Laboratoire & allergologie Nouvelles applications Colloque de Biologie Clinique Clinique André Renard Phn. Biol.
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Laboratoire & allergologie Nouvelles applications Colloque de Biologie Clinique Clinique André Renard Phn. Biol. E. Cavalier Phn Romy Gadisseur 02/03/2010 Épidémiologie de l’allergie • • • • • Allergie=4ème maladie chronique (OMS). Asthme allergique = 1ère maladie chronique chez l’enfant . +/- 30% allergiques. Coût pour la société +++. Allergies x 2 ces 15 dernières années dans les pays développés !! La raison ? Train de vie occidentalisé. – Meilleure hygiène de vie ↓ infections => Réponse immunitaire modifiée et dirigée vers les allergènes de l’environnement : Développement d’allergies. ↑ utilisation d’antibiotiques. – Modification du régime alimentaire. – Vie sédentaire (hygrométrie ++ & température ++) & Exposition aux allergènes domestiques >> exposition à de nouveaux allergènes (confinement, air conditionné, animaux domestiques…). – Tabagisme passif de l’enfant (favorise la synthèse d’IgE). – Pollution atmosphérique +++. – Nouveaux allergènes (latex) Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Allergie : Définition… “ Allergie ” Maladie due à une réponse inadaptée et excessive de notre organisme vis à vis de l’environnement : des substances étrangères et normalement inoffensives entraînent une réaction de défense de notre système immunitaire, nuisible à l’organisme. Allos = différent Ergon = agir. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Hypersensibilités : Classification de Gell et Coombs (I) • Hypersensibilité de type 1 (H. immédiate, allergie réaginique ou atopique) : – Immunité humorale = Allergie. Médiée par les IgE spécifiques d’un allergène (IgE dépendante). Tendance héréditaire. – Manifestations cliniques diverses (dermatite, conjonctivite, asthme, rhinite pollinique, troubles digestifs, urticaire, choc anaphylactique). Apparaissent en quelques minutes. – Les IgEs fixées sur les mastocytes tissulaires et sur les basophiles sanguins, réagissent avec l’Ag (allergène), induisant ainsi la dégranulation de ces cellules (libération d’histamine et d’autres médiateurs). Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Hypersensibilités : Classification de Gell et Coombs Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Ligne du temps… diagnostic de l’allergie. Caractérisation & désignation des IgE Tests de Provocation (SPT) 1880 Standardisation des extraits allergéniques RAST 1967 Panels d’allergènes recombinants mimant des extraits allergéniques 1ers allergènes clonés 1988-91 ImmunoCAP ISAC (Phadia/ VBC Genomics) Premier ”allergen microarray” 1995-99 2000 2008 Tests IN-VIVO Tests IN-VITRO Component – Resolved -Diagnostics Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Recombinants : Production Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Components - Resolved Diagnosis (CRD) « CRD » Component-Resolved Diagnosis uses defined recombinant allergens to dissect the individual patient’s IgE reactivity profile with the aim of identifying the disease-eliciting molecules. Valenta R et al, Clin Exp Allergy 1999 Molecules, genuine markers tell you the truth ! Mari A., VIP Customers day, Brussels, 17th November 2009. De nombreuses sources allergéniques contiennent des allergènes proches au niveau de leur structure et au niveau de leur activité immunologique. CRD = Déterminer la présence d’IgE pour des composants allergéniques responsables de réactions croisées afin de comprendre une sensibilisation et d’évaluer la sévérité des symptômes. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Allergènes, Bases de données Allergènes de l’ arachide Propriété biochimique de l’allergène Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 IgE « spécifiques » pour un extrait • Du point de vue du laboratoire… – – – – Que veut dire un taux d’IgEs pour un extrait allergénique ? Que faire de ce résultat ? Qu’en est-il des soins pour le patient ? Qu’en est-il du risque pour le patient ? Impact sur le suivi du patient et sa santé (appréciation de la sévérité, risques, choix thérapeutiques, amélioration de la qualité de vie du patient). • Y a-t-il un intérêt à réaliser du Component-resolved diagnosis en routine dans… notre laboratoire ? en pneumologie(-allergologie)? – – – – – Pollution, allergènes domestiques & allergies, Asthme et/ou rhinite allergique et allergies alimentaires, Asthme du boulanger, expositionnel Rhinites allergiques & désensibilisations, … Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas Clinique (I) 1. Julie, F (29 ans): f13 (arachide) = 27.4 kUA/L. SPT + : arachide, noix, noisette, graine de sésame, graminées, bouleau, pignon. SPT - : soja, oeuf et noix. Asthme, troubles gastrointestinaux et érythème après ingestion de noix. