Laboratoire & allergologie Nouvelles applications Colloque de Biologie Clinique Clinique André Renard Phn. Biol.
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Transcript Laboratoire & allergologie Nouvelles applications Colloque de Biologie Clinique Clinique André Renard Phn. Biol.
Laboratoire & allergologie
Nouvelles applications
Colloque de Biologie Clinique
Clinique André Renard
Phn. Biol. E. Cavalier
Phn Romy Gadisseur
02/03/2010
Épidémiologie de l’allergie
•
•
•
•
•
Allergie=4ème maladie chronique (OMS).
Asthme allergique =
1ère maladie chronique chez l’enfant .
+/- 30% allergiques.
Coût pour la société +++.
Allergies x 2 ces 15 dernières
années dans les pays développés !!
La raison ? Train de vie occidentalisé.
– Meilleure hygiène de vie
↓ infections => Réponse immunitaire modifiée et dirigée vers les allergènes de l’environnement :
Développement d’allergies.
↑ utilisation d’antibiotiques.
– Modification du régime alimentaire.
– Vie sédentaire (hygrométrie ++ & température ++) & Exposition aux allergènes
domestiques >> exposition à de nouveaux allergènes (confinement, air conditionné,
animaux domestiques…).
– Tabagisme passif de l’enfant (favorise la synthèse d’IgE).
– Pollution atmosphérique +++.
– Nouveaux allergènes (latex)
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Allergie : Définition…
“ Allergie ”
Maladie due à une réponse inadaptée et excessive
de notre organisme vis à vis de l’environnement :
des substances étrangères et normalement inoffensives
entraînent une réaction de défense de notre système
immunitaire, nuisible à l’organisme.
Allos = différent
Ergon = agir.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Hypersensibilités :
Classification de Gell et Coombs (I)
• Hypersensibilité de type 1
(H. immédiate, allergie réaginique ou atopique) :
– Immunité humorale = Allergie.
Médiée par les IgE spécifiques d’un allergène (IgE
dépendante).
Tendance héréditaire.
– Manifestations cliniques diverses (dermatite, conjonctivite,
asthme, rhinite pollinique, troubles digestifs, urticaire, choc
anaphylactique).
Apparaissent en quelques minutes.
– Les IgEs fixées sur les mastocytes tissulaires et sur les
basophiles sanguins, réagissent avec l’Ag (allergène),
induisant ainsi la dégranulation de ces cellules (libération
d’histamine et d’autres médiateurs).
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Hypersensibilités :
Classification de Gell et Coombs
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Ligne du temps… diagnostic de l’allergie.
Caractérisation &
désignation des
IgE
Tests de
Provocation
(SPT)
1880
Standardisation
des extraits
allergéniques
RAST
1967
Panels d’allergènes
recombinants mimant
des extraits
allergéniques
1ers
allergènes
clonés
1988-91
ImmunoCAP ISAC
(Phadia/ VBC Genomics)
Premier ”allergen
microarray”
1995-99
2000
2008
Tests IN-VIVO
Tests IN-VITRO
Component – Resolved -Diagnostics
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Recombinants : Production
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Components - Resolved Diagnosis
(CRD)
« CRD »
Component-Resolved Diagnosis uses defined recombinant allergens to dissect
the individual patient’s IgE reactivity profile with the aim of identifying the
disease-eliciting molecules.
Valenta R et al, Clin Exp Allergy 1999
Molecules, genuine markers tell you the truth !
Mari A., VIP Customers day, Brussels, 17th November 2009.
De nombreuses sources allergéniques contiennent des allergènes proches
au niveau de leur structure et au niveau de leur activité immunologique.
CRD = Déterminer la présence d’IgE pour des composants allergéniques responsables
de réactions croisées afin de comprendre une sensibilisation et
d’évaluer la sévérité des symptômes.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Allergènes, Bases de données
Allergènes de l’
arachide
Propriété biochimique
de l’allergène
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
IgE « spécifiques » pour un extrait
• Du point de vue du laboratoire…
–
–
–
–
Que veut dire un taux d’IgEs pour un extrait allergénique ?
Que faire de ce résultat ?
Qu’en est-il des soins pour le patient ?
Qu’en est-il du risque pour le patient ?
Impact sur le suivi du patient et sa santé (appréciation de la sévérité,
risques, choix thérapeutiques, amélioration de la qualité de vie du
patient).
• Y a-t-il un intérêt à réaliser du Component-resolved
diagnosis en routine dans…
notre laboratoire ?
en pneumologie(-allergologie)?
–
–
–
–
–
Pollution, allergènes domestiques & allergies,
Asthme et/ou rhinite allergique et allergies alimentaires,
Asthme du boulanger, expositionnel
Rhinites allergiques & désensibilisations,
…
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas Clinique (I)
1.
Julie, F (29 ans):
f13 (arachide) = 27.4 kUA/L.
SPT + : arachide, noix, noisette, graine de sésame,
graminées, bouleau, pignon.
SPT - : soja, oeuf et noix.
Asthme, troubles gastrointestinaux et érythème après
ingestion de noix.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas Clinique (II)
2.
Laurent, H (24 ans):
3.
f13 (arachide) = 1.22 kUA/L.
IgEs + : bouleau, pomme, poire, pêche, abricot, noisette, noix et récemment
céleri et fenouil.
Atopie, polysensibilisé, oral allergy syndrome (OAS) et évolution récente
vers des difficultés respiratoires.
Maud, F (15 ans):
f13 (arachide) = 1.23 kUA/L
IgEs + : pollens de graminées, lait de vache, carotte, orange, tomate, froment,
pomme de terre, oignon, ail, céleri, banane, pêche et arachide.
