Transcript SlideSeminar_HerinaAnesti_10506021

ANALISIS PEMISAHAN ASAM KLOROGENAT, KAFEIN,
DAN ASAM ASKORBAT DALAM BIJI DAN KULIT KOPI
HIJAU DENGAN HPLC
Disusun Oleh:
Herina Anesti
10506021
Pembimbing : Prof. Dr. Buchari
Kelompok Keahlian Kimia Analitik
Program Studi Kimia
Institut Teknologi Bandung
Agenda Presentasi
 Pendahuluan
 Tahapan Penelitian
 Hasil dan Pembahasan
 Kesimpulan
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Latar Belakang
Pendahuluan
BERDASARKAN PENELITIAN TERBARU, KOPI MENGANDUNG SENYAWA
ANTIOKSIDAN YANG BERMANFAAT BAGI KESEHATAN
KANDUNGAN ASAM KLOROGENAT
KOPI HIJAU > KOPI SANGRAI
Kafein memberi
dampak negati bagi
kesehatan
Asam askorbat
sebagai antioksidan
METODE ANALISA PEMISAHAN
Spektrofotometri
UV/Vis
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
HPLC
Tujuan
Pendahuluan
Menganalisa pemisahan asam klorogenat, kafein dan
asam askorbat di dalam biji dan kulit kopi hijau dan
kopi jemur yang berasal dari daerah Pangalengan,
Bandung dengan menggunakan HPLC.
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Lingkup Kajian
Pendahuluan
 Senyawa yang akan dianalisis yaitu kafein, asam askorbat dan
asam klorogenat di dalam kopi
 Analisa dilakukan dengan menggunakan HPLC
 Eluen yang digunakan adalah metanol :air, metanol : asam
sitrat, dan metanol : asetonitril
 Sampel kopi arabika jenis ateng super.
 Bagian yang di analisis meliputi :
1. Kulit dan biji kopi hijau meliputi kopi mentah, setengah
matang dan matang
2. Kopi jemur
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Tahapan Penelitian
Penentuan Panjang Gelombang Maksimum Standar Kafein
dan Asam askorbat dengan Spektrofotometri UV/Vis
Ekstraksi kulit dan biji kopi hijau, kopi jemur dengan
pelarut metanol selama 6, 9 dan 12 jam dengan
Soxhlet
Pemisahan senyawa di dalam ekstrakstan kopi
dengan menggunakan HPLC
Eluen:
1. Metanol : air
2. Metanol : Asam sitrat
3. Metanol : asetonitril
Analisis Hasil
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil dan
Pembahasan
Panjang Gelombang Maksimum
Standar Kafein
Konsentrasi
Panjang
(ppm)
gelombang
kafein
Absorbansi
0.6
maks (nm)
0.5
274
0.1120
4
274
0.2027
6
274
0.2875
8
274
0.3764
10
272
0.4815
0.4
Absorbansi
2
y = 0.0456x + 0.0182
R² = 0.9985
0.3
0.2
0.1
0
0
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
2
4
6
ppm
8
10
12
Panjang Gelombang Maksimum
Standar Asam Askorbat
Panjang
gelombang
maks (nm)
Absorbansi
0.3
2
268
0.0549
4
268
0.0736
6
268
0.1171
8
266
0.1969
10
250
0.2680
Konsentrasi
(ppm)
Panjang
gelombang
maks (nm)
asam askorbat
y = 0.0275x - 0.0228
R² = 0.9502
0.25
Absorbansi
Konsentrasi
(ppm)
Hasil dan
Pembahasan
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0
Absorbansi
2
4
6
ppm
8
10
Pengulangan Asam Askorbat
y = 0.0561x - 0.0945
R² = 0.9841
0.5
2
268
0.0549
0.4
4
268
0.0736
0.3
6
268
0.1171
0.2
Asam Askorbat
8
266
0.1969
0.1
10
250
0.2680
Linear (Asam
Askorbat)
0
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
0
5
10
15
12
Panjang Gelombang Maksimum
Campuran Standar
Hasil dan
Pembahasan
Penambahan standar kafein 2 ppm
Panjang
Konsentrasi asam
Absorbansi
Absorbansi
Gelombang
askorbat (ppm)
kafein 272 nm
asam askorbat
(nm)
0.2
0.0959
0.2698
204
0.4
0.0989
0.2323
206
0.6
0.0989
0.2445
206
0.8
0.0999
0.2446
204
1
0.1
0.25
206
Penambahan kafein 4, 6, 8 dan 10 ppm memberikan
hasil panjang gelombang maksimum kafein 272 nm
dan asam askorbat 204 - 208 nm
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Panjang Gelombang Maksimum
Campuran Standar
Hasil dan
Pembahasan
Penambahan standar asam askorbat 0,2 ppm
Konsentrasi kafein
Absorbansi Kafein pada
Panjang gelombang asam
(nm)
panjang gelombang 272 nm
Absorbansi asam askorbat
askorbat (nm)
2
0.0686
0.0847
208
4
0.1602
0.2811
208
6
0.2361
0.4946
206
8
0.3427
0.7164
208
10
0.4077
0.8499
208
Penambahan asam askorbat 0,4; 0,6; 0,8 dan 1 ppm
memberikan hasil panjang gelombang maksimum kafein
antara 272 dan 274 nm dan asam askorbat 204 - 208 nm
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil Pengukuran Sampel
Hasil dan
Pembahasan
Berdasarkan
jurnal
SimuItaneous
determination of total chlorogenic
acid, trigonelline and caffeine in green coffee
samples by high performance gel filtration
chromatography (1994) oleh C. A. B. De
Maria, L. C. Trugo,* R. F. A. Moreira ,
panjang gelombang asam klorogenat 325
nmC. A. B. De Maria, L. C. Trugo,* R. F. A.