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas Clinique (II) 2. Laurent, H (24 ans): 3. f13 (arachide) = 1.22 kUA/L. IgEs + : bouleau, pomme, poire, pêche, abricot, noisette, noix et récemment céleri et fenouil. Atopie, polysensibilisé, oral allergy syndrome (OAS) et évolution récente vers des difficultés respiratoires. Maud, F (15 ans): f13 (arachide) = 1.23 kUA/L IgEs + : pollens de graminées, lait de vache, carotte, orange, tomate, froment, pomme de terre, oignon, ail, céleri, banane, pêche et arachide. Sensibilisation à différentes variétés de plantes Troubles gastro-intestinaux. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas Clinique (III) 4. Eddy, M (43 ans) : f13 (arachide) = 0,44 kUA/L SPT+ : bouleau, pomme, pêche, banane, ail, arachide. Gonflement des lèvres. Sensibilisation au bouleau… Que pouvons-nous conclure? Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas Clinique (IV) 5. Nadia, F (24 ans) : 5 cas cliniques… f13 (arachide)Pour = 1,73ces kUA/L f17 (noisette) = 4,23 kUA/L Les pour l’extrait d’arachide sont-ils proportionnels taux IgEsd’IgEs + : pomme, pêche, noisette, arachide à la sévérité de l’allergie ? SPT +++ : arachide, noix, noisette.. Atopie, polyallergie, rhinoconjonctivite, OAS, urticaire et angiœdème Qu’en est-il du risque? Régime d’éviction ou non ? Quel suivi pour le patient? Évolution du patient ? ? Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Prédire les réactions croisées • Proteines de stockage – Présente dans les graines, ressource matérielle lors de la croissance de la plante. – Parfois, stable et résistante à la chaleur causant des réactions aux aliments cuits. rSes i 3 Cor a 9 rBer e 1 Ara h 1 Ara h 2 Ara h 3 Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 nGly mβ-conglycinin nGly m glycinin Prédire les réactions croisées • Protéines PR-10, Bet v 1 homologue – Instable à la chaleur, aliment cuit toléré en général. » Breiteneder H, Biotechnol Adv, 2005 – Associé à des symptômes locaux comme l’Oral Allergy Syndrome (OAS). – Associé aux réactions allergiques aux fruits et légumes au Nord de l’Europe. Cor a 1.01 Cor a 1.04 Gly m 4 Ara h 8 Api g 1 Dau c 1 Bet v 1 Pru p 1 Mal d 1 Pyr c 1 Pru ar 1 Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Pru av 1 Oral Allergy Syndrome (OAS) • Syndrome d’Allergie Orale : Réaction allergique, gêne au niveau de la bouche qui apparaît instantanément ou peu de temps après l’ingestion de l’aliment. – • Un chatouillement ou sensation de brûlure au niveau des lèvres, de la bouche et/ou du pharynx. Associé à la sensibilisation à une ou plusieurs protéine de type PR-10 càd homologue de Bet v 1 (bouleau). o o o o o o o o Noisette, 46% Pomme, 39% Pêche, 24% Cerise, 22% Noix, 21% Poire, 20% Amande, 19% Prune, 17% o o o o o o o Noix du Brésil, 16% Pomme de terre, 15% PR-10 Carotte, 13% rBet v 1 Arachide, 10% rPru p 1 Fraise, 10% rGly m 4 rAra h 8 Orange, 9% rApi g 1.01 rAln g 1 Abricot, 7% rCor a 1 nAct d 8 rMal d 1 rDau c 1 Birch Hazel Alder Hornbeam Beech Apple Cherry Apricot Pear Medicago Garden pea Soybean Tomato Celery Carrot Asparagus 1 MGVFNYETET MGVFNYETES MGVFNYEAET MGVFNYEAET MGVFTYESEN MGVFNYETET MGVFTYESEF MGVFTYETEF MGLYTFENEF MGVFNFEDET MGVFNVEDEI MGVFTFEDEI MGVNTYTYES MGVQKTVVEA MGAQSHSLEI MSSSAVSHEI TSVIPAARLF TSVIPAARLF PSVIPAARLF TSVIPAARLF TSVIPPARLF TSVIPAPRLF TSEIPPPRLF TSVIPPEKLF TSEIPPPRLF TSIVAPARLY TSVVAPAILY NSPVAPATLY TTTISPTRLF PSTVSAEKMY TSSVSAEKIF ESSVSAARLF KAFILDGDNL KAFILDGNNL KAFILDGDKL KAFILDGNNL KAFVLDADNL KAFILDGDNL KAFVLDADNL KAFILDADNL KAFVLDADNL KALVTDSDNL KALVTDADNL KALVTDADNV KALVLDFDNL QGFLLDMDTV SGIVLDVDTV KASMIEWHNL FPKVAPQAIS IPKVAPQAVS LPKVAPEAVS IPKVAPQAVS IPKVAPQSIK IPKIAPQAIK VPKIAPQAIK IPKVAPTAVK IPKIAPQAIK IPKVI.DAIQ TPKVI.DAIK IPKAL.DSFK VPKLLSQHVK FPKVLPQLIK IPKAAPGAYK APKILPEIVS SVENIEGNGG SVENVEGNGG SVENIEGNGG SVENVEGNGG STETLEGDGG STEIIEGDGG HSEILEGDGG GTEILEGDGG HAEILEGNGG SIEIVEGNGG SIEIVEGNGG SVENVEGNGG NNETIEGDGG SVEILEGDGG SVDV.KGDGG SASVVAVDGG 60 PGTIKKISFP PGTIKKITFS PGTIKKITFP PGTIKKITFS PGTIKKITFG VGTIKKVTFG PGTIKKITFG VGTIKKVTFG PGTIKKITFG AGTIKKLTFV AGTIKKLTFV PGTIKKITFL VGSIKQMNFV VGTVKLVHLG AGTVRIITLP VGSIRQINFT Birch Hazel Alder Hornbeam Beech