Transcript Henk Heijthuijsen Samonella in the food and feed chain

Salmonella
Feed Saferty
Seminar TLR
Henk Heijthuijsen
Salmonella beheersing in de keten:
Monstername en analysetechnieken
30 oktober 2014
Feed Safety Seminar 2014
1
www.tlr.nl
Salmonella
Europese wetgeving m.b.t. Salmonella
 Gezondheid: Welke bedreiging vormt Salmonella in
diervoeders en levensmiddelen voor de voedselveiligheid?
 Wetgeving: Hoe wordt de afwezigheid van Salmonella
d.m.v wetgeving en controle gewaarborgd?
 Bemonstering: Waar moet men op letten bij het nemen van
een monster voor de analyse van Salmonella?
 Officiële analysetechnieken: Met welke methoden en
apparatuur kun je Salmonella in feed en food aantonen?
TLR Klantendag 2014
2
www.tlr.nl
Salmonella
Salmonella overdracht van mens op mens
 Gezondheid:Typhoid fever: S. Typhi en S. Paratyphi A en B
Zeer ernstig ziektebeeld: diarree, koorts, hoofdpijn, ziekenhuisopname
Groei vindt plaats in menselijk lichaam: incubatietijd 7-28 dagen
 Frequentie in NL ± 10 per jaar waarvan ± 3 in NL besmet.
 In 1999 melding van 294 Europese toeristen met buiktyphus.
Spoor leidde naar besmettingsbron in Alanya (Zuidwest Turkije
Feed Safety Seminar 2014
3
www.tlr.nl
Salmonella
Salmonella overdracht van dier op mens
 Non-typhoid fever: alle Salmonella’s van serogroup I
o.a. S. Typhimurium en S. Enteritidis (PT4)
 Oorsprong: maagdarmkanaal zoogdieren (1-3% carriers), reptielen
en vogels (36-80%)  Zoönose: overdracht van dier op mens
 Ziektebeeld bij dieren: diarree jonge dieren (mortaliteit tot 100%)
diarree bij oudere dieren en groeiverlies (nieuwe infectiebron).
 Milder ziektebeeld bij de mens: diarree, koorts, hoofdpijn.
Zelflimiterend: incubatietijd 8-72 uur. Aantoonbaar bij 10%
voedselvergiftigingen, 26% van de ziekenhuisopnames met
voedselvergiftiging met een mortaliteit van 4-15%.
Feed Safety Seminar 2014
4
www.tlr.nl
Salmonella
Salmonella overdracht van dier op mens
 Infectueuze dosis: 105-107 levende cellen
Bij hoog vetgehalte is deze veel lager ca 10 cellen:
vet beschermt Salmonella tegen maagzuur o.a. chocolade.
 Salmonellavrije kip (Algemeen Dagblad Nederland 2004)
Salmonella Java: oorzaak besmetting onbekend. Serotype
(PFGE) nooit eerder aangetroffen bij Plukon Poultry??
 Salmonella Thompson in zalm: (NVWA 2012) gerookte
zalm uit Griekenland. Oorzaak: besmette snijplanken en
een falend HACCP systeem (zeer hoge Entero’s).
Salmonella in darmvlokken
Feed Safety Seminar 2014
Chocolade
Salmonella in snijplanken
5
www.tlr.nl
Salmonella
Welke serotypen veroorzaken problemen?
 WHO en CDC (USA) systeem (ca 2500 serotypen)
 S. enterica subsp enterica (I)
± 1500
S. enterica subsp salamae (II)
± 500
S. enterica subsp arizonae (IIIa)
± 94
S. enterica subsp diarizonae (IIIb)
± 324
S. enterica subsp houtenea(IV)
± 70
S. enterica subsp indica (VI)
± 12
S. bongori (V)
± 20
 Mens:
 Dieren:
Enteritidis/Typhimurium/Java/Hadar/Infantis/Virchow
Enteritidis/Infantis/Typhimurium/Mbandaka/Livingstone/
Virchow/Hadar/Montevideo/Senftenberg/Java
 Diervoeders: Lexington/Agona/Senftenberg/Mbandaka/Livingstone/
Rissen/Virchow/Enteritidis/ Java/Typhimurium
Feed Safety Seminar 2014
6
www.tlr.nl
Salmonella
Wat leren we van calamiteiten met Salmonella?
 Sesamzaad (Europa 2001) S. Typhimurium.
Oorzaak fecale besmetting irrigatie-water in Turkije.
 Paprika chips (Duitsland 1993) paprikapoeder besmet
met S. Saintpaul, S. Rubislaw and S. Javiana
 Watertank (Australië 1999) S. Saintpaul. Oorzaak
vermoedelijk feces van muizen.
 Sinaasappelsap (1995) S. Hartford. Oorzaak
vermoedelijk amfibieën.
Feed Safety Seminar 2014
7
www.tlr.nl
Salmonella
Salmonella kan dus overal vandaan komen!
 Salmonella’s zijn taaie overlevers in de natuur:
[boter -24 oC  2 mnd] [melkpoeder  6 mnd] [water  2 mnd]
[rundermest  34 mnd] [AGF  1 mnd]
 Kruiscontaminatie is een dagelijkse praktijk door de gehele keten.
 Grondstoffen kunnen Salmonella bevatten.
 Veel contaminatie door stofvorming in de keten en biofilm vorming.
Feed Safety Seminar 2014
8
www.tlr.nl
Salmonella
EU Wetgeving Salmonella voedselveiligheid
 Europese Unie actieplan voedselveiligheid
- General Food Law (178/2002) Raamwet voor voedselveiligheid
 Structuur hygiënepakket (ingang 1 jan 2006) levensmiddelen
- 852/2004 Algemene hygiënevoorschriften levensmiddelen
- 853/2004 Hygiënevoorschriften levensmiddelen dierlijke oorsprong
- 854/2004 en 882/2004 Organisatie officiële controles (NVWA)
 Microbiologische criteria 2073/2005 en 1441/2007 o.a. Salmonella:
Afwezig in 25 gram in direct te consumeren producten vlgs ISO 6579
Feed Safety Seminar 2014
9
www.tlr.nl
Salmonella
Europese wetgeving Salmonella in diervoeders
 EC 178/2002 de General Food Law en EG 882/2004 officiële controles op
de naleving van de wetgeving inzake diervoeders en levensmiddelen:





