Transcript Bacheloroppgave

DET HELSEVITENSKAPELIGE FAKULTET, INSTITUTT FOR MEDISINSK BIOLOGI,
BIOINGENIØRUTDANNINGEN
Verifisering og
holdbarhetsforsøk av BD
Vacutainer Rapid Serum Tube
Bacheloroppgave, BIOIN-112
Våren 2012
Kandidatnummer : 1 og 3
01.06.2012
Forord
Dette er vår avsluttende bacheloroppgave ved bioingeniørutdanningen ved Universitetet i Tromsø,
våren 2012. Den praktiske delen av oppgaven ble utført over tre uker våren 2012, på fagområdet
hormon på Laboratoriemedisin ved Universitetssykehuset Nord-Norge, avdeling Tromsø.
I den første praktiske delen utførte vi et sammenligningsforsøk. Vår oppgave gikk da ut på å
undersøke om serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube gir likt svar som serum fra Vacuette®
serum med gel prøverør. Laboratoriemedisin ønsker å bruke BD Vacutainer Rapid Serum Tube som
et supplement til Vacuette® serum med gel prøverør i analyseringen av pasientprøver.
I tillegg til sammenligningsforsøket har vi utført et holdbarhetsforsøk av analytter i serum fra BD
Vacutainer Rapid Serum. Holdbarhetsforsøket gikk over en uke.
Analyttene vi har undersøkt i de to forsøkene er vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH.
Oppgaven er hovedsakelig rettet mot bioingeniører, spesielt de som interesserer seg for fagområdet
hormon og klinisk biokjemi. Vi tror også at personer som jobber med kvalitetssikring av
laboratoriearbeid kan ha glede av oppgaven.
Vi ønsker å rette en stor takk til våre praktiske veiledere Astrid Elverland og Carina Strøm ved
Laboratoriemedisin for et flott samarbeid. Veilederne har vært til stor hjelp ved tilrettelegging og
planlegging av det praktiske arbeidet. De har også vært tilgjengelig for spørsmål, og det har vært
veldig nyttig å diskutere våre resultater med dem. Vi ønsker også å takke vår skriveveiler Kirsten
Raanaas Huseby ved Universitetet i Tromsø for god veiledning under skrivingen av oppgaven.
Tromsø 1. juni 2012
Sammendrag
Bakgrunnen for vår oppgave er at fagområdet klinisk biokjemi skal bytte instrument i analyseringen
av pasientprøver. Med denne endringen ønsker fagområdet å bytte ut plasma fra Vacuette® litium
heparinrør med serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube og fra Vacuette® serum med gel
prøverør.
BD Vacutainer Rapid Serum Tube er et forholdsvis nytt serumrør på markedet. Fordelen med dette
prøverøret er at blodet er ferdig koagulert etter fem minutter. For at Laboratoriemedisin skal kunne
ta i bruk dette prøverøret på det nye instrumentet må prøverøret verifiseres. Vår oppgave var å
undersøke om vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH ga like nok resultater i BD Vacutainer
Rapid Serum Tube og Vacuette® serum med gel prøverør, slik at disse analyttene også kan
analyseres i serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube på det nye instrumentet. Vi undersøkte
også holdbarheten til disse analyttene på BD Vacutainer Rapid Serum Tube.
For sammenligningsforsøket samlet vi inn blodprøver fra 32 testpersoner. Vi tok et BD Vacutainer
Rapid Serum Tube og et Vacuette® serum med gel prøverør fra hver person, og analyserte disse på
Modular E170 på fagområdet hormon samme dag som de ble tatt.
For holdbarhetsforsøket tok vi fem blodprøver på BD Vacutainer Rapid Serum Tube av en frivillig.
Disse fem parallellene ble analysert hver dag over en tidsperiode på syv dager sammen med fem
paralleller av en donorkontroll. Prøvene til holdbarhetsforsøket sto oppbevart i kjøleskap på 2-8 ºC
under hele forsøksperioden.
Vi kom frem til at BD Vacutainer Rapid Serum Tube og Vacuette® serum med gel prøverør ga like
nok analysesvar til at BD Vacutainer Rapid Serum Tube kan brukes som et supplement for nevnte
analytter på det nye instrumentet.
For holdbarhetsforsøket konkluderte vi med at vitamin B12, ferritin, folat og TSH har en holdbarhet
på syv dager i serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube. Holdbarheten til fritt T4 var dårligere,
derfor satt vi holdbarheten for denne analytten til fem dager ut fra våre resultater.
Innhold
1 Innledning
2 Teori
2.1 Modular E170
2.2 Immunoassay
2.2.1 Fast fase immunoassay
2.2.2 Sandwich prinsipp
2.2.3 Kompetitivt prinsipp
2.3 Analyttene
2.3.1 Vitamin B12
2.3.2 Ferritin
2.3.3 Folat
2.3.4 Fritt T4
2.3.5 TSH
2.4 Prøverørene
2.4.1 BD Vacutainer Rapid Serum Tube
2.4.2 Vacuette® serum med gel
2.4.3 Vacuette® litium heparinrør
2.5 Forhold som påvirker analysesvaret
2.5.1 Preanalytiske forhold
2.5.2 Analytiske forhold
2.5.3 Postanalytiske forhold
2.5.4 Biologisk variasjon
3 Materiale og metode
3.1 Prøveinnsamling og analysering
3.1.1 Del 1: Sammenligningsforsøket
3.1.2 Del 2: Holdbarhetsforsøket
3.1.3 Grenseverdier
3.2 Reagenser og kontroller
4. Resultater
4.1 Del 1 Sammenligningsforsøk
4.2 Del 2: Holdbarhetsforsøk
5 Diskusjon
6 Konklusjon
Litteraturliste
1
2
2
3
3
4
5
6
6
7
8
8
9
9
9
10
10
11
11
12
13
13
13
14
14
15
16
18
19
19
24
28
32
Vedlegg 1: Resultater vitamin B12
Vedlegg 2: Resultater ferritin
Vedlegg 3: Resultater folat
Vedlegg 4: Resultater fritt T4
Vedlegg 5: Resultater TSH
1 Innledning
Ved Fagområdet hormon på Laboratoriemedisin ved Universitetssykehuset Nord-Norge (UNN)
Tromsø benyttes serum fra Vacuette® serum med gel som prøvemateriale til de fleste analysene.
Prøvene blir analysert på Modular E170. Fagområdet ønsker å undersøke om serum fra BD
Vacutainer Rapid Serum Tube kan brukes som et supplement til Vacuette® serum med gel.
Grunnen til at avdelingen ønsker å undersøke dette er fordi fagområdet klinisk biokjemi skal bytte
ut Vacuette® litium heparin plasma med serum fra Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer
Rapid Serum Tube som prøvemateriale. Serum fra Vacuette® serum med gel brukes i dag på
tilsendte prøver til fagområdet klinisk biokjemi. Grunnen til at Vacuette® litium heparin plasma
skal byttes ut er fordi dette fagområdet skal få et nytt instrument, og med denne endringen ønsker de
prøvemateriale med bedre kvalitet enn litium heparin plasma. Alle analytter har dårligere
holdbarhet i litium heparin plasma i forhold til serum.
Serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube skal ikke tas på alle pasienter. Dette prøvematerialet
vil eventuelt bare brukes ved behov for øyeblikkelig hjelp, ved etter-rekvirering og fra inneliggende
pasienter på intensivavdeling. Det er en fordel hvis også de mest vanlige analysene på fagområdet
hormon kan analyseres i samme prøvemateriale på det nye instrumentet. På bakgrunn av dette har
Laboratoriemedisin ønsket at vi utfører et sammenligningsforsøk av Vacuette® serum med gel og
BD Vacutainer Rapid Serum Tube. Analyttene vi har undersøkt er vitamin B12, ferritin, folat, fritt
tyroksin (fritt T4) og tyroideastimulerende hormon (TSH).
Avdelingen ønsket også at vi utførte et holdbarhetsforsøk av BD Vacutainer Rapid Serum Tube på
nevnte analytter. Avdelingen har satt holdbarheten til vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH i
serum fra Vacuette® serum med gel til syv dager ved oppbevaring i kjøleskap på 2-8 ºC. Vi har
undersøkt om samme holdbarhet gjelder for analyttene i serum fra av BD Vacutainer Rapid Serum
Tube.
Problemstilling: Gir serum fra av BD Vacutainer Rapid Serum Tube like nok analysesvar som
serum fra Vacuette® Serum med gel for analysene vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH til at
det kan brukes som et supplement til dette prøverøret? Hvordan er holdbarheten til disse analyttene
1
i serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube når prøvene står oppbevart i kjøleskap med en
temperatur på 2-8 ºC i et tidsrom på syv dager?
2 Teori
2.1 Modular E170
Analyseringen av vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH gjøres på Modular® Analytics E170
ved Fagområdet Hormon ved Laboratoriemedisin ved UNN, Tromsø. Instrumentet leveres av
Roche Diagnostics AS.
Når prøvene skal analyseres på Modular E170 settes prøvene i en rack som har plass til fem prøver.
Instrumentet har god kapasitet og kan analysere opp til 170 prøver i timen. 1) Det er viktig at
strekkoden til prøvene blir plassert synlig, da en barkodeleser leser av disse inne i instrumentet.
Hver rack har i tillegg en egen hullkode og nummererte plasser slik at man kan holde oversikt over
prøvene mens de er inne i instrumentet.
Prøvenes gjennomgang i instrumentet blir illustrert på figur 1.
Figur 1: Skisse over Modular E170 som viser prøvenes gjennomgang i instrumentet. 2)
2
Modular E170 på hormonlaboratoriet består av to E moduler. Hver E modul inneholder flere
komponenter, blant annet to måleceller hver. Prøvene blir plassert i et rack og satt inn på
venstresiden av instrumentet. Inne i instrumentet blir racknummer og prøve-ID lest av. Prøvene blir
så ført til en av E modulene for analysering. Her bruker instrumentet engangspipetter og
engangskopper til å ta opp prøve og reagens for så å blande dette sammen.
En zipperprobe vil suge opp reaksjonsblandingen fra engangskoppen og tilsette den i målecellen
som teller opp fotoner som blir sendt ut fra signalmolekyler. Zipperproben bruker ikke
engangsutstyr for hver prøve, så denne må vaskes godt mellom hver prøve for å hindre at reagens
eller prøvemateriale blir overført til neste prøve. Når prøvene er ferdig analysert kommer de ut på
den andre enden av instrumentet. Prøvene blir så korket manuelt og oppbevart i kjøleskap i en uke.