Apple Cherry Apricot Pear Medicago Garden pea Soybean Tomato Celery Carrot Asparagus EGFPFKYVKD EGSPFKYVKE EGSPFKYVKE EGSPVKYVKE EGSQFKYVKH EGSQYGYVKQ EGSQYGYVKH EGSQYAYVKH EGSQYGYVKH EGGETKYDLH EDGETKHVLH EDGETKFVLH EGGPIKYLKH EATEYTTMKQ EGSPITSMTV SAMPFPYLKE RVDEVDHTNF RVEEVDHTNF RVDEVDRVNF RVEEVDHTNF RIDEVDQANF RVNGIDKDNF KIDSIDKENY RVDGIDKDNL RVDSIDEASY KVDLVDDVNF KVELVDVANL KIESIDEANL KIHVIDDKNL KVDVIDKAGL RTDAVNKEAL RLDFVDEANF KYNYSVIEGG KYSYTVIEGG KYSFSVIEGG KYSYTVIEGG SYGYSVIEGD TYSYSMIEGD SYSYTLIEGD SYSYTLIEGD SYAYTLIEGD AYNYSIVGGG AYNYSIVGGV GYSYSVVGGA ETKYSLIEGD AYTYTTIGGD TYDSTVIDGD ECKSSLIEGG PIGDTLEKIS PVGDKVEKIC AVGDALEKVC PVGDKVEKIC VVSGIIEKIS TLSDKLEKIT ALGDTLEKIS ALSDVIENIA ALTDTIEKIS GLPDTVEKIS GFPDTVEKIS ALPDTAEKIT ILGEKLESIT ILVDVLESVV ILLGFIESIE DLGTKLESAS NEIKIVATPD NEIKIVAAPD NEIKIVAAPD NEIKIVAAPD YEIKIVASPD YETKLIASPD YETKLVASPS YDIKLVASPD YEAKLVASGS FESKLSAGPD FEAKLSAGPN FDSKLVAGPN YDIKFEANDN NEFVVVPT.D THLVVVPTAD SHFKLVPSSN 120 GGSILKISNK GGSILKISNK GGSILKISNK GGSILKITSK GGSLLKSTSK GGSIIKTTSH GGSIIKSTSH GGSIVKTTSH .GSTIKSISH GGSIAKLTVK GGSIAKLSVK GGSAGKLTVK GGCVYKTTTE GGCIVKNTTI GGSITKTTAI GGCVVKLEGI Birch Hazel Alder Hornbeam Beech Apple Cherry Apricot Pear Medicago Garden pea Soybean Tomato Celery Carrot Asparagus YHTKGDHEVK YHTKGDHEVD FHTKGDHEIN YHTKGDHEVP YHIKGNHEIK YHAKGDVEIK YHTKGNVEIK YHTKGDVEIK YHTKGDIEIK YFTKGDAAPS YFTKGDAAPS YETKGDAEPN YHTKGDHVVS YNTKGDAVLP FHTKGDAVVP FKALPGVETT AEQVKASKEM AEHIKGGKEK AEQIKIEKEK AEHIKGGKER EEEVKAGKEK EEHVKAGKEK EEHVKAGKEK EEQVKAGKEK EEHVKAGKEK EEEIKGGKAR EEQLKTDKAK QDELKTGKAK EEEHNVGRRE EDKIKEATEK EENIKFADEQ DEVAK.GKEM GETLLRAVES VEGLFRAVEA AVGLLKAVES VEGLLKPVEA AAGLFKAVEA ASGLFKLLEA ASNLFKLIET AAGLFKLVEA AHGLFKLIES GDGLFKALEG GDGLFKALEG ADALFKAIEA NHEYFQGCRS SALAFKAVEA NTALFKAIEA MTNAIKAAEA YLLAHSDAYN YLLAHSDAYN YLLAHSDAYN YLLAHTAEYN YLLAHPDAYN YLLAHSDAYN YLKGHPDAYN YLLANPDAYN YLKDHPDAYN YVLANPD.Y~ YCLAHPD.YN YLLAHPD.YN IPSRESFCLR YLLANLQFLA YLIAN~~~~~ YLVANPTAYA ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ N~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ LNIDEKESGL ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ ~~~~~~~~~~ 178 ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ HVRNYACT ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ ~~~~~~~~ Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Prédire les réactions croisées • LTP (non-specific Lipid Transfer Protein, nsLTP) – Protéines stables à la chaleur et à la digestion, causent donc aussi des allergies aux aliments cuits. – Souvent associées à des réactions systémiques, réactions plus sévères qui suivent l’OAS. – Les LTPs causent souvent des allergies alimentaires aux fruits en l’absence d’allergie pollinique. – Souvent, associées aux réactions allergiques aux fruits et légumes au Sud de l’Europe. LTP Zea m 14 Cor a 8 Pru p 3 Pru av 3 Mal d 3 Pru ar 3 Ara h 9 Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 nPru p 3 rCor a 8 rPar j 2 nArt v 3 Ara h 9 Mal d 3 Zea m 4 Jug r 3 Prédire les réactions croisées • Profiline – Rarement associée à des symptômes cliniques mais réactions sévères pour une minorité de cas. – Les profilines sont présentes dans une large variété de pollens (d’arbres, d’herbacées et de graminées) et d’aliments d’origine végétales. – Il y a une grande homologie de structure entre les profilines des différents fruits et légumes. Ara h 5 rMer a 1 rPhl p 12 rHev b 8 rMal d 4 Pru p 4 rCor a 2 Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 rOle e 2 rBet v 2 PFL rPhl p 12 rBet v 2 nOle e 2 rMer a 1 rHev b 8 rMal d 4 rPru p 4 nAct d 9 nAna c 1 nAra h 5 rPyr c 4 En résumé… Symptômes caractéristiques Local (OAS) Systémique Profil de sensibilisation protéines PR-10 Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 nsLTP Profilines Réactions croisées in-vitro • CCD (MUXF3) : – Marqueur de sensibilisation aux déterminants carbohydrates (crossreacting carbohydrate determinants). Glyco-épitopes. – Présents dans la majorité des plantes, – Il s’agit d’IgEs dirigés contre les glycans : causent des profils de sensibilisations croisées larges parmi les extraits allergéniques (parfois responsables de réactions croisées in-vitro). effets « in-vivo » ? – Rarement associé à des symptômes cliniques… » Mais, publications ? » A confronter aux informations cliniques et aux SPT… – Tester si… Sensibilisation aux fruits et légumes, graînes. Sensibilisation au latex chez un patient pollinique sans exposition occupationnelle. Sensibilisation au venin d’Hyménoptère avec/sans sensibilisation aux pollens. