Transcript Understanding Calibration

Octobre 2014
Principes d'étalonnage d'un
multi analyseur avec module de
chimie hétérogène.
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siemens.ca/answers
Aujourd'hui
Aujourd
hui je parlerai de:
L’étalonnage
g linéaire,, pourquoi
p q
utiliser 3
étalons, de quelle façon une courbe de
calibration linéaire est calculée, les
paramètres en place pour accepter la
courbe d’étalonnage.
L’étalonnage d’une courbe non-linéaire,
les différents modèles mathématiques
utilisés, l’impact des différents
coefficients dans le model mathématique,
q
de quelle façon l’instrument calcule les
coefficients, les paramètres pour accepter
un étalonnage non-linéaire.
L étalonnage pour une méthode
L’
immunologique, comment obtenir la
sensibilité dans les basses valeurs et
aussi pouvoir doser de hautes
concentrations.
Hémoglobine A1c, l’étalonnage, le calcule
% HbA1c et la normalisation.
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L’Instrument
L
Instrument en question
• Les concepts présentés s’appliqueront à l’instrument Dimension
ExL LM.
peut effectuer des analyses
y
de chimie g
générale,, de
• L’instrument p
protéines plasmatique, de médicaments et aussi des tests
immunologiques.
• Pour contenir les réactifs l’instrument utilise des FLEX,, toutes les
composantes requises pour faire une méthode sont contenue
dans un même FLEX. L’hydratation est faite par l’instrument, et
la stabilité du réactif est gérée par l’instrument.
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Pourquoi effectuer un étalonnage
• Lors d’un
d un nouveau lot
lot, lors de la
mise en place d’une nouvelle
méthode, pour établir une courbe
d’étalonnage.
• Pour actualiser les conditions
actuelles de l’instrument et du
réactif.
• Pour l’instrument en discussion, les
réactif en FLEX ont une stabilité
prédéterminée, l’étalonnage n’est
donc pas nécessaire
habituellement pour corriger la
dégradation quotidienne du réactif,
(stabilité est habituellement de 90
jours).
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L’Étalonnage d’une courbe linéaire
• La plupart des méthodes biochimie générale.
• L’étalonnage pour ces méthodes utilise 3 étalons qui sont
mesurés en triplicata.
• L’équation
’
pour une courbe linéaire est : Concentration
C
=
C1 x mAU + C0.
• C1 est la pente et C0 est l’intercepte.
• C1 ett C0 sontt calculés
l lé en utilisant
tili
t une simple
i l régression
é
i
linéaire.
• En exemple une courbe d’étalonnage pour le Glucose.
Etalonnage Glucose
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Validation d
d’un
un étalonnage linéaire
• Bonne précision des étalons mesurés en triplicata.
• L'instrument calcul une régression linéaire entre la
concentration des étalons de la bouteille et la
concentration obtenue
obtenue, pente (m) et intercepte (b)
(b).
• Critères acceptables pour l’étalonnages d’une méthode
linéaire
• Pente (m) 0.97–1.03
• Intercepte (b) 0
0,0
0 ou cliniquement négligeable
• Coefficient de corrélation (r) 0.990 – 1.00
• Les résultats des contrôles de qualité, doivent entrer dans
les limites.
• L’operateur
L’
t
accepte
t la
l calibration
lib ti sii lles critères
itè
sontt
atteints.
Et l
Etalonnage
Gl
Glucose
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Auto-Validation d’un étalonnage Linéaire
• Il est possible de programmer l’instrument pour une AutoV lid ti
Validation.
Si les
l critères
itè
d
de validation
lid ti entrent
t t dans
d
lles
spécifications prédéfinies dans l’instrument, il va
automatiquement accepter l’étalonnage sans l’intervention de
l opérateur.
l’opérateur
• Si la régression linéaire montre que la pente (m), l’intercepte (b)
et le coefficient de corrélation (r), mesurés, sont dans les critères
prédéterminés.
• Si les
l contrôles
t ôl d
de qualité,
lité obligatoires
bli t i
suivant
i
t lla calibration,
lib ti
sont dans les limites acceptables.
• Et aussi:
• Que la déviation Standard de la concentration des étalons
(n=3) rencontre une limite prèétablie par la compagnie.
• Que le biais entre la concentration sur la bouteille de l’étalon et
la valeur obtenue rencontre la limite établis par la compagnie.
Etalonnage Glucose
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Étalonnage (Vérification) pour les Enzymes
• Utilise aussi une courbe linéaire, concentration = C1 x
mAU + C1.