Når analysesvarene er ferdig blir de sendt til en datamaskin. Analyseprinsippet til Modular E170
baserer seg på immunoassay. 2)
2.2 Immunoassay
Metoden som benyttes til måling av analyttene på Modular E170 er elektrokjemiluminescens
immunoassay. Immunoassay baserer seg på konsentrasjonsmåling av et stoff ved hjelp av antistoffantigen reaksjoner. En antistoff-antigen reaksjon er selektiv, et bestemt antistoff vil bare bindes til
sitt spesifikke antigen. I dag finnes det ulike metoder for å produsere store mengder identiske
antistoffer, slik at de kan brukes i immunoassay. 3)
2.2.1 Fast fase immunoassay
Fast fase, illustrert i figur 2, består av paramagnetiske mikropartikler som er dekket med
streptavidin. Streptavidin kan binde biotinmerkede antistoffer og antigener.
3
Figur 2: Fast fase immunoassay. Biotinmerket antigen eller antistoff bindes til
streptavidinmerkede paramagnetiske mikropartikler. 2)
Etter inkubering vil prøvekomponenter som ikke er bundet til de paramagnetiske mikropartiklene
bli vasket vekk. Da vil også alle substanser som kan gi interferens fjernes. Antall immunkomplekser
som er dannet er en indikasjon på konsentrasjon av analytten i blodprøven. I alle immunoassay
benyttes en detekterbar komponent på antistoff eller antigen for å kunne måle antall
immunkomplekser. Dette kan være radioaktive komponenter, enzymer, fargestoffer eller
fluorescens. Signalmolekylet som benyttes på Modular E170 er en ruthenium ester. Det benyttes to
måleprinsipp, sandwich og kompetitivt.
2.2.2 Sandwich prinsipp
Sandwich prinsippet benyttes til måling av analytter med høy molekylvekt. Prøven inkuberes med
biotinmerket antistoff og rutheniummerket antistoff. Hvis den aktuelle analytten er til stede vil disse
antistoffene bindes til hver deres spesifikke epitop på analytten. Etter inkubering tilsettes
paramagnetiske mikropartikler som er dekket med streptavidin. Det biotinmerkede antistoffet vil
bindes til mikropartiklene sammen med analytt og rutheniummerket antistoff, hvis analytten er til
stede i prøven. Ubundne komponenter vaskes vekk, og immunkomplekset kan kvantiteres på
grunnlag av signalmolekylet. Signalintensiteten er proporsjonal med konsentrasjonen til analytten i
prøven. Ved normale konsentrasjoner vil det være overskudd av antistoffer. Hvis konsentrasjonen
til analytten er svært høy vil det ikke lenger være overskudd av antistoff, og øvre grense for
linearitet er nådd.
4
Figur 3: Sandwich prinsipp. Biotinmerket antistoff og rutheniummerket antistoff bindes til hver
sin epitop på analytten. Dette immunkomplekset vil så bindes til paramagnetiske mikropartikler.
2)
2.2.3 Kompetitivt prinsipp
Kompetitivt prinsipp benyttes når analytter med lav molekylvekt skal måles. Disser analyttene har
bare mulighet til å binde et antistoff på grunn av størrelsen. Ruthenium-merket antistoff og analytter
fra prøven konkurrerer om å bindes til de immobiliserte antistoffene. Prøve med analytter inkuberes
først med de rutheniummerkede antistoffene. Det tilsettes et lite prøvevolum, slik at det er et
overskudd av antistoffer. Deretter tilsettes ruthenium-merket antistoff til syntetisk fremstilt analytt
som er biotinmerket og paramagnetiske mikropartikler med streptavidin. Den syntetiske analytten
vil bindes til ledige rutheniummerkede antistoffer. Ubundne komponenter fjernes, og
immunkompleksene kvantiteres etter signalmolekylet. Konsentrasjonen av analytter i prøven er
omvendt proporsjonal til signalet. Når det er lav konsentrasjon av analytter i prøven resulterer det i
at signalmolekylet bindes til de syntetiske analyttene. Når det er høy konsentrasjon av analytter i
prøven vil de ta opp plassen på de rutheniummerkede antistoffene, og målesignalet blir lavt eller
null.
5
Figur 4: Kompetitivt prinsipp. Analytter festes til rutheniummerket antistoff. Rutheniummerkede
antistoffer som ikke har analytt festet til seg vil bindes til syntetisk laget analytt som er
biotinmerket. Biotinmerkede analytter vil bindes til paramagnetiske mikropartikler. 2)
Sandwich prinsippet benyttes for måling av ferritin og TSH. Kompetitivt prinsipp benyttes i måling
av vitamin B12, folat og fritt T4. 2)
2.3 Analyttene
2.3.1 Vitamin B12
Vitamin B12 blir også kalt for kobalamin. Vitamin B12 er et vitamin som består av en gruppe
forbindelser som inneholder kobolt. Man får kun i seg dette vitaminet gjennom kosten. Et kosthold
med kobolt er essensiell for alle høyere organismer for at kroppen kan utføre viktige funksjoner.
Vitamin B12 spiller en nøkkelrolle i dannelse av blodceller, og for at hjerne og nervesystem skal
fungere optimalt.
6
Indikasjoner:

Utredning av anemi.

Psykiske eller nevrologiske plager eller sykdommer som kan skyldes kobalaminmangel.
Vitamin B12 og folat analyseres ofte sammen for utredning og diagnostikk av anemi. 4)
På UNN er referanseområdet for kvinner og menn 150-580 pmol/L
Variasjonskoeffisient (VKa) for Vitamin B12: 4,9 %
VKa er et mål på den analytiske variasjon for en gitt analyse. Denne er beregnet av fagområdet som
utfører analysen. VKa blir beregnet på grunnlag av kontrollmateriale som blir analysert i en lengre
tidsperiode.
5)
2.3.2 Ferritin
Ferritin er et makromolekyl som det finnes mest av i leveren. Proteinet kan romme inntil 2500 Fe2+
ioner. Hovedoppgaven til Ferritin er å ta opp og lagre jernatomer som ikke blir utnyttet i cellenes
metabolisme. Intracellulært ferritin utgjør kroppens jernlagre. Det finnes to former for ferritin,
glykosylert og ikke-glykosylert ferritin. Glykosylert ferritin har lengst halveringstid på 50 timer.
Dette er den normale formen for ferritin i blodbanen. Ikke-glykosylert ferritin har en halveringstid
på bare 10 minutter. Denne formen for ferritin lekker ut i blodbanen ved celleskade på leveren, for
eksempel cirrhose eller hepatitt.
Indikasjoner:

Bestemme størrelsen på jernlager for kontroll og diagnostikk av pasienter med
jernoverskudd (hemokromatose) eller jernunderskudd (jernmangelanemi).
Feilkilde: Siden ferritin er et akuttfaseprotein kan verdier over referanseområdet ofte sees hos
kronisk syke pasienter og hos pasienter ved enkelte kreftformer, uten at jernoverskudd er tilfelle. 4)
På UNN er referanseområdet for kvinner 10-167 μg/L, og menn 29-383 μg/L. VKa: 4,0 %.
5)
7
2.3.3 Folat
Folat er et B-vitamin (vitamin B9). Folat er involvert i overføring av en-karbon forbindelser,
aminosyrestoffskiftet og syntese av puriner som er byggesteiner i DNA. Folat blir tatt opp i
duodenum, tolvfingertarmen, og normalt vil et balansert kosthold dekke kroppens behov.
Indikasjoner:

Mistanke om folatmangel.

Utredning av anemisykdommer.
Feilkilde: Hemolyse kan gi falskt forhøyede verdier. 4)
På UNN er referanseområde kvinner og menn >7 nmol/L
VKa: 6,6 %. Nivåavhenging.
5)
2.3.4 Fritt T4
Hormonet T4 produseres i glandula tyreoidea/ skjoldbruskkjertelen. Hovedfunksjonen til T4 er
regulering av stoffskiftet sammen med trijodtyronin (T3). Det meste, mer enn 99,9 %, av T4 er
bundet til proteiner i kroppen, og dette er ikke biologisk aktivt. Det er kun fritt T4 som er biologisk
aktivt. Konsentrasjonen til total T4 vil variere med mengden tyroksinbindende proteiner i serum,
mens dette vil gi lite endring av fritt T4 konsentrasjonen.
Indikasjoner:

Diagnostikk av hypo- og hypertyreose sammen med måling av TSH.

Kontroll ved behandling av sykdom i glandula tyreoidea.
Fritt T4 skal alltid tolkes sammen med TSH, siden TSH stimulerer syntese og utskillelsen av T4.
Feilkilde: I enkelte tilfeller kan analysen påvirkes av antistoffer, unormale bindeproteiner eller
farmaka. Dette kan gi falskt for høye eller for lave resultater. 4)
På UNN er referanseområde for kvinner og menn 9-22 pmol/L.
VKa: 5,6 %. 5)
8
2.3.5 TSH
TSH dannes i hypofysens forlapp. TSH stimulerer syntese og sekresjon av tyroideahormonene T4
og T3. Måling av TSH i blod er den mest nyttige analysen for å undersøke tyreoidea funksjon. 6)
Indikasjoner:

Mistanke om hypertyreose

Mistanke om hypotyreose

Kontroll av behandling av tyroideahormoner eller tyreostatika.
Feilkilder: Utskillelse av TSH kan hemmes eller stimuleres av enkelte medikamenter.
Glukokortikoider, 1-dopa og dopamin kan gi lave serum-TSH verdier. Litium og
dopaminantagonister kan gi høye serum-TSH verdier. Heterofile antistoffer i pasientens blod kan gi
falskt høye eller lave verdier. 4)
På UNN er referanseområde for kvinner og menn 0,2-4,3 mIE/L.
VKa: 3,5 %.
2.4 Prøverørene
2.4.1 BD Vacutainer Rapid Serum Tube
BD Vacutainer Rapid Serum Tube er et blodprøverør i plast som tar fem milliliter blod. Dette
prøverøret er relativt nytt på markedet. Serum fra dette røret blir også kalt for hurtigkoagulerende
serum. Røret inneholder et på forhånd målt vakuum som automatisk trekker oppgitt volum inn i
prøverøret. BD Vacutainer Rapid Serum Tube inneholder en gel. Gelen har en spesifikk vekt som
ligger mellom den spesifikke vekten til blodceller og serum. Under sentrifugering vil gelen separere
blodcellene fra serumet. Innsiden av prøveglasset er dekket med trombin. 7) Trombin er den
aktiverte formen til koagulasjonsfaktoren protrombin. Det er en protease, og det siste enzymet i
koagulasjonskaskaden der den spalter fibrinogen til fibrin. Fibrin koagulerer blod. Trombin
fremmer i tillegg koagulasjon ved å aktivere koagulasjonsfaktor V, VIII, XI og XIII. 8) På grunn av
den hurtige koaguleringen kan BD Vacutainer Rapid Serum Tube sentrifugeres bare 5 minutter etter
9
prøvetaking. Ved Laboratoriemedisin sentrifugeres BD Vacutainer Rapid Serum Tube i 10 minutter
på 2200 g.