Moreira
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil dan
Pembahasan
Banyaknya Ekstraksi
Biji kopi
matang
Kulit kopi
Ekstraksi
6 jam
Ekstraksi
9 jam
Ekstraksi
6 jam
Ekstraksi
9 jam
Ekstraksi
12 jam
15 kali
21 kali
12 kali
19 kali
23 kali
Kadar air 12, 7438 %
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil dan
Pembahasan
Banyaknya Ekstraksi
Biji kopi mentah
Biji kopi jemur
Ekstraksi
6 jam
Ekstraksi
9 jam
Ekstraksi
12 jam
Ekstraksi
6 jam
Ekstraksi
9 jam
Ekstraksi
12 jam
13 kali
17 kali
24 kali
12 kali
17 kali
24 kali
Kadar air
29,6373%
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Kadar air
15,7727 %
Hasil dan
Pembahasan
Analisis Pemisahan dengan HPLC
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Eluen Metanol : Air
Komposisi eluen
Metanol : air (85:15)
Metanol : air (60: 40)
Metanol : air (70:30)
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil dan
Pembahasan
Hasil dan
Pembahasan
Pengukuran Standar Kafein 100 ppm
Pada Panjang Gelombang 270 nm
Menggunakan Eluen 15 air/ 85 Metanol
[mV]
Standar kafein 100 ppm eluen 15 air-85 MeOH, panjang gel 270 nm ke-2
2.947
200
Voltage
150
100
0
0
1.297
1.177
50
1
2
3
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
4
5
6
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Pengukuran Standar Asam Askorbat 100
ppm Pada Panjang Gelombang 260 nm
Menggunakan eluen 15 Air/ 85 Metanol
[mV]
Standar vit. C 100 ppm eluen 15 air-85 MeOH, panjang gel 260 nm
1.160
400
Voltage
300
200
2.863
100
0
0
1
2
3
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
4
5
[min.]
Pengukuran Standar Kafein, Asam Askorbat, dan
Trigonelin 100 ppm pada Panjang Gelombang 260
nm Menggunakan eluen 15 Air/ 85 Metanol
Hasil dan
Pembahasan
[mV]
Standar Campuran kafein, vit.C, trigonelin 100 ppm eluen 15 air-85 MeOH, panjang gel 260 nm
1.090
200
2.870
Voltage
300
1.237
400
100
0
0
1
2
3
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
4
5
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Standar Kafein 100 ppm Pada Panjang Gelombang
270 Menggunakan Eluen 60 Air/ 40 Metanol
[mV]
Standar kafein 100 ppm panjang gelom bang 270 nm , 21 april 10
1.230
0.633
-5
0.817
Voltage
0
-10
0
1
2
3
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
4
5
6
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Kulit Kopi Ateng Super Setengah Matang Ekstraksi 6
jam Dengan Eluen 60 Air/ 40 Metanol Pada Panjang
Gelombang 270 nm
[mV]
Kulit buah kopi ateng super setengah matang ekstraksi 6 jam
1.207
80
Voltage
60
40
13.703
20
0
0
5
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
10
15
Time
20
25
30
[min.]