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Arachis Hypogea • Ara h 1 : Protéine de stockage (vicilline) • Ara h 9 : nsLTP • Stable à la chaleur et à la digestion. • allergène majeur • Ara h 2 : Protéine de stockage (conglutine) • Réactions sévères >> réactions systémiques ! • + fréquent, sensitizing potential ++, • Ara h 8 : Profiline stability ++ to digestion. Allergenicity : • Réactions croisées entre de nombreux fruits et légumes. Ara h 2 est un allergène 100 fois plus puissant que Ara h 1 • allergène mineur, rares sensibilisations. • Ara h 3 : Protéines de stockage (glycinine) • Ara h 8 : PR-10 Koppelman SJ et al, Clin Exp Allergy 2004,34:583 • CCD (MUXF3) Ara h 2 possède un haute stabilité protéolytique • allergènes majeurs de l’arachidechez les Lehmann K et al, Biochem J, 2006:395-463 Carbohydrate Determinants • Cross-reactive patients allergiques au pollen de bouleau. • Rarement à des symptômes. Après rôtissage de et l’arachide, l’allergénicité d’Ara hassociés 2 est multipliée par 3 • Sensible à la chaleur à la digestion. Maleki SJ et al, J Allergy Clin Immunol,dans 2003 la majorité des plantes. • Présent Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Du point de vue du laboratoire : Comment contribuer à diagnostiquer une allergie à l’arachide ? Arachide (f13) + Ara h 2 (f423) Arachide (f13) : Nég Arachide (f13) : Pos Arachide (f13) : Pos Ara h 2 : Nég Ara h 2 : Nég Ara h 2 : Pos Peu de risque de réactions sévères Risques de réaction sévère? Très haut risque de réaction sévère Comment explorer ? Recommendations Bouleau (Nord de l’Europe) : test Ara h 8 (f352) Comment explorer? Recommendations Test : Risque • Ara h 1 (f422) •Ara h 3 (f424) •Ara h 9 (f427) •Ara h 8 (f352) •CCD (Ro214) Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas clinique (1) 1. Julie, F (29 ans): f13 (peanut) = 27.4 kUA/L. – SPT + : arachide, noix, noisette, graîne de sésame, bouleau, graminées, pignon de pin. – SPT - : soja, blanc d’oeuf, noix. Asthme, intolérance gastrointestinale et érythème après ingestion de noix. Quels sont les risques ? Bouleau? Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas clinique (1) Arachide (f13) = 27,4 kUA/L Ara h 2 (f423) = 14,2 kUA/L Arachide (f13) : Pos Ara h 2 : Pos Très haut risque de réaction sévère Comment explorer? Recommendations Tests : • Ara h 1 = 3,46 kUA/L •Ara h 3 = 0,6 UA/L •Ara h 9 <0,1 kUA/L •Ara h 8 = 2,27 kUA/L Risques • Sensibilisation à Ara h 8 due à une allergie au bouleau (PR-10). Réactions croisées : protéines de stockage ?? • Sensibilisation à 3 allergènes majeurs d’arachide. Allergènes majeurs de l’arachide Protéines de stockage • Sensibilisation à Ara h 2 : Protéine de stockage (conglutine), Stable ++ à la digestion, régime d’éviction d’arachide car risque de réaction sévère ++. protéine PR-10 de l’arachide ! •CCD < 0,1 kUA/L Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas clinique (2) 2. Laurent, H (24 ans) : f13 (arachide) = 1.22 kUA/L. – IgEs + : bouleau, pomme, poire, noix, noisette, abricot, et récemment céleri et fenouil. Atopie, polysensibilisé, oral allergy syndrome(OAS) et récemment évolution vers des difficultés respiratoires. Quels sont les risques? – – Qu’en est-il de la sensibilisation au Bouleau ? Et l ’évolution récente de l’allergie ? Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas clinique (2) Arachide (f13) = 1,22 kUA/L Ara h 2 (f423) < 0,10 kUA/L • Sensibilisation à l’arachide après allergie au bouleau (PR-10 proteins). • Sensibilisation aux autres PR-10 : - Pomme (Mal d 1), poire (Pyr c1), pêche (Pru p 1), abricot (Pru ar 1), noisette (Cor a 1) et récemment le céleri (Api g 1) •Dans ce cas, évolution de l’OAS avec détresse respiratoire expliquée par une une sensibilisation récente à Api g 1. Arachide (f13) : Pos Ara h 2 : Nég Risques de réaction sévère ? Comment explorer ? Recommendations Tests : Risque • Ara h 1 < 0,1 kUA/L •Ara h 3 < 0,1 kUA/L •Ara h 9 < 0,1 kUA/L •Ara h 8 = 8,4 kUA/L •CCD < 0,1 kUA/L Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 PR-10, Bet v 1-homologue Cas clinique (3) 3. Maud, F (15 ans): f13 (arachide) = 1.23 kUA/L – IgEs + : pollens de graminées, lait de vache, carotte, orange, tomate, froment, pomme de terre, ail, oignon, céleri, banane, pêche et arachide. Sensibilisation à une large variété d’aliments issus du règne végétal. Troubles gastro-intestinaux. Quels sont les risques ? – Sensibilisations multiples aux fruits et légumes. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas cliniques (3) Arachide (f13) = 1,23 kUA/L Ara h 2 (f423) < 0,1 kUA/L • Sensibilisation aux CCD : - Marqueurs de sensibilisation aux Déterminants Carbohydrates. - Multiple réactions croisées. - Rarement associé à des symptômes cliniques. • Tester les CCD si sensibilisations aux fruits et légumes, graînes. Arachide (f13) : Pos Ara h 2 : Nég Risques de réaction sévère? Comment explorer ? Recommendations Tests : Risques • Ara h 1 < 0,1 kUA/L •Ara h 3 < 0,1 kUA/L •Ara h 9 < 0,1 kUA/L •Ara h 8 < 0,1 kUA/L •CCD = 1,93 kUA/L Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 CCD Cas clinique (4) 4. Eddy, M (43 ans) : f13 (arachide) = 0,44 kUA/L – SPT+ : bouleau, pomme, pêche, banane, ail et arachide. Gonflement des lèvres Quels sont les risques ? – Sensibilisation au bouleau… Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas clinique (4) Arachide (f13) = 0,44 kUA/L Ara h 2 (f423) < 0,1 kUA/L • Sensibilisation aux profilines (Bet v 2) • Rarement associées à des symptômes cliniques sauf des OAS. De très rares réactions sévères dans une minorité de patients. • Présence de profilines dans de nombreux fruits et légumes. - Bouleau (Bet v 2), pomme (Mal d 4), pêche (Pru p 4), banane (Mus a 1), ail (All c 4), arachide (Ara h 5). Arachide(f13) : Pos Ara h 2 : Nég Risque de réaction sévère? Comment explorer ? Recommendations Testés • Ara h 1 < 0,1 kUA/L •Ara h 3 < 0,1 kUA/L •Ara h 9 < 0,1 kUA/L •Ara h 8 < 0,1 kUA/L •CCD < 0,1 kUA/L Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 ? Bet v 2 = 4,6 kUA/L Cas clinique (5) 5. Nadia, F (24 ans): f13 (arachide) = 1,73 kUA/L f17 (noisette) = 4,23 kUA/L – – IgEs + : pomme, pêche, noisette et arachide SPT +++ : arachide, noix et noisette. Atopie, polyallergie, rhinoconjonctivite, OAS, urticaire et angiœdème Quels sont les risques ? …angioedème… Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Cas clinique (5) Arachide (f13) = 1,23 kUA/L Ara h 2 (f423) <0,1 kUA/L Noisette (f17) = 4,23 kUA/L Cor a 8 (f425) = 3,87 kUA/L Arachide (f13) : Pos Noisette (f17) : Pos Ara h 2 : Nég Cor a 8 : Pos Risque de réaction sévère? Comment explorer? Recommendations Test : • Ara h <0,1kUA/L •Ara h 3 <0,1kUA/L •Ara h 9 = 8,2 kUA/L Risques nsLTP Très haut risque de réaction sévère • Sensibilisation aux nsLTP : - Marqueur de réaction croisée. - Associé à des réactions sévères. - Principalement dans le sud de l’Europe. - Sensibilisation à la pomme (Mal d 3), pêche nsLTP (Pru p 3), noisette (Cor a 8) et arachide (Ara h 9). •Ara h 8 <0,1kUA/L •CCD <0,1kUA/L Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Plus complexe… • Julien, B (18 ans): – Cas clinique complexe !! Atopie, Dermatite atopique, Rhinite perannuelle, Si nous Eczema géant. suivons IgEs pour extraits Arachide,f13 9.71 Soja,f14 4.43 Crabe,f23 1.98 Ail,f47 la même démarche, Blanc d’oeuf,f75 Allergie alimentaire (blanc d’oeuf, Pityrosporum orbiculare,m70 grâce à tous les recombinants, arachide, soja, crabe et ail) Dermatophagoïdes pteronyssinus,d1 – Comment expliquer les symptômes ? Blanc d’oeuf,f1 on pourrait tout expliquer !! SPT Pneumallergènes: Crevette ,f24 – + : D1 et D2, chien, graminées. – Douteux : bouleau. SPT Trophallergènes : – + Blanc d’oeuf, arachide, soja, ail. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 4.11 0.61 3.93 >10 5.37 2.64 Gx3:g1+g5+g6+g12+g13 93.6 Bouleau,t3 58.0 Patient: Nom : B. Julien Adresse: Rue des bouleaux 1… Request form ImmunoCAP™Components Some other components less useful in Belgium could be available. Don’t hesitate to ask to your Lab in case of specific clinical history. June 2009 Grass pollens : Epidermals & other proteins g6 Phleum pratense rPhl p 1 Phleum pratense g205 rPhl p 2 Phleum pratense g206 nPhl p 4 Phleum pratense g208 rPhl p 5b Phleum pratense g215 rPhl p 6 Phleum pratense g209 rPhl p 7 Calc. Bind. Prot. Phleum pratense g210 rPhl p 11 Phleum pratense g211 rPhl p 12 Profilin Phleum pratense g212 Mix rPhl p 1, rPhl p 5b Phleum pratense g213 Mix rPhl p 7, rPhl p 12 Phleum pratense g214 e4: Cow Bos spp nBos d 6 BSA Serum albumin Bos spp. e204 Weed pollens : w6: Artemisia vulgaris nArt v1 Artemisia vulgaris w231 e5: Dog Canis familiaris rCan f 1 Canis familiaris e101 rCan f 2 Canis familiaris e102 nCan f 3 Serum albumin Canis familiaris e221 e1: Cat Felis domesticus rFel d 1 Felis domesticus e94 nFel d 2 serum albumin Felis domesticus e220 e83: Swine Sus scrofa Swine serum albumin Sus scrofa e222 t3: Betula verrucosa rBet v 1 PR10 Betula verrucosa t215 rBet v 