2.4.2 Vacuette® serum med gel
Vacuette® serum med gel blir til dags dato brukt til hormonanalyser og en rekke andre analyser ved
Laboratoriemedisin på UNN. Fordelen med disse prøverørene er at det gir et stabilt prøvemateriale
som er holdbart i flere dager, og flere komponenter er bedre holdbart i serum enn i plasma. Serum
fra Vacuette® serum med gel blir derfor brukt som prøvemateriale på tilsendte prøver fra
primærhelsetjenesten og andre sykehus. Ulempen med Vacuette® serum med gel er at prøverørene
må stå i en halvtime før de er klar til sentrifugering, og det tar derfor lengre tid fra prøven er tatt til
rekvirenten får analysesvaret.
Innsiden på Vacuette® serum med gel er dekket med tørre mikroskopiske silica partikler, som er
glasspartikler. Silica partiklene har en negativ overflate. Når blodplatene kommer i kontakt med
disse vil det sette i gang koagulasjonsprosessen. 6) Prøven er ferdig koagulert etter en halvtime, og
er da klar for sentrifugering. I bunnen av glasset er det en gel. Gelen har en viskositet og tetthet som
gjør at den vil flytte seg oppover i glasset under sentrifugering. Denne egenskapen til gelen gjør at
den vil danne en impermeabel barriere mellom serum og fibrin og blodceller, der serum vil være på
toppen av barrieren. Dette er hensiktsmessig for å skille serum og andre blodlegemer.
9, 10)
Ved
Laboratoriemedisin sentrifugeres Vacuette® serum med gel i 10 minutter ved 2200 g.
2.4.3 Vacuette® litium heparinrør
Vacuette® litium heparinrør er et av de mest brukte prøvematerialene ved fagområdet klinisk
biokjemi ved Laboratoriemedisin på UNN. I motsetning til Vacuette® Serum med gel gir
Vacuette® litium heparinrør plasma som prøvemateriale, og dette prøvematerialet kan sentrifugeres
med en gang prøven er tatt. Dette er fordelaktig i situasjoner der rekvirenten ønsker raskt svar, for
eksempel i situasjoner der det er nødvendig med øyeblikkelig hjelp. Vacuette® litium heparinrør
blir også brukt som prøverør ved inneliggende pasienter på UNN. Ulempen med dette prøverøret er
at det ofte gir fibrinutfellinger i plasma. Fibrintråder legger seg i toppen av plasma og må fjernes før
analysering. Plasma fra Vacuette® litium heparinrør er ikke er holdbart like lenge som serum.
10
Hele innsiden av Vacuette® litium heparinrør er sprayet med litium heparin. Litium heparin
fremskynder virkningen av antitrombin III. Antitrombin III hindrer dannelse av fibrin fra
fibrinogen, ved at trombin blir nøytralisert. På denne måten vil litium heparin fungere som en
antikoagulant, og hindrer at blodet i prøven koagulerer. 11) I likhet med Vacuette® serum med gel
inneholder Vacuette® litium heparinrør også en gel i bunnen av glasset. På samme måte vil gelen
under sentrifugering vandre opp i glasset og skille plasma fra blodcellene. Vacuette® litium
heparinrør sentrifugeres ved Laboratoriemedisin i 15 minutter ved 2200 g.
Ved Laboratoriemedisin på UNN er det mest vanlig å bruke Vacuette® litium heparinrør og
Vacuette® serum med gel, som kan romme opp til fire milliliter blod, til hormon og biokjemiske
analyser. Forskjellen på plasma og serum er at serum ikke inneholder koagulasjonsfaktorer og
fibrinogen, siden disse blir aktivert under koagulasjonsprosessen før sentrifugering. 12)
2.5 Forhold som påvirker analysesvaret
Det er mange ulike forhold som kan påvirke analysesvaret. Det er viktig å ha oversikt over disse
forholdene slik at man kan vite hvilke feilkilder som kan oppstå. Feilkilder har innvirkning på
analysesvaret og gjør at usikkerheten blir større. Forhold som påvirker prøvesvaret kan deles inn i
tre grupper; Preanalytiske forhold, analytiske forhold og postanalytiske forhold. Feilkilder i disse
gruppene som er relevante for vår studie vil bli beskrevet under.
2.5.1 Preanalytiske forhold
Preanalytiske forhold er alle forhold som kan oppstå fra prøven er rekvirert til prøven blir analysert.
Den største andelen av feilkilder som kan oppstå rundt en analysering skyldes preanalytiske forhold.
Feilkildene kan skyldes rekvirent, pasient eller prøvebehandler.
En preanalytisk feilkilde er å velge feil prøverør, som gir feil prøvemateriale til analyttene som skal
analyseres. Brukes feil prøvemateriale kan prøvesvaret bli feil i forhold til referanseområdet, som er
satt for analytten for et spesifikt prøvemateriale. Det samme kan skje dersom prøven er ufullstendig
sentrifugert, eller har blitt sentrifugert i en annen hastighet enn anbefalt. Blir prøven sentrifugert for
tidlig kan dette føre til hemolyse og fibrin i prøvematerialet. Dersom prøvene står i over 2 timer på
11
benk før de blir sentrifugert, kan ulike komponenter lekke ut av blodcellene, og det er også en fare
for at blodcellene blir lysert. Det er også viktig å huske på rekkefølgen av prøverør når man tar
prøve fra pasienten. Det er hensiktsmessig å ta prøverørene i en bestemt rekkefølge for å hindre at
det blir overført tilsetningsstoffer fra et prøverør til et annet. Under prøvetakningen brukes det en
stase. Det er viktig at stasen ikke er på for lenge fordi dette kan føre til aktivering av
koagulasjonssystemet. I tillegg kan intracellulære analytter presses ut av erytrocyttene og gi
forhøyede verdier i serum. Denne feilkilden er aktuell for analyser der det er høy konsentrasjon av
analytten intracellulært. Etter prøvetakning må prøverørene vendes opp/ned fem-ti ganger slik at
blodet blandes med tilsetningsstoffet i prøverøret. For prøver som ikke skal analyseres med en gang
etter sentrifugering er det viktig med riktig lagring og temperatur av prøvematerialet. 12)
2.5.2 Analytiske forhold
Analytiske forhold er forhold som kan påvirke prøvesvaret når prøven er inne i instrumentet. For å
forbedre kvaliteten på den analytiske fasen er det nødvendig å utføre kalibreringer av instrumentet,
og analysere kvaliteskontroller slik at disse ligger innenfor godkjente grenser før man analyserer
pasientprøver. Kvalitetskontroller og reagenser må oppbevares og behandles riktig. Siden
bioingeniører har som oppgave å vedlikeholde instrumentet er det viktig at det gis god opplæring,
og at det finnes gode prosedyrer på dette.
Man kan aldri være 100 % sikker på at et analysesvar er riktig, dette er fordi analyseprosessen vil
variere litt over tid. Den analytiske usikkerheten kan beregnes for hver analyse. Vi skiller mellom to
typer analytiske feil; Tilfeldige og systematiske feil. I en analysering kan det alltid oppstå tilfeldige
feil. Denne feilkilden kan ikke elimineres, men kan holdes minimal ved gode prosedyrer og
vedlikehold av instrumentet. Tilfeldige feil vil gi verdier som ligger i nærheten av den sanne verdi.
Det er større sannsynlighet for at systematiske feil vil gi verdier som ligger lengre unna sann verdi. I
forhold til tilfeldige feil der verdiene kan ligge på begge sider rundt en sann verdi, vil systematiske
feil enten ligge for høyt eller for lavt. På grunn av dette kan systematiske feil være lettere å påvise
med bruk av kvalitetskontroller. Systematiske feil kan skyldes flere ulike faktorer. Disse er
menneskelige feil, instrumentelle feil, feil i selve analysen, eller en kombinasjon av disse.
Analytiske feilkilder kan skyldes feil på selve instrumentet. For eksempel: Zipperproben fungerer
ikke, det suges opp feil volum av prøven eller slitasjeskader på utstyr som benyttes. For å oppdage
12
feil med instrumentet finnes det ofte et varslingssystem som gir en alarm dersom noe har gått galt
under analyseringen.
Det kan også oppstå feil i selve analysen. For eksempel: Forurensning av reagens og
prøvematerialet, gamle reagenser som kan gi ufullstendig reaksjon, eller stoffer i prøven som kan
interferere med analyttene eller reagenset. 13)
2.5.3 Postanalytiske forhold
Ved postanalytiske forhold menes hva som skjer med prøven etter den er analysert til prøvesvaret
kommer i journalen til pasienten. Dette betyr blant annet at et prøvesvar ikke burde frigis til
rekvirenten dersom det har kommet varslinger under analyseringen som kan ha innvirkning på
prøvesvaret. Tolkning og vurdering av analysesvar går også under postanalytiske forhold. 12) Bruk
av data og elektroniske rekvisisjoner vil minske sannsynligheten for at postanalytiske feil kan
oppstå. Å skrive ned analyseresultatene for hånd eller om prøvesvaret gis muntlig til rekvirent, vil
øke sannsynligheten for postanalytiske feil.
2.5.4 Biologisk variasjon
Biologisk variasjon kan deles inn i intra-individuell variasjon (CVw) og interindividuell variasjon
(CVb). Disse to variasjonene kan brukes til å regne ut total biologisk variasjon.
Intra-individuell variasjon er variasjoner av analytter som kan oppstå i et individ over tid.
Interindividuell variasjon er variasjon av analytter mellom individer. Grunnen til at ulike analytter
kan variere mellom like individer er fordi hvert individ har forskjellige konsentrasjoner av
metabolitter i kroppen. Intra-individuell variasjon kan skyldes faktorer som kosthold/faste,
døgnvariasjon, aktivitet før prøvetakning. 13)
3 Materiale og metode
Vi prøvde å undersøke om det var gjort sammenligningsforsøk på BD Vacutainer Rapid Serum
Tube i forhold til Vacuette® serum med gel. Vi undersøkte også om det var gjort holdbarhetsforsøk
13
på BD Vacutainer Rapid Serum Tube på de analysene vi har undersøkt. Vi klarte ikke å finne
relevant informasjon om dette. Det er ikke sikkert produsenten har undersøkt dette for de aktuelle
analysene.