• Utilise aussi 3 étalons mesurés en triplicata.
• Mais c’est une vérification, les étalons sont des
vérificateurs.
• Les C0 et C1 sont toujours identiques et définis par le
fabricant, même avec un changement de numéro de lot de
réactif.
réactif
• Refaire, la vérification a aucun impact sur les résultats des
contrôles de qualité
qualité.
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Validation de la Vérification pour une
Enzyme
• Bonne précision des étalons mesurés en triplicata.
• L'instrument calcule une régression linéaire et compare la
concentration des étalons sur la bouteille et la
concentration obtenue, pente (m) et intercepte (b).
• Critères acceptables pour la vérification des enzymes
• Pente (m) 0.90–1.10
• Intercepte (b) 0,0 ou cliniquement négligeable
• Coefficient de corrélation (r) 0.990 – 1.00
• Sil es résultats des contrôles de qualité
qualité, faits durant
l’étalonnage, entrent dans les limites.
• L’operateur accepte la vérification si les critères sont
atteints.
• L’Auto
L’A t validation
lid ti estt aussii di
disponible
ibl
Verification ALT.xls
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Nouvelle tendance Étalonnage des Enzymes
• La tendance pour les méthodes d’Enzymes révisé est de
faire l’étalonnage linéaire.
• ALP, ALT, LD et CK, l’étalonnage est maintenant fait, une
nouvelle
ll courbe
b d’ét
d’étalonnage
l
ffait
it avec chaque
h
nouveau
lot.
• Faire l’étalonnage
l étalonnage d’une
d une enzyme prend en considération
les condition actuel de l’instrument.
• Quand une enzyme est vérifier et ne fonctionne pas bien
bien,
il est nécessaire de faire des ajustement sur l’instrument,
t’elle que la température des cuvettes de réaction.
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Si les Contrôles de Qualité n’entrent pas
dans les limites
limites.
• Certains matériaux de contrôle de qualité commerciale
contiennent des enzymes non
non-humains
humains et une matrice nonnon
humaine, ce qui peut les amener à se comporter différemment
des enzymes humains sériques.
• Les changements des CQ devraient être étudiés de manière
appropriée. La matrice de contrôle de la qualité peut être
responsable lorsque la performance des contrôle de qualité n'est
pas compatible avec les performances d'un vérificateur de lot de
réactif
é tif particulier.
ti li
• Lorsqu'un problème de matrice CQ est suspecté, les échantillons
de patients peuvent être utilisés entre les lots afin de déterminer
sii les
l diffé
différences d
de réactifs
é tif affectent
ff t t aussii lles résultats
é lt t d
des
patients.
• Le biais de matrice est presque certainement responsable de la
divergence des CQ si les échantillons humains montrent des
performances comparables entre les deux lots. Cependant, si les
échantillons de patients montrent aussi des divergences
q
significatives
g
entre les réactifs,, les vérificateurs et
cliniquement
ou des réactifs doivent être étudiés
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Étalonnage Méthode Logit
• Dans le cas des méthodes qui utilisent une courbe
d’étalonnage non linéaire, par exemple les
médicaments et les méthodes immunologique.
• Cette courbe à une forme logarithmique utilisant
une équation
é
ti spécifique
é ifi
avec plusieurs
l i
coefficient
ffi i t
pour générés sa forme.
• Le centre de la courbe a plus de pente et donne
une meilleure précision à cette concentration
concentration.
Souvent les résultats les plus cliniquement
significatif se trouvent dans cette région.
• Il faut un étalon de plus que le nombre de
coefficient de l’équation non linéaire. Si nous
avons 4 coefficients dans l’équation la méthode
aura 5 étalons.
• L
La sélection
él i d
de lla concentration
i d
des é
étalons
l
présente une concentration progressive croissante
avec le double de sons précédant, 0, 28, 56, 111,
222.
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Équation pour étalonnage non linéaire (Logit)
800
Il y a différentes équations,
q
chaque
q instrument /
fabricant utilise l’équation la mieux adaptée
pour son instrument / réactif.
700
Exemple de différente équation :
600
Log-Logit 4 paramètres:
500
800
• R= R0 + K[1 + exp(-(a + blnC))]^-1
400
700
• La méthode 4PL exige que la courbe soit
symétrique autour de son point médian.