EG 183/2005 tot vaststelling van voorschriften voor diervoederhygiëne,
EG 2003/99 Bewaking zoönoses en zoönoseverwekkers
EG 2160/2003 Inzake bestrijding salmonella
GMP+ BA4 2013 Inspectie en analyse en B1 2014 Productnormen
Afwezig in 25 gram in direct te consumeren producten vlgs ISO 6579
Feed Safety Seminar 2014
10
www.tlr.nl
Salmonella
Bemonstering Salmonella in de microbiologie




Is altijd in-homogeen (heterogeen) omdat er niet wordt gemengd of gemalen.
Bij boten worden 16 onafhankelijke monsters genomen.
Voor levensmiddelen moeten 5 monsters per partij worden genomen.
Voor bederfelijke producten zijn eisen gesteld aan het gekoelde transport.
Salmonella groeit niet < 7 oC en in droge producten Aw < 0,95
Homogeen
Feed Safety Seminar 2014
In-Homogeen
11
www.tlr.nl
Salmonella
Bemonstering Salmonella in de microbiologie
Monster aantallen
Goedgekeurd
Afgekeurd Afgekeurd deel
10% positief
Z-A-Soja
5
59%
41%
1/3
10
35%
65%
2/3
60
0,5%
99,5%
199/200
2% positief
Vismeel
5
90%
10%
1/10
10
82%
18%
1/6
60
30%
70%
3/7
 Bij een laag monsteraantal geeft een negatief resultaat geen zekerheid
dat het monster geen Salmonella bevat!
 Wie Salmonella vindt in een kolonie op de plaat heeft altijd gelijk!
Feed Safety Seminar 2014
12
www.tlr.nl
Salmonella
Salmonella: klassieke en snelle methode
ISO6579:2002
Snelle Salmonella methode
1.Voorophoping
25g in 225ml BPW
18h ± 2h bij 37 oC ± 1 oC
25g in 225ml BPW
18h ± 2h bij 37 oC ± 1 oC
2.Ophoping
0.1ml in
10ml RVS
24h ± 3h bij
41,5 oC ± 1 oC
RVS/MKTTn
M-Broth
1ml
10ml MKTTn 24h
± 3h bij 37 oC ±
1 oC
Direct uit BPW
ELISA/PCR (2-4 uur) Negatief
resultaat rapportage 1,5 dag
3.Isolatie
2x XLD + 2x selectief med
24h ± 3h bij 37 oC ± 1 oC
Alleen bij positieven ga je door:
Rapportage: possible present
4.Bevestigen
1 typische kolonie: indien negatief
4 extra kolonies
1 typische kolonie: indien
negatief 4 extra kolonies
5.Biochemisch/
serologisch
TSI/Ureum hydrolyse/Lysine decarboxylatie/β-galactosidase/Voges
Proskauer en Indol reactie
Feed Safety Seminar 2014
13
www.tlr.nl
Salmonella
Welke snelle analyse methoden zijn er?
Vergelijking alternatieve methoden: PCR’s direct uit BPW
PALGENE Systems:
BIOCONTROL:
Feed Safety Seminar 2014
Gene disk Salmonella (36 uur/food & feed)
Assurance GDS (36 uur/food & feed)
14
www.tlr.nl
Salmonella
Waarom heeft TLR voor de GDS gekozen?
PCR’s direct uit BPW?
 De Gene disk Salmonella gaf goede resultaten met
levensmiddelen, maar kon slechts ca 50% van de Salmonella
positieve monsters terugvinden in diervoeders (sojaschroot en
raapzaad) t.o.v. de ISO 6579.
 TLR heeft BIOTECON PCR gebruikt om rechtstreeks uit BPW, maar
het lukte alleen om voldoende cellen te krijgen m.b.v. toevoegen
BHI (concentratie Salmonella).
 Biocontrol kwam met een “kant en klare” oplossing via de AFNOR
gevalideerde Assurance GDS-PCR methode.
Feed Safety Seminar 2014
15
www.tlr.nl
Salmonella
TLR heeft gekozen voor IMS en BHI ophoping!
Total Time to Results: 20-24 hrs
Buffered Peptone Water
(18 - 24 hrs)
Low Microbial Foods


High Microbial Foods
PickPen IMS sample to BHI
(2-4 hrs) extra groei
levende Salmonella cellen
PickPen IMS sample prep
(20-30 minutes)
Amplification & Detection
(75 minutes)
Feed Safety Seminar 2014
Reductie van stoorflora
Verwijdering PCR-remmers


Concentratie “levende Salmonella”
Analyse met 1000 ųl versus 5 ųl
16
www.tlr.nl
Salmonella
TLR heeft gekozen voor IMS en BHI ophoping!

De Assurance GDS protocol gebruikt een geautomatiseerde ImmunoMagnetische separatie IMS voor de opzuivering van levende Salmonella
uit verontreinigde matrices mbv de PickPen.
Feed Safety Seminar 2014
17
www.tlr.nl
Salmonella
Feed Safety Seminar 2014
18
www.tlr.nl