3.1 Prøveinnsamling og analysering
Siden vår studie er anonym har pasientene fått egne nummer som følger prøveglasset. Disse
numrene kan ikke kobles til datasystemet. Vi har ingen måte å kunne spore opp pasienten igjen etter
analysering. Derimot var det viktig at noen prøver ble tatt av riktig pasient for de prøvene vi ønsket
å analysere som lå utenfor normalområdet. Disse prøvene ble tatt på grunnlag av tidligere
prøveresultater som vi ønsket å undersøke. For å sikre oss om at vi hadde riktig pasient måtte
pasienten identifiseres ved fødsels og personnummer.
3.1.1 Del 1: Sammenligningsforsøket
Blodprøvene til sammenligningsforsøket av BD Vacutainer Rapid Serum Tube og Vacuette® serum
med gel ble tatt i poliklinisk prøvetakingsenhet og fra inneliggende pasienter, i forbindelse med
ordinær prøvetakning. For hver pasient tok vi et BD Vacutainer Rapid Serum Tube og et Vacuette®
serum med gel, etter muntlig samtykke fra pasienten. Under vår prøvetakning fylte vi Vacuette®
serum med gel før BD Vacutainer Rapid Serum Tube. En slik rekkefølge er hensiktsmessig for å
hindre at det ble overført trombin fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube til Vacuette® serum med
gel. Vi noterte oss tidspunkt for prøvetakning for alle prøvene. Dette er fordi vi ville hindre at
prøveglassene sto for lenge på benk før de ble sentrifugert. BD Vacutainer Rapid Serum Tube må
stå loddrett mens det koagulerer. Våre prøver ble sentrifugert fra 30 til 90 minutter etter
prøvetaking. Dette er fordi blodet i Vacuette® serum med gel trenger 30 minutter før det er
fullstendig koagulert. Vi sentrifugerte begge prøveglassene fra hver pasient samtidig fordi vi ønsket
at de skulle bli behandlet likt.
For prøvene vi tok i poliklinikken var de fleste analyseresultatene innenfor referanseområdet. Vi
ønsket også prøver utenfor referanseområdet, og søkte opp inneliggende pasienter i DIPS for å finne
disse. DIPS er det pasientadministrative systemet som brukes på UNN. Det var en utfordring for oss
å finne inneliggende pasienter som hadde verdier utenfor referanseområdet. Vi klarte å finne verdier
14
som lå utenfor referanseområdet for alle analysene, men vi kunne gjerne hatt flere for å få en mer
sikker vurdering av vår problemstilling. Vi samlet inn prøver fra 32 personer. Vi valgte å analysere
to paralleller av hver prøve. Prøvene ble analysert på Roche Modular E170. Alle prøvene ble
analysert samme dag som de ble tatt. Vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH ble analysert i
hvert glass.
Prøveglassene vi benyttet til sammenligningsforsøket var BD Vacutainer Rapid Serum Tube med
lot nummer:111103 og Vacuette® serum med gel med lot nummer: A111204H
3.1.2 Del 2: Holdbarhetsforsøket
Som nevnt i innledningen har fagområdet hormon på Laboratoriemedisin satt holdbarheten til
vitamin B12, ferritin, folat, fritt T4 og TSH til en uke ved oppbevaring i kjøleskap med en
temperatur på 2-8 °C. Dette har fagområdet funnet ut fordi de selv har undersøkt holdbarheten til
disse analyttene der Roche har oppgitt at holdbarheten er kortere enn syv døgn. Frem til 2008
benyttet fagområdet serum fra Vacutainer Serumrør som prøvemateriale. Vacutainer Serumrør ble
byttet ut i 2008 med Vacuette® serum med gel. Fagområdet hormon utførte da en rekke
holdbarhetsforsøk på Vacuette® serum med gel for blant annet analyttene vitamin B12, ferritin og
folat. Det ble ikke utført holdbarhetsstudie på Vacuette® serum med gel for fritt T4 og TSH, men
fagområdet gikk ut i fra at holdbarheten var den samme for disse analyttene som på Vacutainer
Serumrør.
Siden vi ikke hadde funnet noe informasjon om det var utført holdbarhetsforsøk av produsent på
BD Vacutainer Rapid Serum Tube, så vi på hva produsenten av reagenset hadde satt som holdbarhet
på de ulike analysene på Vacuette® serum med gel. Siden begge prøveglassene gir serum og
inneholder en separasjonsgel går vi ut ifra at holdbarheten fra produsenten også kan gjelde for BD
Vacutainer Rapid Serum Tube. Vi er derimot ikke helt sikre på dette fordi prøverørene har ulike
tilsetningsstoffer. Reagensene er alle sammen produsert av Roche. Produsenten oppgir at
holdbarheten til analyttene i serum fra Vacuette® serum med gel er en dag for vitamin B12 og to
dager for de resterende analysene. 14) Forutsetningen er da at prøvene står på gel og oppbevares i
kjøleskap med temperatur 2 - 8 ºC.
15
Til holdbarhetsforsøket tok vi fem blodprøver på BD Vacutainer Rapid Serum Tube av en frivillig.
Prøvene ble sentrifugert etter 10 minutter. Prøvene ble første gang analysert innen to timer. Vi
analyserte samtidig fem paralleller av en donorkontroll. Donorkontrollene er frosset ned, og vi tok
opp prøvemateriale til fem paralleller hver dag. Forsøket gikk over syv dager. For hver av de fem
analysene er det to måleceller som benyttes, vi maskerte en av disse slik at prøvene ble analysert i
samme målecelle i hele forsøket. Grunnen til at vi valgte å gjøre dette er fordi vi ønsket så
nøyaktige analyseresultater som mulig da vi ville finne ut holdbarheten.
Vårt prøvemateriale ble lagret i kjøleskap ved 2-8 °C i syv døgn. Til holdbarhetsforsøket ønsket vi å
benytte oss av donorkontroller som kontroller. Disse ble behandlet som ukjente prøver i likhet med
parallellene vi tok fra den frivillige.
Vi hadde fem paralleller av serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube som vi analyserte hver dag
i en uke. Vi lot serum stå i det originale prøverøret under hele forsøket. Vi benyttet også fem
paralleller av donorskontroll til hver analysering. En donorkontroll ble hentet opp fra fryser hver
dag før de ble fordelt på fem paralleller. Donorkontrollen ble pipettert over i fem hitatchi kopper
med 200µl i hver kopp. Før analysering sto donorkontroll og prøverørene i en halvtime på benk for
å få romtemperatur.
Fordelen med å bruke donorkontroller som kontrollprøver er fordi man kan sammenligne
resultatene vi fikk på donorkontroll og serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube. Flere
paralleller vil gjøre det enklere å oppdage avvik som kan ha oppstått. Alle resultatene våre ble
plottet inn i holdbarhetsskjema fra NKK. Holdbarhetsskjemaet heter «Stabilitet med replikater» og
er laget av Pål Rustad i 2009. 15)
Prøveglassene vi benyttet til holdbarhetsforsøket var BD Vacutainer Rapid Serum Tube med lot
nummer: 111103
3.1.3 Grenseverdier
Vi satt opp nedre og øvre grense som vi ønsket at prøveverdiene skulle ligge innenfor. Disse
bestemte vi ut fra mål for systematisk feil. Vi tar utgangspunkt i at prøveverdiene vil komme
innenfor optimale grenser, derfor har vi brukt disse grensene i tabellene i vedlegg 1-5, men vi
godkjenner alle prøveverdier innenfor ønskelige grenser. Mål for systematisk feil beregnes fra den
16
biologiske variasjonen til analyttene. Tabellen nedenfor er en oversikt over disse, funnet i
Westgards biodatabase.
Tabell 1: Analyttenes biologiske variasjon. 16)
Biologisk
variasjon
Analytt
CVw
CVb
S-
Ferritin
14,2
15,0
S-
Folat
24,0
73,0
S-
Fritt T4
5,7
12,1
S-
TSH
19,3
24,6
Siden vi ikke fant biologisk variasjon for vitamin B12 i Westgards biodatabase, bestemte vi oss for å
bruke optimal grense på 4,9 %, som er lik VKa til vitamin B12 som er oppgitt i laboratoriehåndboka.
5)
Total biologisk variasjon: 𝐶𝑉 =
(𝐶𝑉 + 𝐶𝑉 )
17)
Ferritin: 𝐶𝑉 = 14,2 + 15,0 =20,66
Folat: 𝐶𝑉 = 24,0 + 73,0 =76,84
Fritt T4: 𝐶𝑉 = 5,7 + 12,1 =19,38
TSH: 𝐶𝑉 = 19,3 + 24,6 =31,27
Mål for systematisk feil/tillatt avvik/bias:
Optimalt: 𝐵 < 0,125 × 𝐶𝑉
Ønskelig: 𝐵 < 0,250 × 𝐶𝑉
Minimum: 𝐵 < 0,375 × 𝐶𝑉 17)
Vitamin B12
Optimalt: 4,9 %
Ønskelig: 9,8 %
Minimum: 14,7 %
Ferritin
Optimalt: B<0,125x20,66, B<2,58
Ønskelig: B<0,250x20,66, B<5,17
Minimum: B<0,375x20,66, B<7,75
17
Folat
Optimalt: B<0,125x76,84, B<9,61
Ønskelig: B<0,250x76,84, B<19,21
Minimum: B<0,375x76,84, B<28,82
Fritt T4
Optimalt: B<0,125x19,38, B<2,42
Ønskelig: B<0,250x19,38, B<4,85
Minimum: B<0,375x19,38, B<7,27
TSH
Optimalt: B<0,125x31,27, B<3,91
Ønskelig: B<0,250x31,27, B<7,82
Minimum: B<0,375x, B<11,73
3.2 Reagenser og kontroller
Vi brukte samme reagenser og kontroller som fagområdet hormon bruker i det daglige arbeidet.
Donorkontroll brukes som daglig kvalitetskontroll på Modular E170. Donorskontroll er serum som
er tappet av mange ulike blodgivere og blandet sammen. Serumet blir så pipettert over i ulike volum
i eppendorfrør og lagret i en fryser på -70 °C. Fordelen med donorkontroller er at det er laget i så
store mengder at det varer i minimum to år. Donorskontroller har kjente konsentrasjoner av
analytter man ønsker å analysere. I tillegg til donorkontrollen blir enten Seronorm (SN) 1, 2 eller 3
analysert hver dag. Disse kontrollene blir levert av Sero. Seronorm 1 og 2 blir levert frysetørret.