Standar kafein 100 ppm dengan eluen 30 air-70
metanol pada panjang gelombang 270 nm
Hasil dan
Pembahasan
[mV]
Standar kafein 100 ppm eluen 30 air - 70MeOH, panjang gel 270 nm
3.653
150
Standar campuran kafein, asam askorbat,
trigonelin 100 ppm dgn eluen 30 air - 70
metanol pada panjang gelombang 270 nm
Voltage
100
1.160
50
0
[mV]
Standar campuran Kafein, Vit C, dan Trigonellin 100 ppm eluen 30 air - 70MeOH, panjang gel 270 nm
600
2
4
6
8
[min.]
Time
500
1.133
0
300
3.650
Standar asam askorbat 100 ppm dengan
eluen 30 air-70 metanol pada panjang
gelombang 270 nm
Voltage
400
200
100
0
[mV]
standar vit. C 100 ppm eluen 30 air - 70MeOH, panjang gel 270 nm
0
2
4
Time
Voltage
0.997
600
400
200
0
0
1
2
3
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
4
5
[min.]
6
8
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Eluen Metanol : Asam Sitrat
Pengukuran Standar Kafein, Asam Askorbat, dan
Trigonelin 100 ppm pada Panjang Gelombang 270 nm
Menggunakan Eluen 85 Asam Sitrat 10 mM/ 15 Metanol
[mV]
1.303
Standar campuran kafein, trigonelin, vit. C 100 ppm eluen asam sitrat-MeOH, panjang gel 270 nm KE-2
Voltage
1.383
100
50
0
0
1
2
3
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
4
5
[min.]
Pengukuran Sampel Kopi Ateng Super dengan Eluen 85
Asam Sitrat - 15 Metanol pada Panjang Gelomabang 325 nm
Hasil dan
Pembahasan
Kopi Ateng Super Kulit setengah matang
Ekstraksi 6 jam
[mV]
52.143
Sampel Ateng Super Kulit 6 jam dgn eluen 85 asam sitrat - 15 MeOH, panjang gel 325 nm
1.437
10
-10
0
20
60
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
80
101.587
103.503
84.390
40
98.083
19.743
-5
33.217
1.967
10.840
0
4.153
Voltage
5
100
[min.]
Eluen Metanol : Asetonitril
1. Metanol : asetonitril (85 : 15)
2. Metanol : asetonitril (80 : 20)
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil dan
Pembahasan
Standar Kafein 100 ppm dengan eluen 15
asetonitril – 85 metanol pada panjang
gelombang 270 nm
Hasil dan
Pembahasan
[mV]
Standar Kafein 100 ppm dgn eluen 15 asetonitril - 85 MeOH, panjang gel 270 nm
600
Voltage
Standar Campuran(kafein, asam
askorbat dan trigonelin) 100 ppm
dengan eluen 15 asetonitril - 85
metanol pada panjang gelombang
270 nm
2.140
800
400
3.373
2.923
1.657
1.273
0.807
200
0
0
1
2
3
4
[min.]
Time
[mV]
Standar Campuran 100 ppm dgn eluen 15 asetonitril - 85 MeOH, panjang gel 270 nm
Standar asam askorbat 100 ppm dengan
eluen 15 asetonitril - 85 metanol pada
panjang gelombang 270 nm
2.140
800
[mV]
400
1.307
Voltage
600
Standar Vit C 100 ppm dgn eluen 15 asetonitril - 85 MeOH, panjang gel 270 nm
250
1.297
200
2.940
1.643
100
0
0
3.367
2.930
2.163
1.883
1.647
50
0.800
Voltage
150
3.377
200
0
1
2
3
4
Time
0
1
2
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
3
4
[min.]
5
6
7
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Standar Campuran (asam askorbat, trigonelin, dan
kafein) 100 ppm Pada Panjang Gelombang 260 nm
Dengan Eluen 80 Metanol-20 Asetonitril
[mV]
Standar campuran (kaf, Vit C, dan trig) 100 ppm dengan eluen metanol 80-asetonitril 20 - 17 Mei 2010
40
2.007
Voltage
1.317
60
2.773
20
0
0
1
2
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
3
4
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Sampel Ateng Super pengenceran lima
kali dengan eluen 20 asetonitril-80
metanol pada panjang gelombang 260 nm
Sampel Biji Mentah 6 jam
Sampel Biji Mentah 9 jam
[mV]
[mV]
Sampel Ateng Super Biji Mentah 6 jam dgn eluen 20 asetonitril - 80 MeOH, panjang gel 260 nm
400
Sampel Ateng Super Biji Mentah 9 jam dgn eluen 20 asetonitril - 80 MeOH, panjang gel 260 nm
300
8.620
6.573
8.383
0
3.743
2.790
1.357
100
5.650
4.950
3.987
2.050
0.800
100
3.730
3.447
200
2.993
200
1.093
Voltage
1.133
400
1.333
Voltage
300
2.013
2.787
500
0
0
2
4
6
Time
8
10
[min.]