Sensibilisation à différentes variétés de plantes
Troubles gastro-intestinaux.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas Clinique (III)
4. Eddy, M (43 ans) :
f13 (arachide) = 0,44 kUA/L
SPT+ : bouleau, pomme, pêche, banane, ail, arachide.
Gonflement des lèvres.
Sensibilisation au bouleau… Que pouvons-nous conclure?
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas Clinique (IV)
5.
Nadia, F (24 ans) :
5 cas cliniques…
f13 (arachide)Pour
= 1,73ces
kUA/L
f17 (noisette) = 4,23 kUA/L
Les
pour l’extrait
d’arachide
sont-ils proportionnels
taux
IgEsd’IgEs
+ : pomme,
pêche, noisette,
arachide
à la sévérité
de l’allergie ?
SPT +++ : arachide,
noix, noisette..
Atopie, polyallergie, rhinoconjonctivite, OAS, urticaire et
angiœdème
Qu’en est-il du risque?
Régime d’éviction ou non ?
Quel suivi pour le patient?
Évolution du patient ?
?
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Prédire les réactions croisées
• Proteines de stockage
– Présente dans les graines, ressource matérielle lors de la
croissance de la plante.
– Parfois, stable et résistante à la chaleur causant des
réactions aux aliments cuits.
rSes i 3
Cor a 9
rBer e 1
Ara h 1
Ara h 2
Ara h 3
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
nGly mβ-conglycinin
nGly m glycinin
Prédire les réactions croisées
• Protéines PR-10, Bet v 1 homologue
– Instable à la chaleur, aliment cuit toléré en général.
» Breiteneder H, Biotechnol Adv, 2005
– Associé à des symptômes locaux comme l’Oral Allergy Syndrome (OAS).
– Associé aux réactions allergiques aux fruits et légumes au Nord de
l’Europe.
Cor a 1.01
Cor a 1.04
Gly m 4
Ara h 8
Api g 1
Dau c 1
Bet v 1
Pru p 1
Mal d 1
Pyr c 1
Pru ar 1
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Pru av 1
Oral Allergy Syndrome (OAS)
•
Syndrome d’Allergie Orale : Réaction
allergique, gêne au niveau de la bouche qui
apparaît instantanément ou peu de temps
après l’ingestion de l’aliment.
–
•
Un chatouillement ou sensation de brûlure au
niveau des lèvres, de la bouche et/ou du pharynx.
Associé à la sensibilisation à une ou
plusieurs protéine de type PR-10 càd
homologue de Bet v 1 (bouleau).
o
o
o
o
o
o
o
o
Noisette, 46%
Pomme, 39%
Pêche, 24%
Cerise, 22%
Noix, 21%
Poire, 20%
Amande, 19%
Prune, 17%
o
o
o
o
o
o
o
Noix du Brésil, 16%
Pomme de terre, 15%
PR-10
Carotte, 13%
rBet v 1
Arachide, 10%
rPru p 1
Fraise, 10%
rGly m 4
rAra h 8
Orange, 9%
rApi g 1.01
rAln g 1
Abricot, 7%
rCor a 1
nAct d 8
rMal d 1
rDau c 1
Birch
Hazel
Alder
Hornbeam
Beech
Apple
Cherry
Apricot
Pear
Medicago
Garden pea
Soybean
Tomato
Celery
Carrot
Asparagus
1
MGVFNYETET
MGVFNYETES
MGVFNYEAET
MGVFNYEAET
MGVFTYESEN
MGVFNYETET
MGVFTYESEF
MGVFTYETEF
MGLYTFENEF
MGVFNFEDET
MGVFNVEDEI
MGVFTFEDEI
MGVNTYTYES
MGVQKTVVEA
MGAQSHSLEI
MSSSAVSHEI
TSVIPAARLF
TSVIPAARLF
PSVIPAARLF
TSVIPAARLF
TSVIPPARLF
TSVIPAPRLF
TSEIPPPRLF
TSVIPPEKLF
TSEIPPPRLF
TSIVAPARLY
TSVVAPAILY
NSPVAPATLY
TTTISPTRLF
PSTVSAEKMY
TSSVSAEKIF
ESSVSAARLF
KAFILDGDNL
KAFILDGNNL
KAFILDGDKL
KAFILDGNNL
KAFVLDADNL
KAFILDGDNL
KAFVLDADNL
KAFILDADNL
KAFVLDADNL
KALVTDSDNL
KALVTDADNL
KALVTDADNV
KALVLDFDNL
QGFLLDMDTV
SGIVLDVDTV
KASMIEWHNL
FPKVAPQAIS
IPKVAPQAVS
LPKVAPEAVS
IPKVAPQAVS
IPKVAPQSIK
IPKIAPQAIK
VPKIAPQAIK
IPKVAPTAVK
IPKIAPQAIK
IPKVI.DAIQ
TPKVI.DAIK
IPKAL.DSFK
VPKLLSQHVK
FPKVLPQLIK
IPKAAPGAYK
APKILPEIVS
SVENIEGNGG
SVENVEGNGG
SVENIEGNGG
SVENVEGNGG
STETLEGDGG
STEIIEGDGG
HSEILEGDGG
GTEILEGDGG
HAEILEGNGG