Disse løses opp i vann og fryses ned. Som regel analyseres Seronorm 1 og 2 annenhver dag. I
tillegg blir Seronorm 3 analysert en gang i uken. Seronorm 3 er en flytende løsning, og blir levert til
UNN i frosset form. Fagområdet hormon tiner opp kontrollen og porsjoneres den ut i hitatchikopper
før de fryses igjen. Seronorm 3 er en kontroll i det lave området. Alle våre analyser med unntak av
folat blir analysert på denne kontrollen. Kontrollene fra Seronorm er holdbar i en måned og
oppbevares i fryseskap med en temperatur på < -20 °C.
18
Når alle kontrollene er analysert blir de overført til en datamaskin og lagret i et
kvalitetskontrollprogram som heter Quality Management (QM). I QM har man oversikt over alle
kontrollene som har blitt analysert over et gitt tidsrom. Det er satt opp grenser på hva man kan
godta for spredning av kontrollene. Denne grensen er satt til ± 2 standardavvik (SD) av en beregnet
middelverdi. Dersom alle kontrollene er godkjente kan man starte analyseringen av pasientprøver.
Tabell 2: Lot nummer på kontroller vi har benyttet i vår studie.
SN1
SN2
SN3
Vitamin B12
912699
911670
112053
Ferritin
912699
911670
112053
Folat
912699
911670
-
Fritt T4
912699
911670
112053
TSH
912699
911670
112053
Reagenser er produsert av Roche.
Tabell 3: Lot nummer på reagenser vi har benyttet i vår studie:
Lot nummer
Vitamin B12
Ferritin
Folat
Fritt T4
TSH
165613/
166107
166034
166498
165872
167508
4. Resultater
Alle kontrollene som ble analysert for begge forsøkene gikk innenfor ± 2 standardavvik av beregnet
middelverdi, og er dermed godkjente.
4.1 Del 1 Sammenligningsforsøk
Vedlegg 1-5 viser resultatene av sammenligningsforsøket for hver analyse. Vi har beregnet nedre og
øvre grenser analyttene skal ligge innenfor, når mål for systematisk feil er optimalt. I vedleggene
19
har vi merket middelverdien for parallellene til BD Vacutainer Rapid Serum Tube med blå farge der
analyseresultatet har kommet utenfor optimal grense, og grønn farge der analyseresultatet har
kommet utenfor ønskelig grense. Vi har også funnet differansen mellom middelverdiene for serum
fra Vacuette® serum med gel og middelverdiene for serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube.
For hver analyse har vi satt opp et differansediagram. Differansediagrammet viser om det er
samsvar mellom Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube, samtidig som
man kan vurdere presisjon og om spredningen av resultatene er konsentrasjonsavhengig.
Vacuette® - Vacutainer (pmol/L)
Differansediagram Vitamin B12
20,0
15,0
10,0
5,0
0,0
-5,0
0,0
100,0
200,0
300,0
400,0
500,0
600,0
700,0
800,0
-10,0
-15,0
-20,0
Gjennomsnitt Vitamin B12 (pmol/L)
Figur 5: Differansediagram for vitamin B12. På y-aksen finner vi differansen mellom Vacuette®
serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. X-aksen viser middelverdien av serum fra
disse to prøverørene.
Som vist på figur 5 ligger verdiene på begge sider av x-aksen i hele konsentrasjonsområdet.
20
Vacuette® - Vacutainer (μg/L)
Differansediagram Ferritin
10,00
8,00
6,00
4,00
2,00
0,00
-2,00 0,00
-4,00
-6,00
-8,00
-10,00
100,00
200,00
300,00
400,00
500,00
600,00
700,00
Gjennomsnitt Ferritin (μg/L)
Figur 6: Differansediagram for ferritin. På y-aksen finner vi differansen mellom Vacuette®
serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. X-aksen viser middelverdien av serum fra
disse to prøverørene.
Som vist på figur 6 er det liten differanse mellom Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer
Rapid Serum Tube i referanseområdet. Vi har to prøver med verdier i høyt område, og her er det
større differanse.
Da ikke alle prøvene gikk innenfor optimale grenser, som vist i vedlegg 2, har vi regnet ut ønskelig
og minimum grense der det er aktuelt.
Ønskelig grense:
Prøve 3: 7,28-8,08
Prøve 18: 93,68-103,89
Prøve 27: 28,52-31,63
Minimum:
Prøve 3: 7,08-8,28
21
Vacuette® - Vacutainer (nmol/L)
Differansediagram Folat
5,00
4,00
3,00
2,00
1,00
0,00
-1,00 0,00
-2,00
-3,00
-4,00
-5,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
Gjennomsnitt Folat (nmol/L)
Figur 7: Differansediagram for folat. På y-aksen finner vi differansen mellom Vacuette® serum
med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. X-aksen viser middelverdien av serum fra disse to
prøverørene.
Figur 7 viser at prøveverdiene er jevnt fordelt på begge sider av x-aksen.
Som vist i vedlegg 3 var det en av prøvene som ikke kom innenfor optimal grense, derfor har vi
regnet ut ønskelig grense for denne.
Ønskelig grense:
Prøve 7: 25,79-38,05
22
Vacuette® - Vacutainer (pmol/L)
Differansediagram Fritt T4
0,50
0,40
0,30
0,20
0,10
0,00
-0,10 0,00
-0,20
-0,30
-0,40
-0,50
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
Gjennomsnitt Fritt T4 (pmol/L)
Figur 8: Differansediagram for fritt T4. På y-aksen finner vi differansen mellom Vacuette®
serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. X-aksen viser middelverdien av serum fra
disse to prøverørene.
Figur 8 viser at prøveverdiene ligger på begge sider av x-aksen.
Da ikke alle prøvene gikk innenfor optimale grenser, som vist i vedlegg 4, har vi regnet ut ønskelig
grense der det er aktuelt.
Ønskelig grense:
Prøve 9: 12,71-14,00
23
Differansediagram TSH
Vacuette® - Vacutainer (mIU/L)
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
-0,05 0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
-0,10
-0,15
-0,20
-0,25
Gjennomsnitt TSH (mIU/L)
Figur 9: Differansediagram for TSH. På y-aksen finner vi differansen mellom Vacuette® serum
med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. X-aksen viser middelverdien av serum fra disse to
prøverørene.
Figur 9 viser at de fleste verdiene ligger på samme side av x-aksen. BD Vacutainer Rapid Serum
Tube gir høyere verdier enn Vacuette® serum med gel i hele konsentrasjonsområdet, men vi ser at
differansen er større i det høye området.
4.2 Del 2: Holdbarhetsforsøk
Tabell 4: Gjennomsnitt av analyseverdiene for serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube fra
dag 0 til dag 7.
Prøve
Dag 0
Dag 1
Dag 2
Dag 3
Dag 4
Dag 5
Dag 6
Dag 7
Vitamin B12
pmol/L
253,1
275,8
272,2
272,0
270,2
273,2
275,7
275,0
Ferritin
µg/L
39,28
39,19
38,97
39,43
39,36
40,12
39,49
39,90
24
Folat
nmol/L
16,67
16,73
16,56
16,38
15,79
16,06
16,17
15,85
Fritt T4
pmol/L
15,78
16,22
15,78
16,04
16,77
16,73
17,21
17,79
TSH
mIU/L
0,471
0,467
0,468
0,471
0,476
0,469
0,472
0,476
Tabell 5: Gjennomsnitt av donorkontrollene for hver analyse fra dag 0 til dag 7.
Donor
Dag 0
Dag 1
Dag 2
Dag 3
Dag 4
Dag 5
Dag 6
Dag 7
Vitamin B12
pmol/L
273,7
291,2
289,5
287,3
281,9
292,2
293,4
293,7
Ferritin
µg/L
82,27
79,73
77,90
79,95
79,77
79,71
80,07
79,49
Folat
nmol/L
19,40
19,61
19,67
19,68
19,54
19,39
20,19
20,07
Fritt T4
pmol/L
15,73
15,95
15,52
15,74
16,24
16,21
16,24
16,59
TSH
mIU/L
1,664
1,630
1,618
1,632
1,618
1,614
1,598
1,614
For hver analyse har vi laget en graf som viser konsentrasjonsendring i prosent fra dag til dag. Vi
har brukt resultatene på donorkontrollene for å korrigere for drift i systemet fra dag til dag. Grafen
viser også konfidensintervallet(KI), som er intervallet vi antar at den sanne verdi skal ligge
innenfor. KI er 90 % på alle analysene. Mål 1 på grafene er optimal grense, mens mål 2 er ønskelig
grense.
Figur 10: Endring av vitamin B12 konsentrasjonen i prosent fra dag til dag.
Alle verdiene for vitamin B12 ligger innenfor optimal grense. Vi ser på figur 10 at vitamin B12
holder seg stabil i hele måleperioden.
25
Figur 11: Endring av ferritin konsentrasjonen i prosent fra dag til dag.
Figur 11 viser at ferritinverdiene ligger utenfor optimal grense fra dag 1 til dag 7.Det virker som
ferritin har litt ustabile verdier. KI ligger innenfor ønskelig grense for alle dagene.
Figur 12: Endring av folat konsentrasjonen i prosent fra dag til dag.
Figur 12 viser en jevn nedgang i folatverdiene fra dag 0 til dag 7. Alle verdiene er innenfor optimal
grense.
26
Figur 13: Endring av fritt T4 konsentrasjonen i prosent fra dag til dag.
Som vist på figur 13 holder verdiene til fritt T4 seg innenfor optimal grense fra dag 1 til dag 3. Dag
4 og 5 har verdiene økt, slik at verdiene er utenfor optimal grense men innenfor ønskelig grense. KI
innenfor optimal grense dag 4 og 5. Etter dag 5 stiger verdiene relativt mye, og går utenfor ønskelig
grense.
Figur 15: Endring av TSH konsentrasjonen i prosent fra dag til dag.
Det er en liten stigning på TSH verdiene fra dag 0 til dag 7. Verdiene på dag 6 og 7 er like utenfor
optimale grenser. KI ligger innenfor optimale grenser for alle verdiene.