300
600
200
500
Log – logit 5 paramètres:
100
400
• R= R0 + K[1 + exp(-(a + blnC + cC))]^-1
0
300
8000
200
20
40
60
80
40
60
80
100
120
140
700
100
600
0
500 0
20
100
120
140
400
• Parfois,
a o s, le
e 4PL donne
do e un
u mauvais
au a s ajus
ajustement
e e
aux données, en particulier autour des
asymptotes.
5 paramètres exponentiel:
• R= R0 + Kexp[a(lnC + b(lnC)^2 + c(lnC)^3]
300
• Cette équation est utilisée quand le centre de
la courbe dois êtres plus bas
200
100
0
0
20
40
60
80
100
120
140
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Équation pour courbe non-linéaire utilisée
sur Dimension RxL (Logit)
• Le dimension RxL utilise sa propre équation à 5
paramètres.
• Toutes les méthodes non-linéaire utilisent la même
équation.
• Il utilise 5 étalons en duplicatas, sauf les méthode
immunologiques (details suivront)
• Le paramètres C4 est toujours le même a 0.5.
• Les paramètres C0, C1, C2 et C3 ont une interaction entre
eux pour générer la courbe d’étalonnage. Entre deux
courbes
b d’ét
d’étalonnage,
l
il pourrait
it y avoir
i b
beaucoup d
de
différence entre les coefficients mais pas beaucoup de
différence dans la forme générale de la courbe.
Transferrine.xls
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Coefficients pour ll’équation
équation Logit
• Pour chaque nouvel étalonnage
l’instrument utilise toujours les derniers
coefficients
ffi i t dét
déterminés.
i é
• Quand les contrôles ne fonctionnent pas
pas,
il est possible que l’operateur soit obligé
d’entrer
d
entrer les coefficients originaux pour la
méthode afin d’ établir un nouveau point
de départ.
p
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Validation Courbe d’étalonnage non-linéaire
(Logit)
• Bonne précision des 5 étalons en duplicatas.
• Pour logit aussi, l'instrument calcule une régression
linéaire entre la concentration des étalons sur la bouteille
et la concentration obtenue
obtenue, pente (m) et intercepte (b)
(b).
• Critères acceptables pour la vérification des enzymes
•
•
Pente (m) 0.95–1.05
Intercepte (b) 0,0 ou cliniquement négligeable
Coefficient de corrélation (r) 0.990
0 990 – 1.00
1 00
• Les résultats des contrôles de qualité, obligatoires suite à
l’étalonnage,
g doivent entrer dans les limites.
• L’opérateur accepte l’étalonnage si les critères sont
acceptables.
• L’Auto validation est aussi disponible
• Si la déviation Standard (écart type) de la concentration des
étalons (n=2) rencontre une limite préétablis par la compagnie.
• Que le biais entre la concentration sur la bouteille de l’étalon et
la valeur obtenue rencontre la limite établie par la compagnie.
Verification TRNF.xls
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Étalonnage méthode Immunologique
• Exemple de méthodes Immunologique, CTNI, TSH, FT4, HCG,
elles utilisent le module hétérogène de l’appareil.
• Défie, avoir une bonne précision dans les très basses valeurs et
aussi pourvoir quantifier de hautes concentrations
concentrations.
• Pour réaliser ceci :
• Certains étalons qui ont une concentration critique sont
plusieurs reprise,
p
par
p exemple
p l’étalon 0 p
pour la
mesurés à p
CTNI est fait 4 fois. Dans le calcul des coefficients ces étalons
ont plus de poids (weight) dans le modèle mathématique.
• L’instrument produit deux courbes d’étalonnage, une avec un
temps de lecture très long pour avoir une bonne sensibilité
dans les basses valeurs et une courbe d’étalonnage avec des
temps de lecture plus courts pour pouvoir déterminer des
p
les limites de lecture du
concentrations élevés sans dépasser
photomètre.
CTNI
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Hémoglobine A1c
• Pour avoir un résultats % HbA1c il y a plusieurs étape fait par
l’instrument.
• L’Étalonnage
L Étalonnage de HbA1C en g/dl
g/dl, utilisant 5 niveau,
niveau un courbe
d’étalonnage non-linéaire.
g de l’Hémoglobine
g
en g
g/dl, utilisant 2 niveau, une
• L’Étalonnage
courbe linéaire.
• Le Calcule du % HbA1C = (HbA1C/HB) x 100
• La normalisation du %HbA1C utilisant les “scalers”
% HbA1c normalisée = (B x (% HbA1c)2) + (C x % HbA1c) + D
HBA1C Etalonnage.xlsx
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Avez-vous des questions ?
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