트릭스 는 유기산 (organic acid : M) 종류를 사용
• 여기에서는 시료가 protonation 되는 것을 설명하고 있으나, 물질에 따라 deprotonation 이 쉽게 되어 이온화 되는
경우도 있음.
• 측정되는 질량값은 시료분자 (A)\의 분자량+1 이거나, 분자량-1 임
TOF에서 분자 이온들의 분리
Flight Tube (0.5 –
4m)
Ion Source (4 – 25 KV)
가벼운 이온들은 무거운 이온들보다 먼저 검출기에 도착한다.
Detector
Reflector TOF내 분자이온의 비행
Detector
4-25 kV
Flight
Tube
Ion
Source
Reflector (Ion Mirror)
Reflector 또는 ion mirror 는 이온발생 부위에서 동일한 질량의 이온들이 초기 에너지 분포(initial energy spread)를 갖는 것
을 보정하여 분리능을 증가 시킨다.
 주어진 진공상태의 비행관 (tube) 내에서 이온이 비행할 수 있는 거리를 길게 해주어
분리능(resolution)을 향상 되는 디자인
 Peptide등의 정확한 질량 분석이 필요한 Proteomics 응용에 적합함
 Reflector (ion mirror)를 비행관의 끝에 설치하여 이온 비행 방향을 바꾸어 주고 또 하나
의 검출기(detector) 를 반대편에 설치함.
 이 디자인의 장비로는 응용에 따라 Linear 또는 Reflector 모드로 사용함
분석 과정
1. 시료는 matrix 와 혼합하여
target에 건조함
4. Ions 은 전기장에 의해 가속되어 빈관 내부로
비행함(fly down)
20 - 30 kV
el
Flight tube
High vacuum
2. Target를 MS의 고진공 상태
내부로 도입
High voltage
•
3. Sample spot 에 laser 를 발사하여, ions 은 기
체상으로 탈착되며
시계를 시작하여 배행시간 을 ( time of flight) 측
정

시료와 matrix 준비

시료 플레이트를 질량 분석기 내로 주입

레이저로 이온화

이온 분자들이 TOF 내 비행 ( m/z 가 적은 분자들이 더 빨리 비행)

이온 분자들이 검출기에 도달하는 시간을 측정하여 분자량 측정
Tim
e
5. Ions 은 질량대 전하(mass to
charge) 에 따라 각기 다른 시간
(times) 에 검출기에 도착
Ideal Sample Concentration for MALDI
Compound
Peptides and
proteins
0.1 to 10 pmol/µL
Oligonucleotides
10 to 100 pmol/µL
Polymers
100 pmol/µL
Concentration
 1 pmole/ul = 10-6M
Matrix
Matrix 종류
응용
Sinapinic Acid
Proteins >10kDa
a-Cyano-4-hydroxy-cinnamic
acid (CHCA)
2,5-Dihydroxybenzoic acid
(DHB)
Super DHB
Peptides<10kDa
Neutral Carbohydrates, Synthetic
Polymers
Proteins, Glycosylated proteins
3-Hydroxypicolinic acid
Oligonucleotides
HABA
Proteins, Oligosaccharides
MALDI-TOF 질량분석기의 장점
 분자량 측정 : 이온화 과정에서 분자구조가 깨어지지 않아 분자량을 측정가능
 큰분자량 물질 분석: 단백질, 펩타이드, DNA, 폴리머 등 분자량이 큰 고분자 물질의 정확한 분자량 측정이 가능
함 (> 400 kDa)
 혼합물 분석 : 한 종류의 성분이 아닌 몇 종류가 혼재해 있어도 분석이 가능함(예, 전기영동 한 단백질 spot 분석
- 보통 몇 개 단백질이 혼재 하는 경우도 있음, 단백질을 protase에 의해 분해 하여 여러 종류의 펩타이드가 혼재
되어 있는 경우, 순수분리 이전 합성 DNA oligo (합성이 실패된 oligo도 혼재함) 분석
 미량분석 : 매우 민감하여 미량의 시료도 분석 가능 함 : 펩타이드 경우 fmol 분석 가능
 데이터 분석이 쉬움 : 분자 구조가 깨어 지지 않고, 보통 다 전하를(multiple charging) 않으므로 데이터가 다른
질량 분석기에서 보다 단순하여 해석이 용이함
 염의 영향이 적음 : 생체단백질 분리에 이용되는 완충용액, 염 등에 LC/MS 보다 영향을 덜 받음
 분석이 신속함 : 시료와 Matrix 섞어 sample plate에 떨어뜨려 용액을 말리는 시간(약 5~10 분), MALDI-TOF
로 분석하는 시간 (1분 이내)
 기기 사용 및 유지하기 위한 비용이 저렴 : LC/MS, GC/MS 처럼 질소 또는 아르곤 가스를 사용하지 않고, 미량
의 Matrix와 ACN, TFA등을 이용함으로 시약 비용도 저렴함
 사용이 쉬움 : 쉽게 사용법을 배울 수 있고 다양한 응용에 이용됨으로 공동 기기실 장비로 적합