27
5 Diskusjon
Del 1: Sammenligningsforsøket
For å vurdere om analysene ga likt svar sammenlignet vi middelverdien til de to parallellene av BD
Vacutainer Rapid Serum Tube med middelverdien til parallellene til Vacuette® serum med gel. Vi
satt grensene for tillatt avvik med utgangspunkt i at prøveverdiene lå innenfor optimale
grenseverdier. Det viktigste i vurderingen av om vi kan bruke BD Vacutainer Rapid Serum Tube i
tillegg til Vacuette® serum med gel er om de forskjellene som er mellom analyseresulatetene vil ha
diagnostisk betydning for pasienten.
De fleste av prøvene ga ikke nøyaktig like svar på parallellene. Dette gjelder både for Vacuette®
serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. En grunn til dette kan være fordi det er
benyttet ulike måleceller i analyseringen. For hver analyse er det to måleceller som brukes om
hverandre. Det er helt tilfeldig hvilken målecelle prøven blir analysert på. Vi kunne ha valgt å
maskere en av målecellene slik at alle analysene ble analysert på samme målecelle. Analysesvarene
mellom parallellene ville da blitt mer lik, da det er små ulikheter i målecellene. Grunnen til at vi
ikke valgte å maskere målecellene er fordi vi ønsket å utføre sammenligningsforsøket under samme
betingelser som det daglige arbeidet på instrumentet.
Vitamin B12:
For vitamin B12 fant vi ikke verdier for biologisk variasjon. Vi valgte derfor å benytte 4,9 % som
optimalt tillatt avvik, på grunn av at 4,9 % er den analytiske CV som er oppgitt i
laboratoriehåndboka. Alle vitamin B12 verdier var innenfor optimale grenser. Referanseområdet er
150-580 pmol/L. Det er altså et relativt stort referanseområde. Som vi ser i vedlegg 1 er den største
differansen mellom BD Vacutainer Rapid Serum Tube og Vacuette® serum med gel -14,3 pmol/L
på prøve 18. Begge middelverdiene var innenfor referanseområdet. På grunn av det store
referanseområdet vil ikke dette ha noen diagnostisk betydning. Resultatet gir samme utfall for
pasienten. Det samme gjelder for de andre 31 personene vi analyserte vitamin B12 på.
I figur 5 ser vi at verdiene ligger på begge sider av x-aksen i hele konsentrasjonsområdet,
presisjonen er altså ikke konsentrasjonsavhengig.
28
Ferritin:
For ferritin kom 3 av 32 prøver utenfor optimal grenseverdi. Prøve 27 hadde en middelverdi på
30,94 µg/L. Optimale grenser er 29,30-30,85 µg/L. Ønskelige grenser er beregnet til 28,52-31,63
µg/L, og verdien er innenfor disse grensene. Prøve 18 hadde en middelverdi 102,20 µg/L. Optimale
grenser er 96,24-101,33 µg/L. Ønskelige grenser er 93,68-103,89 µg/L, og verdien er innenfor disse
grensene. Prøve 3 hadde en middelverdi på 8,27 µg/L. Optimale grenser er 7,48-7,88 µg/L. Prøve 3
er også utenfor ønskelige grenser som er satt til 7,28-8,08 µg/L. Minimum grenser er 7,08-8,28
µg/L. Prøve 3 kommer akkurat innenfor denne grensen. Referanseområdet for ferritin er 29-383
µg/L for menn og 10-167 µg/L for kvinner. Prøve 3 har den laveste verdien for ferritin av alle
prøvene, og med optimal tillatt feil på 2,58 %, som ikke er så høyt, er det lett at lave verdier
kommer utenfor siden grensene blir så smale. Differansen mellom Vacuette® serum med gel og BD
Vacutainer Rapid Serum Tube for prøve 3 er -0,59 µg/L, altså ikke spesielt stor. Middelverdiene til
Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube, på henholdsvis 7,68 µg/L og 8,27
µg/L, vil ha samme diagnostiske betydning.
Differansediagrammet for ferritin, figur 6, viser at de to verdiene vi har i høyt område gir en større
differanse mellom Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. Siden vi bare
har to prøver i høyt område, kan vi ikke konkludere med at alle høye prøveverdier gir større
differanse mellom de ulike prøverørene.
Folat:
For folat var det en verdi som ikke kom innenfor optimal grense. BD Vacutainer Rapid Serum Tube
gir en middelverdi på 27,96 nmol/L på prøve 7, og optimal grense er 28,85-34,99 nmol/L. Hvis vi
ser på parallellene ser vi at den ene er 30,27 nmol/L og den andre er 25,64 nmol/L. Det er altså
relativt stor differanse mellom disse, og den ene trekker middelverdien ned. Ingen av de andre
parallellene på BD Vacutainer Rapid Serum Tube har så stor differanse mellom seg. Det er mulig at
det er skjedd en tilfeldig feil under analyseringen som gjør at den ene parallellen ble lavere, da den
andre kommer fint innenfor optimale grenser. Det har uansett ingen diagnostisk betydning ettersom
referanseområdet for kvinner og menn er >7 nmol/L. Når vi ser på alle resultatene som en helhet viser de
godt samsvar mellom Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube.
29
Figur 7 viser at prøveverdiene for folat fordeler seg på jevnt både over og under x-aksen. I
differansediagrammet er det en verdi som har større differanse enn de andre. Dette er prøve 7 som
er diskutert ovenfor.
Fritt T4:
For fritt T4 kom 1 av 32 prøver utenfor optimal grenseverdi. Middelverdien for serum fra BD
Vacutainer Rapid Serum Tube var 13,77 pmol/L på prøve 9. Optimale grenser er 13,03-13,68
pmol/L. Prøve 9 på fritt T4 kom derfor utenfor denne grensen, men innenfor ønskelig grense som er
satt til 12,71-14,00 pmol/L. Middelverdien på Vacuette® serum med gel for prøve 9 var 13,36
pmol/L, altså er det ikke stor differanse mellom prøveglassene. Differansen er ikke av diagnostisk
betydning.
Som vist på differansediagrammet i figur 8 har prøveverdiene for fritt T4 fordeler seg jevnt på
begge sider av x-aksen Vi fant ingen pasienter med lav fritt T4 vi kunne ta prøve av. Vi kan derfor
ikke vurdere om prøverørene gir likt svar i lavt konsentrasjonsområde, men vi forventer ingen større
endring i dette området enn verdier som ligger innenfor referanseområdet. Grunnen til dette er at
ingen av de andre analyttene vi har analysert i sammenligningsforsøket viser stor differanse i lavt
konsentrasjonsområde.
TSH:
Alle TSH verdier kom innenfor optimale grenser. Det er, som vist i vedlegg 5, liten differanse
mellom Vacuette® serum med gel og BD Vacutainer Rapid Serum Tube. I figur 9 ser vi at de fleste
verdiene ligger over x-aksen, vi får gjennomgående lavere verdier på BD Vacutainer Rapid Serum
Tube. Siden differansene er så små vil det ikke ha diagnostisk betydning for pasienten.
Dersom vi ser på differansediagrammet for TSH, vist på figur 9, er det større differanse mellom
middelverdiene dersom TSH verdien er høy. I diagrammet ligger verdiene mer samlet dersom de er
innenfor referanseområdet. Siden vi har få prøver som er utenfor referanseområdet for denne
analysen kan vi ikke si helt sikkert at differansen mellom middelverdiene vil øke, men utfra
resultatene figur 9 kan dette være en sannsynlighet.
30
Del 2: Holdbarhetsforsøket
I holdbarhetsforsøket har ikke prøvebehandlingen vært optimal for parallellene av BD Vacutainer
Rapid Serum Tube. Prøvene står i kjøleskap fra dag til dag, men tas opp og får romtemperatur før
analysering. Hver dag har de altså stått minst en time i romtemperatur, før de igjen settes i
kjøleskap. Temperaturendringen av prøvematerialet hver dag kan ha innvirkning på
analyseresultatene. I tillegg er korkene av under analysering, og dette kan føre til litt fordamping av
prøvematerialet. Som nevnt tidligere skal temperaturen i kjøleskapet være 2-8 °C. Det hender ofte
at døra til kjøleskapet er åpen litt for lenge. Vi oppdaget at temperaturen i kjøleskapet i perioden da
vi utførte holdbarhetsforsøket hadde en maksimum temperatur på 15,3 °C. Resultatet av disse
faktorene er at prøvesvarene kan variere mer enn de normal ville gjort hvis de hadde fått stått kjølig
og med kork før en eventuell etter-rekvirering.
Som vist i tabell 4 og 5 har donorkontrollene til ferritin og TSH vesentlig høyere verdi enn
prøveparallellene. Vi ser i figur 11, for ferritin, og figur 15, for TSH, at dette gir større variasjon i
grafene. Vi vurderte å ta bort donorkontrollene for ferritin og TSH, og i stedet benytte
kvalitetskontrollene som mål på å oppdage drift og usikkerhet i analyseringen. Vi valgte likevel å
beholde donorkontrollene fordi helheten av analyseresultatene ble bedre når vi beholdt de, og vi
kunne ikke forsvare å bare fjerne donorkontrollene for to analyser.
Vitamin B12:
Som vist på figur 10 holder vitamin B12 seg tilnærmet stabil under hele holdbarhetsforsøket. I tabell
4 og 5 ser vi at nivået på både prøveverdien og donorkontroll er lave den første dagen, gjør så et
hopp, og holder seg jevn resten av dagene. Både prøveverdiene og KI holder seg innenfor optimal
grense alle dagene. Vitamin B12 viser ingen betydelig konsentrasjonsendring ved lagring i en uke.
Ferritin:
Tabell 4 viser at gjennomsnittet for parallellene ikke varierer mye fra dag til dag. Donorkontrollene
i tabell 5 varierer litt mer. Donorkontrollene er betydelig høyere enn prøveverdiene og
korrigeringen gir derfor veldig varierende verdier. Ferritin har relativt snevre grenser, derfor kan det
se ut som resultatene varierer mer sammenlignet med de andre analyttene. Selv om verdiene
varierer litt fra dag til dag, så er KI innenfor ønskelig grense alle dager.
31
Folat:
Figur 12 viser at prøveverdiene synker jevnt fra dag til dag, men alle verdier er innenfor optimal
grense. Tabell 4 viser at prøveverdiene holder seg jevnt fra dag til dag, mens tabell 5 viser at
donorkontrollene har en liten stigning. Det er altså større differanse mellom prøve og donor de siste
dagene, og vi får en synkende graf.
Fritt T4:
Som vist i tabell 4 og 5 er gjennomsnittet av verdiene for donor og prøvene ganske like. Både
prøveverdiene og donorkontrollene øker jevnt fra dag til dag, men prøveverdiene øker mer enn
donorkontrollene de siste dagene. Dette gir en kurve som stiger til utenfor ønskelig grense på dag 6
og 7. Det er altså god holdbarhet på fritt T4 de 5 første dagene.