SIEIVEGNGG
SIEIVEGNGG
SVENVEGNGG
NNETIEGDGG
SVEILEGDGG
SVDV.KGDGG
SASVVAVDGG
60
PGTIKKISFP
PGTIKKITFS
PGTIKKITFP
PGTIKKITFS
PGTIKKITFG
VGTIKKVTFG
PGTIKKITFG
VGTIKKVTFG
PGTIKKITFG
AGTIKKLTFV
AGTIKKLTFV
PGTIKKITFL
VGSIKQMNFV
VGTVKLVHLG
AGTVRIITLP
VGSIRQINFT
Birch
Hazel
Alder
Hornbeam
Beech
Apple
Cherry
Apricot
Pear
Medicago
Garden pea
Soybean
Tomato
Celery
Carrot
Asparagus
EGFPFKYVKD
EGSPFKYVKE
EGSPFKYVKE
EGSPVKYVKE
EGSQFKYVKH
EGSQYGYVKQ
EGSQYGYVKH
EGSQYAYVKH
EGSQYGYVKH
EGGETKYDLH
EDGETKHVLH
EDGETKFVLH
EGGPIKYLKH
EATEYTTMKQ
EGSPITSMTV
SAMPFPYLKE
RVDEVDHTNF
RVEEVDHTNF
RVDEVDRVNF
RVEEVDHTNF
RIDEVDQANF
RVNGIDKDNF
KIDSIDKENY
RVDGIDKDNL
RVDSIDEASY
KVDLVDDVNF
KVELVDVANL
KIESIDEANL
KIHVIDDKNL
KVDVIDKAGL
RTDAVNKEAL
RLDFVDEANF
KYNYSVIEGG
KYSYTVIEGG
KYSFSVIEGG
KYSYTVIEGG
SYGYSVIEGD
TYSYSMIEGD
SYSYTLIEGD
SYSYTLIEGD
SYAYTLIEGD
AYNYSIVGGG
AYNYSIVGGV
GYSYSVVGGA
ETKYSLIEGD
AYTYTTIGGD
TYDSTVIDGD
ECKSSLIEGG
PIGDTLEKIS
PVGDKVEKIC
AVGDALEKVC
PVGDKVEKIC
VVSGIIEKIS
TLSDKLEKIT
ALGDTLEKIS
ALSDVIENIA
ALTDTIEKIS
GLPDTVEKIS
GFPDTVEKIS
ALPDTAEKIT
ILGEKLESIT
ILVDVLESVV
ILLGFIESIE
DLGTKLESAS
NEIKIVATPD
NEIKIVAAPD
NEIKIVAAPD
NEIKIVAAPD
YEIKIVASPD
YETKLIASPD
YETKLVASPS
YDIKLVASPD
YEAKLVASGS
FESKLSAGPD
FEAKLSAGPN
FDSKLVAGPN
YDIKFEANDN
NEFVVVPT.D
THLVVVPTAD
SHFKLVPSSN
120
GGSILKISNK
GGSILKISNK
GGSILKISNK
GGSILKITSK
GGSLLKSTSK
GGSIIKTTSH
GGSIIKSTSH
GGSIVKTTSH
.GSTIKSISH
GGSIAKLTVK
GGSIAKLSVK
GGSAGKLTVK
GGCVYKTTTE
GGCIVKNTTI
GGSITKTTAI
GGCVVKLEGI
Birch
Hazel
Alder
Hornbeam
Beech
Apple
Cherry
Apricot
Pear
Medicago
Garden pea
Soybean
Tomato
Celery
Carrot
Asparagus
YHTKGDHEVK
YHTKGDHEVD
FHTKGDHEIN
YHTKGDHEVP
YHIKGNHEIK
YHAKGDVEIK
YHTKGNVEIK
YHTKGDVEIK
YHTKGDIEIK
YFTKGDAAPS
YFTKGDAAPS
YETKGDAEPN
YHTKGDHVVS
YNTKGDAVLP
FHTKGDAVVP
FKALPGVETT
AEQVKASKEM
AEHIKGGKEK
AEQIKIEKEK
AEHIKGGKER
EEEVKAGKEK
EEHVKAGKEK
EEHVKAGKEK
EEQVKAGKEK
EEHVKAGKEK
EEEIKGGKAR
EEQLKTDKAK
QDELKTGKAK
EEEHNVGRRE
EDKIKEATEK
EENIKFADEQ
DEVAK.GKEM
GETLLRAVES
VEGLFRAVEA
AVGLLKAVES
VEGLLKPVEA
AAGLFKAVEA
ASGLFKLLEA
ASNLFKLIET
AAGLFKLVEA
AHGLFKLIES
GDGLFKALEG
GDGLFKALEG
ADALFKAIEA
NHEYFQGCRS
SALAFKAVEA
NTALFKAIEA
MTNAIKAAEA
YLLAHSDAYN
YLLAHSDAYN
YLLAHSDAYN
YLLAHTAEYN
YLLAHPDAYN
YLLAHSDAYN
YLKGHPDAYN
YLLANPDAYN
YLKDHPDAYN
YVLANPD.Y~
YCLAHPD.YN
YLLAHPD.YN
IPSRESFCLR
YLLANLQFLA
YLIAN~~~~~
YLVANPTAYA
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
N~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
LNIDEKESGL
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
~~~~~~~~~~
178
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
HVRNYACT
~~~~~~~~
~~~~~~~~
~~~~~~~~
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Prédire les réactions croisées
• LTP (non-specific Lipid Transfer Protein, nsLTP)
– Protéines stables à la chaleur et à la digestion, causent donc aussi des
allergies aux aliments cuits.
– Souvent associées à des réactions systémiques, réactions plus sévères qui
suivent l’OAS.
– Les LTPs causent souvent des allergies alimentaires aux fruits en l’absence
d’allergie pollinique.
– Souvent, associées aux réactions allergiques aux fruits et légumes au Sud de
l’Europe.
LTP
Zea m 14
Cor a 8
Pru p 3
Pru av 3
Mal d 3
Pru ar 3
Ara h 9
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
nPru p 3
rCor a 8
rPar j 2
nArt v 3
Ara h 9
Mal d 3
Zea m 4
Jug r 3
Prédire les réactions croisées
• Profiline
– Rarement associée à des symptômes cliniques mais réactions sévères pour
une minorité de cas.
