Transcript Prácticas de Bioquímica y Microbiología Industrial José Antonio Enríquez Patricia Meade Huerta Pilar Bayona Bafaluy Dpto De Bioquímica y Biología Molecular y Celular. Universidad de Zaragoza.

Prácticas de Bioquímica y
Microbiología Industrial
José Antonio Enríquez
Patricia Meade Huerta
Pilar Bayona Bafaluy
Dpto De Bioquímica y Biología Molecular y Celular.
Universidad de Zaragoza
Practica I: Sensores de Glucosa
El Electrodo de Oxígeno
Practica I: Sensores de Glucosa
El Electrodo de Oxígeno
Practica I: Sensores de Glucosa
El Electrodo de Oxígeno
Electrodo de Oxígeno
(A) Disco de resina epoxy
(B) Cátodo de platino en el centro de un saliente.
(C) Ánodo de plata en forma circular
(D) Anillo de goma que sostiene un papel
espaciador empapado en un electrolito y una
membrana de polytetrafluoroethylene que separa
los electrodos de la mezcla de reacción.
Electrodo de Oxígeno
• La aplicación de un pequeño voltaje
polariza al platino.
• El platino reduce el O2 a H2O2
descargándose.
• La corriente que se genera esta
estequiométricamente relacionada con el
oxígeno consumido en el cátodo.
Electrodo de Oxígeno
Glucosa + H 2O + O2
Glucosa
Oxidasa
çcido gluc—nico + H2O2
[ O2 ]
Tiempo (sg)
HOCH
C=O
HCOH
HOCH
HCOH
O + O2
HOCH
HCOH
HCOH
HC
HC
CH2 OH
GLUCOSA
O
+ H2 O2
CH2 OH
ÁCIDO GLUCONICO
Practica I: Sensores de Glucosa
Espectrofotometría
Glucosa + H 2O + O2
Glucosa
Oxidasa
H2O2
+
4-Aminoantipyrina
+
p-Hydroxybenzeno Sulfonato
çcido gluc—nico + H2O2
Peroxidasa
Quinoneimina
+
H2O
Práctica 2: Análisis de la actividad de genes
inducibles en bacterias.
Inducción Fluorescente Diferencial.
•
•
•
El gen que codifica la GFP (Green
Fluorescent Protein) está clonado en
el vector pLEX, bajo control del
promotor PL.
El promotor PL esta controlado por
la proteína represora lambda cI que
se expresa en la bacteria E. coli
hospedadora.
El gen del represor cI ha sido
introducido en el cromosoma
bacteriano bajo el control del
promotor trp.
Práctica 2: Análisis de la actividad de genes
inducibles en bacterias.
Inducción Fluorescente Diferencial.
Cromosoma bacteriano
pO
Represor lcl
ptrp
GFP
pO
Práctica 2: Análisis de la actividad de genes
inducibles en bacterias.
Inducción Fluorescente Diferencial.
Cromosoma bacteriano
trp
pO
Represor lcl
ptrp
GFP
GFP
•
La expresión del gen de
interés se induce por la
adición de triptófano.
Vector pLEX
pO