HPLC 教學簡報 銘傳大學 生物科技學系 學生:陳博文 製 96年2月3日 前言  此乃由使用HPLC同學因需要而製作的 教學簡報,僅供參考使用,不足的部分也 請自行參照使用手冊或書籍,其中一定 有不少遺漏或錯誤,敬請改正指教,此外 要有教師指導後使用,避免因錯誤觀念 而誤導. 第0章 何為HPLC A. HPLC 包含幾個重要部份     HPLC , High Pressure Liquid Chromatography,高壓液相層析儀 , 在分析技術中應用廣泛的一種層析法,而層析又以動相和靜相來作 為物質分離的依據.(圖一) 動相:指帶動分析物移動的solvent ,又稱流動相,在高壓幫浦推動下, 高速流經column ,混合液中不同分子,與填充物親和力有差異,故被 分離. 靜相:固定填充於圓柱體(column)內之物質,依需要而填充不同材質, 且有不同直徑長度,選用正確column在分析前是重要的.(圖二) 偵測器:依分析物不同有各式的偵測器,本實驗室目前有DAD , RI 螢光三種detector.(圖三) 第0章 何為HPLC B.分析移動流程 1.Solvent(流動相) 8.分析報告 6-1.純化收集 6-2廢液回收 2.Degasys(除氣泡) 7.接受資料 3.Pump(加壓) 3-1.Inject (sample注入) 5.Detector 4.Column(分離層析) 第1章 儀器及溶液配置  了解solvent的製備  簡介各儀器的使用及注意事項  不足的部分請自行參照 第1節 Solvent配製 A.注意事項 1.Solvent 的選擇其試藥的等級要為LC級才可 2.取用藥品要注意先向上級報備,核可後才可使用 3.不論配置何種solvent都必須過濾(0.45m),超音波震盪 4.要注意solvent的pH值,是否column可以耐受 5.Solvent每日要除氣泡,若一段時間不用要保存 6.未能詳述的部分請參照 “Solvent配置流程” 第1節 Solvent配製 B.以phosphate buffer為例 1.確認所要濃度(50mM),體積(1000mL),及pH值(2.14) 2.取NaH2PO4

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Transcript HPLC 教學簡報 銘傳大學 生物科技學系 學生:陳博文 製 96年2月3日 前言  此乃由使用HPLC同學因需要而製作的 教學簡報,僅供參考使用,不足的部分也 請自行參照使用手冊或書籍,其中一定 有不少遺漏或錯誤,敬請改正指教,此外 要有教師指導後使用,避免因錯誤觀念 而誤導. 第0章 何為HPLC A. HPLC 包含幾個重要部份     HPLC , High Pressure Liquid Chromatography,高壓液相層析儀 , 在分析技術中應用廣泛的一種層析法,而層析又以動相和靜相來作 為物質分離的依據.(圖一) 動相:指帶動分析物移動的solvent ,又稱流動相,在高壓幫浦推動下, 高速流經column ,混合液中不同分子,與填充物親和力有差異,故被 分離. 靜相:固定填充於圓柱體(column)內之物質,依需要而填充不同材質, 且有不同直徑長度,選用正確column在分析前是重要的.(圖二) 偵測器:依分析物不同有各式的偵測器,本實驗室目前有DAD , RI 螢光三種detector.(圖三) 第0章 何為HPLC B.分析移動流程 1.Solvent(流動相) 8.分析報告 6-1.純化收集 6-2廢液回收 2.Degasys(除氣泡) 7.接受資料 3.Pump(加壓) 3-1.Inject (sample注入) 5.Detector 4.Column(分離層析) 第1章 儀器及溶液配置  了解solvent的製備  簡介各儀器的使用及注意事項  不足的部分請自行參照 第1節 Solvent配製 A.注意事項 1.Solvent 的選擇其試藥的等級要為LC級才可 2.取用藥品要注意先向上級報備,核可後才可使用 3.不論配置何種solvent都必須過濾(0.45m),超音波震盪 4.要注意solvent的pH值,是否column可以耐受 5.Solvent每日要除氣泡,若一段時間不用要保存 6.未能詳述的部分請參照 “Solvent配置流程” 第1節 Solvent配製 B.以phosphate buffer為例 1.確認所要濃度(50mM),體積(1000mL),及pH值(2.14) 2.取NaH2PO4