– Les profilines sont présentes dans une large variété de pollens (d’arbres,
d’herbacées et de graminées) et d’aliments d’origine végétales.
– Il y a une grande homologie de structure entre les profilines des différents
fruits et légumes.
Ara h 5
rMer a 1
rPhl p 12
rHev b 8
rMal d 4
Pru p 4
rCor a 2
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
rOle e 2
rBet v 2
PFL
rPhl p 12
rBet v 2
nOle e 2
rMer a 1
rHev b 8
rMal d 4
rPru p 4
nAct d 9
nAna c 1
nAra h 5
rPyr c 4
En résumé…
Symptômes
caractéristiques
Local
(OAS)
Systémique
Profil de sensibilisation
protéines
PR-10
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
nsLTP
Profilines
Réactions croisées in-vitro
• CCD (MUXF3) :
– Marqueur de sensibilisation aux déterminants carbohydrates (crossreacting carbohydrate determinants). Glyco-épitopes.
– Présents dans la majorité des plantes,
– Il s’agit d’IgEs dirigés contre les glycans : causent des profils de
sensibilisations croisées larges parmi les extraits allergéniques (parfois
responsables de réactions croisées in-vitro).
effets « in-vivo » ?
– Rarement associé à des symptômes cliniques…
» Mais, publications ?
» A confronter aux informations cliniques et aux SPT…
– Tester si…
Sensibilisation aux fruits et légumes, graînes.
Sensibilisation au latex chez un patient
pollinique sans exposition occupationnelle.
Sensibilisation au venin d’Hyménoptère
avec/sans sensibilisation aux pollens.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Arachis Hypogea
• Ara h 1 : Protéine de stockage (vicilline)
• Ara h 9 : nsLTP
• Stable à la chaleur et à la digestion.
• allergène majeur
• Ara h 2 : Protéine de stockage (conglutine)
• Réactions sévères >> réactions systémiques !
• + fréquent, sensitizing potential ++,
• Ara h 8 : Profiline
stability ++ to digestion.
Allergenicity :
• Réactions croisées entre de nombreux fruits
et légumes.
Ara h 2 est un allergène 100 fois plus
puissant que Ara h 1
• allergène mineur, rares sensibilisations.
• Ara h 3 : Protéines de stockage (glycinine)
• Ara h 8 : PR-10
Koppelman SJ et al, Clin Exp Allergy 2004,34:583
• CCD
(MUXF3)
Ara h 2 possède un haute
stabilité
protéolytique
• allergènes majeurs de l’arachidechez les
Lehmann
K et al, Biochem J,
2006:395-463 Carbohydrate Determinants
• Cross-reactive
patients allergiques au pollen
de bouleau.
• Rarement
à des symptômes.
Après rôtissage
de et
l’arachide,
l’allergénicité
d’Ara hassociés
2 est multipliée
par 3
• Sensible
à la chaleur
à la digestion.
Maleki SJ et al, J Allergy Clin
Immunol,dans
2003 la majorité des plantes.
• Présent
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Du point de vue du laboratoire :
Comment contribuer à diagnostiquer une allergie à l’arachide ?
Arachide (f13) + Ara h 2 (f423)
Arachide (f13) : Nég
Arachide (f13) : Pos
Arachide (f13) : Pos
Ara h 2 : Nég
Ara h 2 : Nég
Ara h 2 : Pos
Peu de risque de
réactions sévères
Risques de réaction sévère?
Très haut risque de
réaction sévère
Comment explorer ?
Recommendations
Bouleau (Nord de
l’Europe) :
test Ara h 8 (f352)
Comment explorer?
Recommendations
Test :
Risque
• Ara h 1 (f422)
•Ara h 3 (f424)
•Ara h 9 (f427)
•Ara h 8 (f352)
•CCD (Ro214)
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas clinique (1)
1.
Julie, F (29 ans):
f13 (peanut) = 27.4 kUA/L.
– SPT + : arachide, noix, noisette, graîne de sésame, bouleau,
graminées, pignon de pin.
– SPT - : soja, blanc d’oeuf, noix.
Asthme, intolérance gastrointestinale et érythème après
ingestion de noix.
Quels sont les risques ? Bouleau?
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas clinique (1)
Arachide (f13) = 27,4 kUA/L
Ara h 2 (f423) = 14,2 kUA/L
Arachide (f13) : Pos
Ara h 2 : Pos
Très haut risque de
réaction sévère
Comment explorer?
Recommendations
Tests :
• Ara h 1 = 3,46 kUA/L
•Ara h 3 = 0,6 UA/L
•Ara h 9 <0,1 kUA/L
•Ara h 8 = 2,27 kUA/L
Risques
• Sensibilisation à Ara h 8 due à une allergie au
bouleau (PR-10). Réactions croisées : protéines de stockage ??
• Sensibilisation à 3 allergènes majeurs d’arachide.
Allergènes majeurs de l’arachide
Protéines de stockage
• Sensibilisation
à Ara h 2 : Protéine de stockage
(conglutine), Stable ++ à la digestion, régime
d’éviction
d’arachide car risque de réaction sévère ++.
protéine PR-10 de l’arachide !
•CCD < 0,1 kUA/L
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas clinique (2)
2.
Laurent, H (24 ans) :
f13 (arachide) = 1.22 kUA/L.
–
IgEs + : bouleau, pomme, poire, noix, noisette, abricot, et récemment
céleri et fenouil.
Atopie, polysensibilisé, oral allergy syndrome(OAS) et récemment
évolution vers des difficultés respiratoires.
Quels sont les risques?
–
–
Qu’en est-il de la sensibilisation au Bouleau ?