2 Profilin Betula verrucosa t216 rBet v 4 Calc. Bind. Prot. Betula verrucosa t220 rBet v 6 Betula verrucosa t225 Mix rBet v 2, rBet v 4 Betula verrucosa t221 t9: Olea europaea nOle e 1 Olea europaea t224 Docteur: Nom: Cavalier Etienne Adresse : CHU de Liège Foods f85: Celery Apium graveolens rApi g 1.01 PR10 Apium graveolens f417 Occupational allergens f13: Peanut Arachis hypogaea rAra h 1 Arachis hypogaea f422 rAra h 2 Arachis hypogaea f423 rAra h 3 Arachis hypogaea f424 rAra h 8 PR10 Arachis hypogaea f352 rAra h 9 LTP Arachis hypogaea f427 d1: Dermatophagides pteronyssinus nDer p1 Dermatophagides pteronyssinus d202 rDer p2 Dermatophagides pteronyssinus d203 rDer p10 Tropomyosin Dermatophagides pteronyssinus d205 m6 : Alternaria alternata rAlt a 1 Alternaria alternata m229 f24 Shrimp rPen a 1 Tropomyosin Penaeus aztecus f351 f3: Fish (cod) rCyp c 1 Parvalbumin Cyprinus carpio f355 rGad c1 Parvalbumin Gadus morhua f426 En pratique, … Mites m3 : Aspergillus fumigatus rAsp f 1 Aspergillus fumigatus m218 rAsp f 2 Aspergillus fumigatus m219 rAsp f 3 Aspergillus fumigatus m220 rAsp f 4 Aspergillus fumigatus m221 rAsp f 6 Aspergillus fumigatus m222 f2: Milk Bos spp nBos d 4 α-lactalbumin Bos spp. f76 nBos d 5 β -lactoglobulin Bos spp. f77 nBos d 8 Casein Bos spp. f78 Bovine lactoferrin Bos spp. f334 En théorie, c’est possible… Tree pollens : Microorganisms f1 Egg white nGal d 1 Ovomucoid Gallus spp. f233 nGal d 2 Ovalbumin Gallus spp. f232 nGal d 3 Conalbumin Gallus spp. f323 nGal d 4 Lysozyme Gallus spp. k208 f17: Hazelnut Corylus avellana rCor a1 PR10 Corylus avellana f428 rCor a8 LTP Corylus avellana f425 f18: Brazil nut Bertholletia excelsa rBer e 1 Bertholletia excelsa f354 f14: Soy Glycine max rGly m 4 PR10 Glycine max f353 f95: Peach Prunus persica rPru p 1 PR10 Prunus persica f419 rPru p 3 LTP Prunus persica f420 rPru p 4 Profilin Prunus persica f421 f4: Wheat Triticum spp rTri a 19; Omega-5 Gliadin Triticum spp. f416 Date de demande: 19/11/2009 Signature: Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 k82: Hevea brasiliensis rHev b 1 Hevea brasiliensis k215 rHev b 3 Hevea brasiliensis k217 rHev b 5 Hevea brasiliensis k218 rHev b 6.01 Hevea brasiliensis k219 rHev b 6.02 Hevea brasiliensis k220 rHev b 8 Profilin Hevea brasiliensis k221 rHev b 9 Enolase Hevea brasiliensis k222 rHev b 11 Hevea brasiliensis k224 Enzymes nAna c 2 Bromelin Ananas comosus k202 nApi m 1 Phospholipase A2 Apis mellifera k203 nCar p 1 Papain Carica papaya k201 nGal d 4 Lysozyme Gallus spp. k208 α-amylase From Aspergillus oryzane k87 Alkalase From Bacillus sp. k205 Maxatase From Bacillus licheniformis k204 Pepsin From Sus scrofa k213 Savinase From Bacillus sp. k206 Carbohydrate Determinants (CCD) Bromelin k202 CCD; MUXF3 (from bromelin) Ro214 r = Recombinant n = Natif ImmunoCAP© ISAC • Fruit de l’association des firmes Phadia (expert des tests diagnostic in-vitro) et VBC Génomics (expert en microarrays) : L’« ImmunoCAP ISAC ». Alliance de la recherche dans le domaine de l’allergologie moléculaire et de l’innovante technologie des biochips. – Harwanegg C et al, Expert Rev Mol Diagn 2004 • Multiplex moderne utilisé comme outil supplémentaire pour le diagnostic in-vitro, par les allergologue et spécialistes, basé exclusivement sur les composants allergéniques. – – – – Plateforme miniaturisée d’immunoessais pour la mesure des IgEs dirigés contre >40 sources allergéniques communes, en un seul dosage. Biopuce composée de 103 allergènes natifs et recombinants immobilisés sur une support solide. Allergènes choisis en fonction de leur pertinence dans l’établissement d’un profil de sensibilisation. Tests sur 20 μL de sérum ou sang total. Permet de réaliser du CRD rapidement et à moindre coût. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Triplet d’allergènes après réaction fluorescente Molécule allergénique Immuno Solid-phase AllergenChip Anticorps secondaire (ISAC)anti IgE humain couplé à une molécule de fluorescence Anticorps IgE (dans le sérum du patient) 4 sites de réaction Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 ImmunoCAP® ISAC : Version 103. Protéines, Réactions croisées : – 11 PR-10 : – 2 Parvalbumines : ImmunoCAP ISAC Important ! (protéines Bet v 1-like) : version Bien representée, interêt ++ – 4 nsLTP : 103 Lesquelles sont représentatives? les plus – 4 Tropomyosines : En rajouter ? sera remplacé en juin 2010 par Important ! – Lesquelles? – 5 Profilines : – 5 albumines sériques : Tant de profilines existent… Lesquelles sont