TSH:
I tabell 4 og 5 ser vi at gjennomsnittet av verdiene for prøvene og donorkontrollene holder seg
ganske jevne under hele forsøket. Donorkontrollene har høyere verdi enn prøveverdiene fra BD
Vacutainer Rapid Serum Tube. På figur 15 ser man at det skjer en liten stigning av prøveverdiene
fra dag til dag. For dag 6 og 7 er prøveverdiene like utenfor optimal grense. KI er innenfor optimal
grense for hele perioden.
6 Konklusjon
Ut fra resultatene i sammenligningsforsøket velger vi å konkludere med at BD Vacutainer Rapid
Serum Tube kan brukes som et supplement til Vacuette® serum med gel for analysene vitamin B12,
ferritin, folat, fritt T4 og TSH. Siden BD Vacutainer Rapid Serum Tube kan sentrifugeres etter fem
minutter, vil dette prøverøret være en fin erstatter for Vacuette® litium heparinrør der analysesvaret
må forekomme raskt.
For holdbarhetsforsøket konkluderer vi med at holdbarheten til vitamin B12, ferritin, folat og TSH i
serum fra BD Vacutainer Rapid Serum Tube er syv dager. Fritt T4 har ut fra vårt forsøk en
holdbarhet på fem dager. Fagområdet hormon har ikke utført holdbarhetsforsøk på fritt T4 i
32
Vacuette® serum med gel. Vi anbefaler at fagområdet hormon utfører et holdbarhetsforsøk på fritt
T4 i Vacuette® serum med gel, da det ikke er sikkert at denne analytten er holdbar i syv dager i
dette prøvematerialet heller.
33
Litteraturliste
1) Roche Modular Analytics: http://tinyurl.com/d45pz8d (08.05.2012)
2) Modular E170 Operatørtrening. Roche Diagnostics; 2003 (08.05.2012)
3) Immunoassay prinsipp: http://tinyurl.com/clpa98y (11.05.12)
4) Brukerhåndbok medisinsk biokjemi, Urdal, Brun, Åsberg, Akademisk fagforlag AS, 4.utgave
2009
5) Laboratoriehåndboken ved Universitetssykehuset Nord-Norge:
http://www.unn.no/laboratoriehaandbok/category14289.html (29.05.2012)
6) Bishop L M, Fody P E, Schoeff E L. Clinical Chemistry (6 utgave).Philadelphia; Wolters
Kluwer,2010.
7) Introduksjon til BD RST: http://tinyurl.com/d3jyhxy (01.05.12)
8) Sammendrag om trombin: http://tinyurl.com/cmy8nd7 (01.05.12)
9) Vacuette® serumrør med gel: http://www.gbo.com/en/index_1765.php (01.05.2012)
10) Gel Barrier Stability in Vacuette® Serum Separator Tubes for LDH and Potassium:
http://www.gbo.com/documents/WP_Stability_K_LDH_WIL09.pdf (01.05.2012)
11) Sample collection lithium heparin: http://tinyurl.com/cyesxkb (01.05.2012)
12) Husøy A-M. Blodprøvetaking i praksis (1 utgave). Oslo; Akribe AS; 2005
13) Thoresen T S. Statistikk for laboratoriet (2 utgave). Tromsø; Lundblad Media AS; 2011
14) Pakningsvedlegg; ferritin, folat, vitamin b12, TSH og fritt T4. Roche Diagnostic; 2011.
15) Elektronisk versjon av «Stabilitet med replikater»:
http://www.nkk-ekv.com/84240410 (20.05.2012)
16) Westgards biodatabase: http://www.westgard.com/biodatabase-update.htm (08.05.12)
17) Mal for metodevalidering fra NKK, finnes på:
http://dl.dropbox.com/u/6135495/nkkweb/val/Val_NKK.pdf (08.05.12)
34
Vedlegg 1: Resultater vitamin B12
Prøve
B12
Optimal Optimal
Vacuette Vacuette Middelverdi Vacutainer Vacutainer Middelverdi
Differanse av
nedre
øvre
Serum 1 Serum 2 Vacuette
Serum 1
Serum 2 Vacutainer
middelverdier
grense grense
pmol/L pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L pmol/L
1
361,2
354,1
357,7
360,9
346,3
353,6
340,1
375,2
4,0
2
311,8
302,8
307,3
311,0
309,8
310,4
292,2
322,4
-3,1
3
552,0
559,7
555,9
551,8
546,0
548,9
528,6
583,1
7,0
4
257,5
258,5
258,0
252,0
252,9
252,5
245,4
270,6
5,6
5
198,4
197,5
198,0
201,8
202,5
202,2
188,3
207,6
-4,2
6
357,8
352,2
355,0
362,9
358,4
360,7
337,6
372,4
-5,6
7
287,1
291,3
289,2
277,1
274,7
275,9
275,0
303,4
13,3
8
394,2
386,5
390,4
380,3
378,8
379,6
371,2
409,5
10,8
9
293,8
300,5
297,2
305,6
312,2
308,9
282,6
311,7
-11,8
10
363,2
369,2
366,2
362,9
370,4
366,7
348,3
384,1
-0,4
11
437,9
447,7
442,8
439,8
442,8
441,3
421,1
464,5
1,5
12
191,3
187,8
189,6
190,4
191,7
191,1
180,3
198,8
-1,5
13
402,8
397,5
400,2
390,9
392,3
391,6
380,5
419,8
8,5
14
184,2
187,9
186,1
186,6
193,5
190,1
176,9
195,2
-4,0
15
283,9
289,9
286,9
288,0
291,3
289,7
272,8
301,0
-2,8
16
238,0
237,6
237,8
247,0
250,9
249,0
226,1
249,5
-11,2
17
197,7
199,5
198,6
200,3
201,5
200,9
188,9
208,3
-2,3
18
475,7
485,3
480,5
487,1
502,4
494,8
457,0
504,0
-14,3
19
202,0
199,9
201,0
199,4
192,8
196,1
191,1
210,8
4,8
20
301,9
301,6
301,8
299,6
303,9
301,8
287,0
316,5
0,0
21
299,9
297,4
298,7
295,4
287,6
291,5
284,0
313,3
7,1
22
429,7
421,4
425,6
421,1
422,4
421,8
404,7
446,4
3,8
23
748,3
749,9
749,1
745,6
737,2
741,4
712,4
785,8
7,7
24
299,2
303,7
301,5
303,1
301,1
302,1
286,7
316,2
-0,7
25
192,6
199,2
195,9
193,7
203,2
198,5
186,3
205,5
-2,6
26
356,1
357,9
357,0
357,5
357,7
357,6
339,5
374,5
-0,6
27
217,9
218,0
218,0
217,0
218,0
217,5
207,3
228,6
0,4
28
286,8
290,2
288,5
289,6
288,0
288,8
274,4
302,6
-0,3
29
258,2
271,5
264,9
264,1
264,5
264,3
251,9
277,8
0,6
30
280,0
286,1
283,1
276,7
279,0
277,9
269,2
296,9
5,2
31
153,4
154,4
153,9
158,9
158,2
158,6
146,4
161,4
-4,7
32
118,9
114,2
116,6
117,2
115,4
116,3
110,8
122,3
0,3
Vedlegg 2: Resultater ferritin
Optimal Optimal
Vacuette Vacuette Middelverdi Vacutainer Vacutainer Middelverdi
Differanse av
Prøve
nedre
øvre
Serum 1 Serum 2 Vacuette
serum 1
serum 2 Vacutainer
middelverdier
grense grense
Ferritin
μg/L
μg/L
μg/L
μg/L
μg/L
μg/L
μg/L
μg/L
μg/L
1
110,50
107,00
108,75
107,00
107,00
107,00
105,94
111,56
1,75
2
34,59
34,68
34,64
34,69
34,47
34,58
33,74
35,53
0,06
3
7,66
7,70
7,68
8,18
8,36
8,27
7,48
7,88
-0,59
4
45,15
44,50
44,83
44,87
44,60
44,74
43,67
45,98
0,09
5
11,63
11,68
11,66
11,60
11,27
11,44
11,35
11,96
0,22
6
49,87
50,43
50,15
50,41
49,81
50,11
48,86
51,44
0,04
7
31,40
30,68
31,04
30,85
29,89
30,37
30,24
31,84
0,67
8
40,88
39,87
40,38
40,04
39,61
39,83
39,33
41,42
0,55
9
53,15
54,52
53,84
54,01
54,66
54,34
52,45
55,22
-0,50
10
167,20
164,00
165,60
163,80
164,60
164,20
161,33
169,87
1,40
11
660,70
640,10
650,40
646,50
642,10
644,30
633,62
667,18
6,10
12
27,75
27,28
27,52
27,44
27,70
27,57
26,81
28,22
-0,05
13
22,18
22,66
22,42
22,83
22,97
22,90
21,84
23,00
-0,48
14
44,43
44,11
44,27
45,19
44,33
44,76
43,13
45,41
-0,49
15
121,50
117,00
119,25
119,60
116,10
117,85
116,17
122,33
1,40
16
138,70
139,40
139,05
139,80
138,30
139,05
135,46
142,64
0,00
17
76,25
74,22
75,24
75,58
77,03
76,31
73,29
77,18
-1,07
18
99,03
98,54
98,79
101,90
102,50
102,20
96,24
101,33
-3,42
19
183,40
183,10
183,25
183,50
183,10
183,30
178,52
187,98
-0,05
20
39,52
39,30
39,41
39,43
38,54
38,99
38,39
40,43
0,42
21
27,59
27,62
27,61
26,96
27,14
27,05
26,89
28,32
0,56
22
219,50
217,50
218,50
219,60
216,40
218,00
212,86
224,14
0,50
23
88,03
87,05
87,54
87,22
88,17