Et l ’évolution récente de l’allergie ?
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas clinique (2)
Arachide (f13) = 1,22 kUA/L
Ara h 2 (f423) < 0,10 kUA/L
• Sensibilisation à l’arachide après
allergie au bouleau (PR-10 proteins).
• Sensibilisation aux autres PR-10 :
- Pomme (Mal d 1), poire (Pyr c1), pêche (Pru
p 1), abricot (Pru ar 1), noisette (Cor a 1) et
récemment le céleri (Api g 1)
•Dans ce cas, évolution de l’OAS avec
détresse respiratoire expliquée par une
une sensibilisation récente à Api g 1.
Arachide (f13) : Pos
Ara h 2 : Nég
Risques de réaction sévère ?
Comment explorer ?
Recommendations
Tests :
Risque
• Ara h 1 < 0,1 kUA/L
•Ara h 3 < 0,1 kUA/L
•Ara h 9 < 0,1 kUA/L
•Ara h 8 = 8,4 kUA/L
•CCD < 0,1 kUA/L
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
PR-10, Bet v 1-homologue
Cas clinique (3)
3.
Maud, F (15 ans):
f13 (arachide) = 1.23 kUA/L
–
IgEs + : pollens de graminées, lait de vache, carotte, orange, tomate,
froment, pomme de terre, ail, oignon, céleri, banane, pêche et arachide.
Sensibilisation à une large variété d’aliments issus du règne végétal.
Troubles gastro-intestinaux.
Quels sont les risques ?
–
Sensibilisations multiples aux fruits et légumes.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas cliniques (3)
Arachide (f13) = 1,23 kUA/L
Ara h 2 (f423) < 0,1 kUA/L
• Sensibilisation aux CCD :
- Marqueurs de sensibilisation
aux Déterminants Carbohydrates.
- Multiple réactions croisées.
- Rarement associé à des
symptômes cliniques.
• Tester les CCD si sensibilisations aux
fruits et légumes, graînes.
Arachide (f13) : Pos
Ara h 2 : Nég
Risques de réaction sévère?
Comment explorer ?
Recommendations
Tests :
Risques
• Ara h 1 < 0,1 kUA/L
•Ara h 3 < 0,1 kUA/L
•Ara h 9 < 0,1 kUA/L
•Ara h 8 < 0,1 kUA/L
•CCD = 1,93 kUA/L
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
CCD
Cas clinique (4)
4. Eddy, M (43 ans) :
f13 (arachide) = 0,44 kUA/L
–
SPT+ : bouleau, pomme, pêche, banane, ail et arachide.
Gonflement des lèvres
Quels sont les risques ?
–
Sensibilisation au bouleau…
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas clinique (4)
Arachide (f13) = 0,44 kUA/L
Ara h 2 (f423) < 0,1 kUA/L
• Sensibilisation aux profilines (Bet v 2)
• Rarement associées à des symptômes
cliniques sauf des OAS. De très rares
réactions sévères dans une minorité de
patients.
• Présence de profilines dans de
nombreux fruits et légumes.
- Bouleau (Bet v 2), pomme (Mal d 4),
pêche (Pru p 4), banane (Mus a 1), ail (All c
4), arachide (Ara h 5).
Arachide(f13) : Pos
Ara h 2 : Nég
Risque de réaction sévère?
Comment explorer ?
Recommendations
Testés
• Ara h 1 < 0,1 kUA/L
•Ara h 3 < 0,1 kUA/L
•Ara h 9 < 0,1 kUA/L
•Ara h 8 < 0,1 kUA/L
•CCD < 0,1 kUA/L
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
?
Bet v 2 = 4,6 kUA/L
Cas clinique (5)
5.
Nadia, F (24 ans):
f13 (arachide) = 1,73 kUA/L
f17 (noisette) = 4,23 kUA/L
–
–
IgEs + : pomme, pêche, noisette et arachide
SPT +++ : arachide, noix et noisette.
Atopie, polyallergie, rhinoconjonctivite, OAS, urticaire et angiœdème
Quels sont les risques ? …angioedème…
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Cas clinique (5)
Arachide (f13) = 1,23 kUA/L
Ara h 2 (f423) <0,1 kUA/L
Noisette (f17) = 4,23 kUA/L
Cor a 8 (f425) = 3,87 kUA/L
Arachide (f13) : Pos
Noisette (f17) : Pos
Ara h 2 : Nég
Cor a 8 : Pos
Risque de réaction sévère?
Comment explorer?
Recommendations
Test :
• Ara h <0,1kUA/L
•Ara h 3 <0,1kUA/L
•Ara h 9 = 8,2 kUA/L
Risques
nsLTP
Très haut risque de
réaction sévère
• Sensibilisation aux nsLTP :
- Marqueur de réaction croisée.
- Associé à des réactions sévères.
- Principalement dans le sud de l’Europe.
- Sensibilisation à la pomme (Mal d 3), pêche
nsLTP
(Pru p 3), noisette (Cor a 8) et arachide (Ara h 9).
•Ara h 8 <0,1kUA/L
•CCD <0,1kUA/L
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Plus complexe…
• Julien, B (18 ans):
– Cas clinique complexe !!
Atopie,
Dermatite atopique,
Rhinite perannuelle,
Si nous
Eczema
géant. suivons
IgEs pour extraits
Arachide,f13
9.71
Soja,f14
4.43
Crabe,f23
1.98
Ail,f47
la même démarche,
Blanc d’oeuf,f75
Allergie alimentaire (blanc d’oeuf,
Pityrosporum orbiculare,m70
grâce
à
tous
les
recombinants,
arachide, soja, crabe et ail)
Dermatophagoïdes pteronyssinus,d1
– Comment expliquer les symptômes ?