les plus Lesquelles sont les plus représentatives? représentatives des version différentes125 – Venin de guêpe et d’abeille : familles botaniques ? (> 20 allergènes différents ajoutés) Ajout prévu prochaine version – 5 Protéines de stockage ImmunoCAP ISAC Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Immuno Solid-phase Allergen Chip (ISAC) Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 B. Julien (18 ans) Bet v 1 homologues (PR-10): Bet v 1, Aln g 1, Cor a 1, Mal d 1, Pru p 1, Gly m 4, Ara h 8, Api g 1 Marqueurs d’espèce : Gal d 1, Bos d lactoferrine, Fel d 1, Fel d 4, Can f 1, Mus m 1, Alt a 1 Profilines : Pollens : Cyn d 1, Phl p 1, Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5, Phl p 6 et Ole e 1 Bet v 2, Ole e 2, Hev b 8, Mer a 1, Phl p 12 Der p 1, Der f 1, Der f 2, Der p 2, Eur m 2 Grâce au CRD, nous trouvons des explications : Nombreuses allergies alimentaires dues à la sensibilisation aux profilines, protéines PR-10 (OAS), tropomyosine (fruit de mer), lait de vache… Nombreuses graminées, acariens, animaux domestiques… qui expliquent la rhinite perannuelle exacerbée durant le période pollinique. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Tropomyosine : Der p 10 Autres nouveaux tests en allergologie • Les principaux allergènes impliqués dans l’allergie immédiate sont l’arachide, le poisson, les venins de guêpe et d’abeille, le latex et les médicaments. • Le diagnostic est en général basé sur une histoire clinique évocatrice (incluant une association temporelle entre l’exposition à l’allergène et l’apparition des symptômes), des prick tests positifs (Gold Standard dans ce contexte) et, si disponible, le dosage d’IgEs. • Lorsque le diagnostic in-vitro est indisponible via les moyens usuels (dosage d’IgEs) : – Dans le cas des médicaments (AB, AINS, curarisants, …), additifs alimentaires, colorants, conservateurs, excipients. • Dans le cas de discordances entre anamnèse clinique et résultats biologiques. • Lorsque les résultats des tests in-vivo sont ininterprétables, ou irréalisables : – Enfants – Si risque ++ – En cas de refus du patient de prendre un risque… • Pensez aux tests de provocations in-vitro : – CAST (Cellular Antigen Stimulation Test) – BAT (Basophil Activation Test) Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Nouveaux tests en allergologie • Ces tests offrent une nouvelle approche scientifiquement séduisante des réactions allergiques et d'intolérance en explorant leur mécanisme physiopathologique au niveau cellulaire. • Le concept de ces tests est de mimer in-vitro le contact entre l’allergène et les cellules qui vont générer les symptômes. • Sans danger pour le patient, ces tests de provocation in-vitro permettent d'explorer les réactions allergiques IgE-dépendantes. • Il permettent non seulement d'objectiver mais aussi de quantifier la réactivité des leucocytes par : – – • dosage quantitatif des sulfidoleucotriènes qu'ils sécrètent en réponse à une stimulation antigénique (CAST). Évaluation du pourcentage des basophiles activés via l’expression du marqueur CD63 de la membrane des basophiles activés (BAT). Techniques robustes et sur lesquelles on peut compter pour le diagnostic in-vitro des allergies immédiates et ce, en complément d’autres tests in-vitro déjà existants. – Intérêt dans la clinique en routine. – Mais : Nécessité d’une standardisation (seuil de décision clinique, dilutions des allergènes) Chaque allergène doit être étudié et testé un par un afin de déterminer la concentration optimale Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 A. Cellular Antigen Stimulation Test - CAST • Test de provocation in-vitro. • S’effectue sur du sang frais (cellules vivantes). • Test ELISA (immunoessai) • Il permettent d'objectiver et de quantifier la réactivité des leucocytes par dosage quantitatif des sulfidoleucotriènes qu'ils sécrètent en réponse à une stimulation antigénique. – Les leucotriènes (LT) sont des médiateurs puissants de la réaction allergique et participent à la genèse des manifestations cliniques de type asthme, rhinoconjonctivite, urticaire, oedème angiomateux et choc anaphylactique. • Grand intérêt dans le cadre des allergies médicamenteuses (AINS, Aspirine…), ou aux colorants, excipients… et pour les allergies aux venins. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 B. Basophil Activation Test - BAT • La cytométrie de flux est un outil intéressant pour l’analyse des différents types de cellules et permet d’identifier des populations cellulaires spécifiques, même dans le cas des populations présentes en petit nombre. – • L’identification des cellules est basée initialement sur l’expression du CD45 (antigène présent à la surface de leucocytes) et sur la présence d’IgE à la surface cellulaire. – • Les basophiles expriment le récepteur de haute affinité pour les IgE (FcεRI). Dans cette population définie, l’activation des cellules après avoir été mises en contact avec l’allergène est déterminée par l’expression du marqueur CD63 de la membrane. – • La technique semble idéale pour étudier la dégranulation des basophiles induite par l’allergène. CD63 est ancré dans la membrane des granules du basophile (contenant l’histamine) et son expression sur la partie externe de la cellule reflète la dégranulation cellulaire et la fusion des granules et la membrane plasmatique. L’expression du CD63 a été proposé comme un excellent moyen de monitorer l’activation des basophiles. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Boumiza R , Clinical and Molecular Allergy 2005, 3:9 Basophil Activation Test - BAT • Diagnostic : – Allergies alimentaires – Latex – Venins – Médicaments Curarisants, antibiotiques, AINS • Sensibilité comparable aux IgEs. • S’effectue sur du sang frais (cellules vivantes). • Permet de comparer des extraits allergéniques et des allergènes recombinants (Immunothérapie spécifique). • Suivre l’efficacité de l’Immunothérapie spécifique. – Cette technologie a plus de potentiel que d’embûches et les résultats fournis par cette technique sont utiles dans plusieurs situations malgré le fait que chaque laboratoire ait son propre protocole. – D. Ebo, Clinical & Experimental Allergy, 39 : 1115–1116 – María L. Sanz et al,Drug Hypersensitivity. Basel, Karger, 2007, pp 391–402 Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 En résumé • La route de la découverte des profils de sensibilisation est tracée… – Les extraits allergéniques sont utiles : En première intention, Ne permet pas de conclure dans tous les cas (multiple positivités des tests, manque de précision), IgEs pour les extraits pas toujours significatifs. Échecs de désensibilisation Ne permettent pas d’évaluer la sévérité des réactions allergiques Contribuent parfois à des régimes d’éviction trop larges… – Le CRD est entre nos mains. Sensibilisations peuvent causer des erreurs de diagnostic (et erreurs thérapeutiques également). Familles de protéines décrites, similarités de structure (homologie de chaînes d’acides-aminés ou homologie de structure) Allergie à une seule protéine peut causer des réactions croisées à d’autres protéines de la même famille. Allergènes recombinants permettent de se focaliser sur un (ou plusieurs) allergène(s) d’une source : – Disponibilité en CAP (et/ou en ISAC) ou en cours de développement… Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 En résumé • Les microarrays peuvent nous être profitables, dans des cas difficiles : – 103 recombinants détermination… or allergènes naturels purifiés en une seule Validation analytique de l’ImmunoCAP© ISAC : ok L’ImmunoCAP© ISAC a un rôle à jouer dans le diagnostic et le soin aux patients avec des profils de sensibilisation complexes. Comme cette technique génère potentiellement des résultats inattendus, la réalisation et l’interprétation d’un microarray doivent être évalués en parallèle avec la clinique du patient. • Interprétation des résultats difficile : – Destiné aux spécialistes ! – Nous sommes là pour vous aider… Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 En résumé • L’ImmunoCAP ISAC est un outil de choix pour évaluer le profil de sensibilisation d’un patient : – Polysensibilisé, atopique – Dont l’anamnèse n’est pas très claire – Dont les prick tests donnent beaucoup de positivités. • L’ImmunoCAP ISAC permet de travailler sur une quantité faible de sérum (20µL) et de gagner du temps. • La technique permet d’éviter les régimes d’éviction trop larges et d’améliorer le confort de vie du patient allergique/atopique… • Intérêt en pneumologie… Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 En résumé • Les tests de BAT et de CAST ne sont pas à utiliser en première intention. • Ils sont complémentaires aux tests cutanés et IgEs. • Intérêt particulier quand ces tests ne peuvent être réalisés ou aboutissent à des résultats douteux en comparaison avec l’anamnèse clinique. Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010 Merci pour votre attention !! Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010