87,70
85,28
89,80
-0,16
24
197,70
199,50
198,60
199,40
197,20
198,30
193,48
203,72
0,30
25
69,06
69,11
69,09
67,97
69,54
68,76
67,30
70,87
0,33
26
126,60
128,10
127,35
130,30
129,40
129,85
124,06
130,64
-2,50
27
30,49
29,66
30,08
31,03
30,85
30,94
29,30
30,85
-0,87
28
55,10
56,36
55,73
56,21
56,20
56,21
54,29
57,17
-0,47
29
220,80
220,00
220,40
224,90
220,50
222,70
214,71
226,09
-2,30
30
520,30
516,90
518,60
507,70
512,00
509,85
505,22
531,98
8,75
31
48,01
49,43
48,72
47,46
47,82
47,64
47,46
49,98
1,08
32
58,63
60,82
59,73
58,04
59,83
58,94
58,18
61,27
0,79
Vedlegg 3: Resultater folat
Prøve
Folat
Vacuette Vacuette Middelverdi Vacutainer Vacutainer Middelverdi
Serum 1 Serum 2 Vacuette
serum 1
serum 2 Vacutainer
nmol/L nmol/L
nmol/L
nmol/L
nmol/L
nmol/L
Optimal Optimal
Differanse av
nedre
øvre
middelverdiene
grense grense
nmol/L
nmol/L nmol/L
1
13,50
11,91
12,71
13,25
11,95
12,60
11,48
13,93
0,11
2
14,07
13,91
13,99
14,44
14,67
14,56
12,65
15,33
-0,57
3
37,72
40,00
38,86
35,92
36,55
36,24
35,13
42,59
2,63
4
24,39
24,63
24,51
24,45
24,14
24,30
22,15
26,87
0,21
5
10,86
11,37
11,12
10,75
11,05
10,90
10,05
12,18
0,21
6
16,98
15,53
16,26
16,84
15,69
16,27
14,69
17,82
-0,01
7
32,51
31,33
31,92
30,27
25,64
27,96
28,85
34,99
3,97
8
13,75
13,53
13,64
13,85
13,63
13,74
12,33
14,95
-0,10
9
12,19
11,60
11,90
13,06
14,63
13,85
10,75
13,04
-1,95
10
34,26
38,81
36,54
36,11
36,72
36,42
33,02
40,05
0,12
11
23,66
23,33
23,50
23,79
23,54
23,67
21,24
25,75
-0,17
12
13,67
13,93
13,80
13,67
13,24
13,46
12,47
15,13
0,35
13
21,72
22,45
22,09
21,86
19,97
20,92
19,96
24,21
1,17
14
11,23
11,47
11,35
11,51
11,79
11,65
10,26
12,44
-0,30
15
15,92
14,80
15,36
16,20
16,37
16,29
13,88
16,84
-0,93
16
14,23
14,06
14,15
14,67
13,78
14,23
12,79
15,50
-0,08
17
12,26
12,27
12,27
11,70
11,86
11,78
11,09
13,44
0,49
18
17,44
17,85
17,65
17,03
16,57
16,80
15,95
19,34
0,85
19
9,80
8,35
9,08
9,03
8,72
8,88
8,20
9,95
0,20
20
38,96
37,12
38,04
38,56
37,18
37,87
34,38
41,70
0,17
21
11,93
11,09
11,51
11,94
11,98
11,96
10,40
12,62
-0,45
22
20,08
18,78
19,43
19,80
18,57
19,19
17,56
21,30
0,24
23
17,17
16,51
16,84
14,66
15,29
14,98
15,22
18,46
1,87
24
34,70
34,20
34,45
34,66
35,09
34,88
31,14
37,76
-0,42
25
28,69
27,81
28,25
28,26
27,18
27,72
25,54
30,96
0,53
26
14,93
15,13
15,03
15,99
14,45
15,22
13,59
16,47
-0,19
27
14,41
14,15
14,28
14,54
14,20
14,37
12,91
15,65
-0,09
28
12,67
11,90
12,29
11,65
13,17
12,41
11,10
13,47
-0,13
29
25,92
24,63
25,28
24,00
25,19
24,60
22,85
27,70
0,68
30
7,79
7,41
7,60
8,02
7,80
7,91
6,87
8,33
-0,31
31
20,93
22,18
21,56
21,53
22,38
21,96
19,48
23,63
-0,40
32
38,20
38,42
38,31
38,70
39,61
39,16
34,63
41,99
-0,84
Vedlegg 4: Resultater fritt T4
Optimal Optimal
Prøve Vacuette Vacuette Middelverdi Vacutainer Vacutainer Middelverdi
Differanse av
nedre
øvre
Serum 1 Serum 2 Vacuette
serum 1
serum 2 Vacutianer
middelverdiene
Fritt
grense grense
pmol/L pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L
pmol/L
T4
pmol/L pmol/L
1
17,00
17,23
17,12
17,18
17,33
17,26
16,70
17,53
-0,14
2
16,24
16,61
16,43
16,94
16,61
16,78
16,03
16,82
-0,35
3
16,40
16,64
16,52
16,60
16,30
16,45
16,12
16,92
0,07
4
13,49
13,69
13,59
13,68
13,47
13,58
13,26
13,92
0,02
5
17,19
17,33
17,26
17,43
17,06
17,25
16,84
17,68
0,02
6
16,18
16,67
16,43
16,90
16,59
16,75
16,03
16,82
-0,32
7
11,67
11,39
11,53
11,56
11,49
11,53
11,25
11,81
0,01
8
16,13
16,26
16,20
16,18
16,25
16,22
15,80
16,59
-0,02
9
13,35
13,36
13,36
13,85
13,68
13,77
13,03
13,68
-0,41
10
19,80
19,69
19,75
19,46
19,68
19,57
19,27
20,22
0,18
11
12,42
12,64
12,53
12,61
12,97
12,79
12,23
12,83
-0,26
12
15,54
16,20
15,87
15,76
15,78
15,77
15,49
16,25
0,10
13
15,39
15,33
15,36
15,23
15,68
15,46
14,99
15,73
-0,10
14
17,39
17,74
17,57
17,60
17,73
17,67
17,14
17,99
-0,10
15
16,40
16,52
16,46
16,23
16,69
16,46
16,06
16,86
0,00
16
12,03
12,04
12,04
12,28
12,20
12,24
11,74
12,33
-0,20
17
17,15
16,36
16,76
16,99
16,85
16,92
16,35
17,16
-0,17
18
12,00
11,89
11,95
11,90
11,97
11,94
11,66
12,23
0,01
19
16,92
16,61
16,77
16,83
16,93
16,88
16,36
17,17
-0,11
20
14,31
13,98
14,15
14,16
13,79
13,98
13,80
14,49
0,17
21
18,49
17,89
18,19
18,58
18,12
18,35
17,75
18,63
-0,16
22
15,19
14,70
14,95
14,47
14,69
14,58
14,58
15,31
0,37
23
24,47
25,55
25,01
25,15
24,76
24,96
24,40
25,62
0,05
24
16,99
17,33
17,16
17,03
17,22
17,13
16,74
17,58
0,03
25
16,07
16,58
16,33
16,28
16,04
16,16
15,93
16,72
0,16
26
18,85
18,88
18,87
18,58
19,06
18,82
18,41
19,32
0,05
27
14,08
14,40
14,24
14,17
14,56
14,37
13,90
14,58
-0,13
28
14,96
15,26
15,11
15,11
15,56
15,34
14,74
15,48
-0,23
29
14,89
14,98
14,94
14,67
14,96
14,82
14,57
15,30
0,12
30
14,49
14,96
14,73
14,34
14,65
14,50
14,37
15,08
0,23
31
17,53
17,75
17,64
17,41
17,54
17,48
17,21
18,07
0,16
32
15,08
15,10
15,09
14,88
15,39
15,14
14,72
15,46
-0,05
Vedlegg 6: Resultater TSH
Prøve
TSH
Optimal Optimal
Vacuette Vacuette Middelverdi Vacutainer Vacutainer Middelverdi
Differanse av
nedre
øvre
Serum 1 Serum 2 Vacuette
Serum 1
Serum 2 Vacutainer
middelverdiene
grense grense
mIU/L
mIU/L
mIU/L
mIU/L
mIU/L
mIU/L
mIU/L
mIU/L mIU/L
1
2,73
2,76
2,75
2,70
2,69
2,70
2,64
2,85
0,05
2
0,81
0,78
0,79
0,76
0,76
0,76
0,76
0,82
0,03
3
1,39
1,38
1,39
1,37
1,34
1,36
1,33
1,44
0,03
4
2,59
2,58
2,59
2,57
2,55
2,56
2,48
2,69
0,03
5
0,98
0,98
0,98
0,96
0,95
0,96
0,94
1,02
0,02
6
1,46
1,46
1,46
1,44
1,43
1,44
1,40
1,52
0,02
7
1,46
1,48
1,47
1,44
1,43
1,44
1,41
1,53
0,03
8
2,75
2,78
2,77
2,66
2,71
2,69
2,66
2,87
0,08
9
4,27
4,25
4,26
4,20
4,20
4,20
4,09
4,43
0,06
10
2,79
2,82
2,81
2,80
2,77
2,79
2,70
2,91
0,02
11
2,07
2,08
2,08
2,03
2,04
2,04
1,99
2,16
0,04
12
1,09
1,10
1,10
1,10
1,10
1,10
1,05
1,14
0,00
13
1,24
1,18
1,21
1,23
1,19
1,21
1,16
1,26
0,00
14
0,75
0,76
0,76
0,74
0,73
0,74
0,73
0,79
0,02
15
1,88
1,92
1,90
1,85
1,88
1,87
1,83
1,97
0,03
16
2,19
2,19
2,19
2,17
2,17
2,17
2,10
2,28
0,02
17
5,32
5,39
5,36
5,20
5,24
5,22
5,15
5,56
0,14
18
0,67
0,69
0,68
0,68
0,69
0,69
0,65
0,71
-0,01
19
0,29
0,29
0,29
0,28
0,28
0,28
0,28
0,30
0,01
20
1,22
1,24
1,23
1,19
1,18
1,19
1,18
1,28
0,04
21
0,65
0,66
0,66
0,63
0,63
0,63
0,63
0,68
0,03
22
1,42
1,41
1,42
1,37
1,37
1,37
1,36
1,47
0,04
23
0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,00
24
1,14
1,13
1,14
1,12
1,11
1,12
1,09
1,18
0,02
25
0,18
0,18
0,18
0,17
0,17
0,17
0,17
0,18
0,01
26
1,05
1,05
1,05
1,03
1,04
1,04
1,01
1,09
0,01
27
1,15
1,14
1,15
1,12
1,09
1,11
1,10
1,19
0,04
28
2,48
2,49
2,49
2,44
2,39
2,42
2,39
2,58
0,07
29
1,65
1,64
1,65
1,62
1,62
1,62
1,58
1,71
0,02
30
2,50
2,51
2,51
2,43
2,41
2,42
2,41
2,60
0,09
31
2,97
3,00
2,99
2,94
2,97
2,96
2,87
3,10
0,03
32
8,18
8,18
8,18
7,96
8,00
7,98
7,86
8,50
0,20