Blanc d’oeuf,f1
on pourrait tout expliquer
!!
SPT Pneumallergènes:
Crevette ,f24
– + : D1 et D2, chien, graminées.
– Douteux : bouleau.
SPT Trophallergènes :
– + Blanc d’oeuf, arachide, soja, ail.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
4.11
0.61
3.93
>10
5.37
2.64
Gx3:g1+g5+g6+g12+g13
93.6
Bouleau,t3
58.0
Patient: Nom : B. Julien
Adresse: Rue des bouleaux 1…
Request form ImmunoCAP™Components
Some other components less useful in Belgium could be available.
Don’t hesitate to ask to your Lab in case of specific clinical history.
June 2009
Grass pollens :
Epidermals & other proteins
g6 Phleum pratense
rPhl p 1 Phleum pratense g205
rPhl p 2 Phleum pratense g206
nPhl p 4 Phleum pratense g208
rPhl p 5b Phleum pratense g215
rPhl p 6 Phleum pratense g209
rPhl p 7 Calc. Bind. Prot. Phleum pratense g210
rPhl p 11 Phleum pratense g211
rPhl p 12 Profilin Phleum pratense g212
Mix rPhl p 1, rPhl p 5b Phleum pratense g213
Mix rPhl p 7, rPhl p 12 Phleum pratense g214
e4: Cow Bos spp
nBos d 6 BSA Serum albumin Bos spp. e204
Weed pollens :
w6: Artemisia vulgaris
nArt v1 Artemisia vulgaris w231
e5: Dog Canis familiaris
rCan f 1 Canis familiaris e101
rCan f 2 Canis familiaris e102
nCan f 3 Serum albumin Canis familiaris e221
e1: Cat Felis domesticus
rFel d 1 Felis domesticus e94
nFel d 2 serum albumin Felis domesticus e220
e83: Swine Sus scrofa
Swine serum albumin Sus scrofa e222
t3: Betula verrucosa
rBet v 1 PR10 Betula verrucosa t215
rBet v 2 Profilin Betula verrucosa t216
rBet v 4 Calc. Bind. Prot. Betula verrucosa t220
rBet v 6 Betula verrucosa t225
Mix rBet v 2, rBet v 4 Betula verrucosa t221
t9: Olea europaea
nOle e 1 Olea europaea t224
Docteur: Nom: Cavalier Etienne
Adresse : CHU de Liège
Foods
f85: Celery Apium graveolens
rApi g 1.01 PR10 Apium graveolens f417
Occupational allergens
f13: Peanut Arachis hypogaea
rAra h 1 Arachis hypogaea f422
rAra h 2 Arachis hypogaea f423
rAra h 3 Arachis hypogaea f424
rAra h 8 PR10 Arachis hypogaea f352
rAra h 9 LTP Arachis hypogaea f427
d1: Dermatophagides pteronyssinus
nDer p1 Dermatophagides pteronyssinus d202
rDer p2 Dermatophagides pteronyssinus d203
rDer p10 Tropomyosin Dermatophagides pteronyssinus d205
m6 : Alternaria alternata
rAlt a 1 Alternaria alternata m229
f24 Shrimp
rPen a 1 Tropomyosin Penaeus aztecus f351
f3: Fish (cod)
rCyp c 1 Parvalbumin Cyprinus carpio f355
rGad c1 Parvalbumin Gadus morhua f426
En pratique, …
Mites
m3 : Aspergillus fumigatus
rAsp f 1 Aspergillus fumigatus m218
rAsp f 2 Aspergillus fumigatus m219
rAsp f 3 Aspergillus fumigatus m220
rAsp f 4 Aspergillus fumigatus m221
rAsp f 6 Aspergillus fumigatus m222
f2: Milk Bos spp
nBos d 4 α-lactalbumin Bos spp. f76
nBos d 5 β -lactoglobulin Bos spp. f77
nBos d 8 Casein Bos spp. f78
Bovine lactoferrin Bos spp. f334
En théorie, c’est possible…
Tree pollens :
Microorganisms
f1 Egg white
nGal d 1 Ovomucoid Gallus spp. f233
nGal d 2 Ovalbumin Gallus spp. f232
nGal d 3 Conalbumin Gallus spp. f323
nGal d 4 Lysozyme Gallus spp. k208
f17: Hazelnut Corylus avellana
rCor a1 PR10 Corylus avellana f428
rCor a8 LTP Corylus avellana f425
f18: Brazil nut Bertholletia excelsa
rBer e 1 Bertholletia excelsa f354
f14: Soy Glycine max
rGly m 4 PR10 Glycine max f353
f95: Peach Prunus persica
rPru p 1 PR10 Prunus persica f419
rPru p 3 LTP Prunus persica f420
rPru p 4 Profilin Prunus persica f421
f4: Wheat Triticum spp
rTri a 19; Omega-5 Gliadin Triticum spp. f416
Date de demande: 19/11/2009
Signature:
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
k82: Hevea brasiliensis
rHev b 1 Hevea brasiliensis k215
rHev b 3 Hevea brasiliensis k217
rHev b 5 Hevea brasiliensis k218
rHev b 6.01 Hevea brasiliensis k219
rHev b 6.02 Hevea brasiliensis k220
rHev b 8 Profilin Hevea brasiliensis k221
rHev b 9 Enolase Hevea brasiliensis k222
rHev b 11 Hevea brasiliensis k224
Enzymes
nAna c 2 Bromelin Ananas comosus k202
nApi m 1 Phospholipase A2 Apis mellifera k203
nCar p 1 Papain Carica papaya k201
nGal d 4 Lysozyme Gallus spp. k208
α-amylase From Aspergillus oryzane k87
Alkalase From Bacillus sp. k205
Maxatase From Bacillus licheniformis k204
Pepsin From Sus scrofa k213
Savinase From Bacillus sp. k206
Carbohydrate Determinants (CCD)
Bromelin k202
CCD; MUXF3 (from bromelin) Ro214
r = Recombinant
n = Natif
ImmunoCAP© ISAC
•
Fruit de l’association des firmes Phadia (expert des tests diagnostic in-vitro) et VBC
Génomics (expert en microarrays) : L’« ImmunoCAP ISAC ».
