DNS-alapú immunterápiák Garaczi Edina

2014. október 16.

Definíció: DNS vakcinák

•

Olyan DNS-plazmid tartalmú vakcinák, amelyek „in vivo” alkalmazásuk során a kódolt proteint expresszálják.

DNS vakcinák: humán klinikai vizsgálatokban

•

Infekciók

–

Hepatitis B, C vírus

–

HIV

–

Influenza

–

Malária

–

HPV

–

HSV

•

Tumorok

–

B-sejtes lymphoma

–

Emlő

–

Prostata

–

Melanoma

–

Tüdő

–

Máj, Vese

•

Allergiák

–

Pollen (Japán cédrus)

•

Autoimmun betegségek

–

IDDM

Immunválasz: exogén antigének, proteinek proteinek peptidek baktériumok Humorális immunválasz IgG IFN



CD4 lizoszóma ER, Golgi endoszóma MHC II Th1 Th2 Th3 IL-4 IgE TGF



IgA Antigén prezentáló sejtek

Immunválasz: endogén antigének, DNS vírus tumor nucleus MHC I Antigén prezentáló sejtek CD8 Tc Sejtes Immunválasz: sejtlízis

CD8+ T-sejt mediált sejtlízis Ther Adv Vaccines, 2014. 2(5) 137–148

DNS vakcinák: celluláris és humorális immunválaszt is kiváltanak

Liu és mtsai. Immunological Reviews, 2011.

HCV fertőzés: CHRONVAC-C 

Weiland és mtsai. Mol Ther, 2013

Prostata tumor: PROSTVAC-VF  (PSA-TRICOM, fázis II vizsgálat) Kaplan–Meier curve of overall survival

Gulley és mtsai. Cancer Immunol Res, 2013

Miért van szükség az allergia vakcinák fejlesztésére?

Célkitűzések:

• Biztonság fokozása: mellékhatások csökkentése (darázs-, méh- venom ) • Alkalmazás módja: injekció • Hosszú ideig tartó kezelés: 3-5 év • Sokszor ismételt kezelések: 1-4-8 hetente • Hatékonyság fokozása: ételallergia

Allergén vakcinák felosztása: hatóanyag alapján

• Allergén extractumok: tradícionális tisztított fehérjék (jelenleg elérhető ASIT) • Rekombináns peptidek: molekuláris-módszerekkel előállított peptid vakcinák (klinikai vizsgálatokban) •

DNS vakcinák

: DNS plazmidot tartalmaznak ( klinikai vizsgálatokban)

ASIT: allergén extractumok IgE JACI 2007; 119:881-91

Rekombináns peptid vakcinák

DNS-vakcinák allergiás állatmodellben: (OVA- modell) OVA- plazmid DNS

•

Th1 immunválasz:

–

IFN

 •

IgG2a



OVA protein + Alumínium hidroxid

•

Th2 immunválasz

 –

IL4

 –

IL5

 •

IgE és IgG1



Raz és mtsai, PNAS, 1996

Bakteriális DNS plazmid (pC-OVA)

DNS plazmid előállítása, sokszorosítása

ova

CMV + pc-OVA plazmid kompetens E. coli Előállítás:

•

gyors

•

olcsó DNS:

•

stabil, nem szennyezett

•

baktérium növesztése

•

plazmid izolálása

Állatkísérletes modell

8-10-hetes BALB/c egér

BALB/c

• Allergén: Ovalbumin protein • Szenzitizálás: ip. OVA-Alum inj.

• Provokáció: in. OVA oldat • Nazális tünetek meghatározása: 10 percig számolva » tüsszögés » orrvakaró mozgások összege

Preventív kezelési protokoll Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

Nazális tünetek Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

OVA-specific IgE Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

Citokinek vizsgálata (Th1, Th2) Garaczi és mtsai. Nanomedicine, 2013

Terápiás kezelési protokoll

Allergia vakcinák jellemzői DNS vakcinák (állatmodellek)

• • Előállítás: gyors, olcsó DNS plazmid: stabil, teljes allergén szekvencia • •

Biztonságos

Immunogén: sejtes és humorális immunválasz • Néhány kezelés, tartós eredmény

Allergén extraktumok (ASIT)

• • drága, hosszadalmas instabil, szennyezett fehérje • • anaphylaxia veszély!!

Antitest válasz: IgE, IgG4 • 3-5 év alkalmazás, sokszor ismételt kezelések

CryJ2-DNA-LAMP plazmid (fázis 1 klinikai vizsgálat)

• • • • Japán cédrus allergénjét (Cry J2) kódoló DNS vakcina Klinikai vizsgálat: 2012 okt- 2013 jún. Honolulu 18-63 év közötti allergiás nő és férfibeteg, valamint nem – allergiás önkéntes im. injekció: 2 hetente ismételve (összesen 4 injekció)

Kezelési csoportok 1.

2.

3.

Bevonási kritérium Dózis nem-allergiás allergiás betegek allergiás betegek 4mg/ inj.

2mg/ inj.

4mg/ inj.

Immunomic Therapeutics Inc. NCT01966224

Eredmények: CryJ2-DNA-LAMP Immunomic Therapeutics Inc. NCT01966224

További fejlesztési lehetőségek

• Immunstimuláló szekvenciák alkalmazása (DNS szekvenciák: CpG motívumok) • Adjuvánsok alkalmazása: természetes immunitás fokozása • Új beviteli módok: a betegek számára kényelmesebb, elfogadhatóbb (topicalis, epicutan) • mRNS vakcinák fejlesztése