Alliance de la recherche dans le domaine de l’allergologie moléculaire et de l’innovante
technologie des biochips.
– Harwanegg C et al, Expert Rev Mol Diagn 2004
•
Multiplex moderne utilisé comme outil supplémentaire pour le diagnostic in-vitro,
par les allergologue et spécialistes, basé exclusivement sur les composants
allergéniques.
–
–
–
–
Plateforme miniaturisée d’immunoessais pour la mesure des IgEs dirigés contre >40 sources
allergéniques communes, en un seul dosage.
Biopuce composée de 103 allergènes natifs et recombinants immobilisés sur une support solide.
Allergènes choisis en fonction de leur pertinence dans l’établissement d’un profil de sensibilisation.
Tests sur 20 μL de sérum ou sang total.
Permet de réaliser du CRD rapidement et à moindre coût.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Triplet d’allergènes
après réaction
fluorescente
Molécule
allergénique
Immuno Solid-phase AllergenChip
Anticorps secondaire
(ISAC)anti IgE humain
couplé à une molécule
de fluorescence
Anticorps IgE
(dans le sérum du patient)
4 sites de réaction
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
ImmunoCAP® ISAC : Version 103.
Protéines, Réactions croisées :
– 11 PR-10 :
– 2 Parvalbumines :
ImmunoCAP ISAC
Important !
(protéines Bet v 1-like) :
version
Bien representée, interêt ++
– 4 nsLTP :
103
Lesquelles sont
représentatives?
les
plus
– 4 Tropomyosines :
En rajouter ?
sera remplacé en juin 2010
par
Important !
– Lesquelles?
– 5 Profilines :
– 5 albumines sériques :
Tant de profilines existent…
Lesquelles sont les plus
Lesquelles
sont
les
plus
représentatives?
représentatives
des version
différentes125
– Venin de guêpe et d’abeille :
familles botaniques ?
(> 20 allergènes différents ajoutés)
Ajout prévu prochaine version
– 5 Protéines de stockage
ImmunoCAP ISAC
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Immuno Solid-phase Allergen Chip (ISAC)
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
B. Julien (18 ans)
Bet v 1 homologues (PR-10):
Bet v 1, Aln g 1, Cor a 1,
Mal d 1, Pru p 1, Gly m 4,
Ara h 8, Api g 1
Marqueurs d’espèce :
Gal d 1, Bos d
lactoferrine, Fel d 1,
Fel d 4, Can f 1, Mus
m 1, Alt a 1
Profilines :
Pollens : Cyn d 1, Phl p 1,
Phl p 2, Phl p 4, Phl p 5,
Phl p 6 et Ole e 1
Bet v 2, Ole e 2, Hev b
8, Mer a 1, Phl p 12
Der p 1, Der f 1, Der f
2, Der p 2, Eur m 2
Grâce au CRD, nous trouvons des explications :
Nombreuses allergies alimentaires dues à la sensibilisation aux profilines,
protéines PR-10 (OAS), tropomyosine (fruit de mer), lait de vache…
Nombreuses graminées, acariens, animaux domestiques… qui expliquent
la rhinite perannuelle exacerbée durant le période pollinique.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Tropomyosine : Der p 10
Autres nouveaux tests en allergologie
•
Les principaux allergènes impliqués dans l’allergie immédiate sont l’arachide, le poisson,
les venins de guêpe et d’abeille, le latex et les médicaments.
•
Le diagnostic est en général basé sur une histoire clinique évocatrice (incluant une
association temporelle entre l’exposition à l’allergène et l’apparition des symptômes), des
prick tests positifs (Gold Standard dans ce contexte) et, si disponible, le dosage d’IgEs.
•
Lorsque le diagnostic in-vitro est indisponible via les moyens usuels (dosage d’IgEs) :
– Dans le cas des médicaments (AB, AINS, curarisants, …), additifs alimentaires,
colorants, conservateurs, excipients.
•
Dans le cas de discordances entre anamnèse clinique et résultats biologiques.
•
Lorsque les résultats des tests in-vivo sont ininterprétables, ou irréalisables :
– Enfants
– Si risque ++
– En cas de refus du patient de prendre un risque…
•
Pensez aux tests de provocations in-vitro :
– CAST (Cellular Antigen Stimulation Test)
– BAT (Basophil Activation Test)
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Nouveaux tests en allergologie
•
Ces tests offrent une nouvelle approche scientifiquement séduisante des réactions allergiques
et d'intolérance en explorant leur mécanisme physiopathologique au niveau cellulaire.
•
Le concept de ces tests est de mimer in-vitro le contact entre l’allergène et les cellules qui
vont générer les symptômes.
•
Sans danger pour le patient, ces tests de provocation in-vitro permettent d'explorer les
réactions allergiques IgE-dépendantes.
•
Il permettent non seulement d'objectiver mais aussi de quantifier la réactivité des leucocytes
par :
–
–
•
dosage quantitatif des sulfidoleucotriènes qu'ils sécrètent en réponse à une stimulation antigénique
(CAST).
Évaluation du pourcentage des basophiles activés via l’expression du marqueur CD63 de la
membrane des basophiles activés (BAT).
Techniques robustes et sur lesquelles on peut compter pour le diagnostic in-vitro des
allergies immédiates et ce, en complément d’autres tests in-vitro déjà existants.
– Intérêt dans la clinique en routine.
–
Mais : Nécessité d’une standardisation (seuil de décision clinique, dilutions des allergènes)
Chaque allergène doit être étudié et testé un par un afin de déterminer la concentration optimale
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
A. Cellular Antigen Stimulation Test
- CAST • Test de provocation in-vitro.
• S’effectue sur du sang frais (cellules vivantes).
• Test ELISA (immunoessai)
•
Il permettent d'objectiver et de quantifier la réactivité des leucocytes par dosage
quantitatif des sulfidoleucotriènes qu'ils sécrètent en réponse à une stimulation
antigénique.
– Les leucotriènes (LT) sont des médiateurs puissants de la réaction allergique et participent à
la genèse des manifestations cliniques de type asthme, rhinoconjonctivite, urticaire, oedème
angiomateux et choc anaphylactique.
•
Grand intérêt dans le cadre des allergies médicamenteuses (AINS, Aspirine…),
ou aux colorants, excipients… et pour les allergies aux venins.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
B. Basophil Activation Test
- BAT •
La cytométrie de flux est un outil intéressant pour
l’analyse des différents types de cellules et permet
d’identifier des populations cellulaires spécifiques, même
dans le cas des populations présentes en petit nombre.
–
•
L’identification des cellules est basée initialement sur
l’expression du CD45 (antigène présent à la surface de
leucocytes) et sur la présence d’IgE à la surface cellulaire.
–
•
Les basophiles expriment le récepteur de haute affinité pour
les IgE (FcεRI).
Dans cette population définie, l’activation des cellules
après avoir été mises en contact avec l’allergène est
déterminée par l’expression du marqueur CD63 de la
membrane.
–
•
La technique semble idéale pour étudier la dégranulation des
basophiles induite par l’allergène.
CD63 est ancré dans la membrane des granules du basophile
(contenant l’histamine) et son expression sur la partie externe
de la cellule reflète la dégranulation cellulaire et la fusion des
granules et la membrane plasmatique.
L’expression du CD63 a été proposé comme un excellent
moyen de monitorer l’activation des basophiles.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Boumiza R , Clinical and Molecular Allergy 2005, 3:9
Basophil Activation Test
- BAT • Diagnostic :
– Allergies alimentaires
– Latex
– Venins
– Médicaments
Curarisants, antibiotiques, AINS
• Sensibilité comparable aux IgEs.
• S’effectue sur du sang frais (cellules vivantes).
• Permet de comparer des extraits allergéniques et des allergènes
recombinants (Immunothérapie spécifique).
• Suivre l’efficacité de l’Immunothérapie spécifique.
– Cette technologie a plus de potentiel que d’embûches et les résultats fournis
par cette technique sont utiles dans plusieurs situations malgré le fait que
chaque laboratoire ait son propre protocole.
–
D. Ebo, Clinical & Experimental Allergy, 39 : 1115–1116
–
María L. Sanz et al,Drug Hypersensitivity. Basel, Karger, 2007, pp 391–402
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
En résumé
•
La route de la découverte des profils de sensibilisation est tracée…
– Les extraits allergéniques sont utiles :
En première intention,
Ne permet pas de conclure dans tous les cas (multiple positivités des tests, manque de précision),
IgEs pour les extraits pas toujours significatifs.
Échecs de désensibilisation
Ne permettent pas d’évaluer la sévérité des réactions allergiques
Contribuent parfois à des régimes d’éviction trop larges…
– Le CRD est entre nos mains.
Sensibilisations peuvent causer des erreurs de diagnostic (et erreurs thérapeutiques également).
Familles de protéines décrites, similarités de structure (homologie de chaînes d’acides-aminés ou
homologie de structure)
Allergie à une seule protéine peut causer des réactions croisées à d’autres protéines de la même
famille.
Allergènes recombinants permettent de se focaliser sur un (ou plusieurs) allergène(s) d’une
source :
–
Disponibilité en CAP (et/ou en ISAC) ou en cours de développement…
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
En résumé
• Les microarrays peuvent nous être profitables, dans des cas difficiles :
– 103 recombinants
détermination…
or
allergènes
naturels
purifiés
en
une
seule
Validation analytique de l’ImmunoCAP© ISAC : ok
L’ImmunoCAP© ISAC a un rôle à jouer dans le diagnostic et le soin aux patients
avec des profils de sensibilisation complexes.
Comme cette technique génère potentiellement des résultats inattendus, la
réalisation et l’interprétation d’un microarray doivent être évalués en parallèle
avec la clinique du patient.
• Interprétation des résultats difficile :
– Destiné aux spécialistes !
– Nous sommes là pour vous aider…
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
En résumé
•
L’ImmunoCAP ISAC est un outil de choix pour évaluer le profil de sensibilisation
d’un patient :
– Polysensibilisé, atopique
– Dont l’anamnèse n’est pas très claire
– Dont les prick tests donnent beaucoup de positivités.
•
L’ImmunoCAP ISAC permet de travailler sur une quantité faible de sérum (20µL)
et de gagner du temps.
•
La technique permet d’éviter les régimes d’éviction trop larges et d’améliorer le
confort de vie du patient allergique/atopique…
•
Intérêt en pneumologie…
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
En résumé
• Les tests de BAT et de CAST ne sont pas à utiliser en
première intention.
• Ils sont complémentaires aux tests cutanés et IgEs.
• Intérêt particulier quand ces tests ne peuvent être réalisés
ou aboutissent à des résultats douteux en comparaison
avec l’anamnèse clinique.
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010
Merci
pour votre attention !!
Cavalier - Gadisseur – 02/03/2010