0
2
4
6
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
8
10
[min.]
Sampel Biji Jemur pengenceran lima kali
dengan eluen 20 asetonitril-80 metanol
pada panjang gelombang 260 nm
Sampel Biji Matang 6 jam
Hasil dan
Pembahasan
Sampel Kulit Setengah Matang 6 jam
[mV]
[mV]
Sampel Ateng Super Biji Matang 6 jam dgn eluen 20 asetonitril - 80 MeOH, panjang gel 260 nm
Sampel Ateng Super Kulit Setengah Matang 6 jam dgn eluen 20 asetonitril - 80 MeOH, panjang gel 260 nm
1.313
300
2.020
500
2.027
250
400
0.860
3.177
5.693
6.483
8.483
50
3.487
2.787
100
3.187
100
4.537
200
150
2.797
300
Voltage
Voltage
1.150
200
0
0
0
2
4
6
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
8
10
[min.]
0
2
4
6
Time
8
10
[min.]
Sampel Biji Jemur pengenceran lima kali
dengan eluen 20 asetonitril - 80 metanol
pada panjang gelombang 260 nm
Hasil dan
Pembahasan
Biji Jemur 6 jam
[mV]
2.010
Sampel Biji Jemur 6 jam dgn eluen 20 asetonitril - 80 MeOH, panjang gel 260 nm
1.223
Voltage
600
400
0.793
2.777
200
0
0
2
4
6
Time
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
8
10
[min.]
Hasil dan
Pembahasan
Kurva Kalibrasi Standar
Kurva Kalibrasi Standar Kafein (1)
Kurva Kalibrasi Standar Kafein (2)
12000
100000
90000
10000
80000
Luas Area (mV.s)
8000
6000
y = 108.22x + 101.55
R² = 0.9954
4000
Luas Area (mV.s)
70000
y = 88.832x + 5578.8
R² = 0.9897
60000
50000
40000
30000
20000
10000
2000
0
0
0
0
20
40
60
[Kafein] ppm
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
80
100
120
200
400
600
800
[Kafein] ppm
1000
1200
Kadar kafein dengan Eluen
Metanol : Air (70 : 30)
Hasil dan
Pembahasan
% Massa
Konsentrasi Massa sampel Massa kafein
kafein dalam
kafein (2)
awal(gr)
(mg)
sampel
Sampel Ateng Super
Luas Area
Konsentrasi
kafein (1)
Kulit kopi ekstraksi 6 jam
17086.158
156.974658
13.2045
31.3949
0.2378
Kulit kopi ekstraksi 9 jam
18781.158
172.6400924
11.1017
34.5280
0.3110
Biji kopi matang ekstraksi 6 jam
47128.763
467.7560
10.2315
93.5512
0.9143
Biji kopi matang ekstraksi 9 jam
51420.858
516.0741
10.3572
103.2148
0.9966
Biji kopi matang ekstraksi 12 jam
58294.875
593.4580
10.202
118.6916
1.1634
Biji kopi mentah ekstraksi 6 jam
37910.668
363.9837
6.0535
72.7967
1.2026
Biji kopi mentah ekstraksi 9 jam
39525.141
382.1585
5.6658
76.4317
1.3490
Biji kopi mentah ekstraksi 12 jam
33701.087
316.5945
4.3601
63.3189
1.4522
Biji kopi jemur ekstraksi 6 jam
6023.314
5.0131
8.0236
10.9461
0.1364
Biji kopi jemur ekstraksi 9 jam
17820.461
137.8190
8.059
27.5638
0.3420
Biji kopi jemur ekstraksi 12 jam
52711.673
530.6053
8.0906
106.1211
1.3117
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
54.73025878
Hasil dan
Pembahasan
Faktor kapasitas (K’)
Eluen 70Metanol : 30 Air
Sampel Ateng Super
t0
t retensi
Faktor kapasitas (K)
Kulit kopi ekstraksi 6 jam
0.6
3.517
0.829400057
Kulit kopi ekstraksi 9 jam
0.61
3.557
0.828507169
Biji kopi matang ekstraksi 6 jam
0.65
3.607
0.819794843
Biji kopi matang ekstraksi 9 jam
0.64
3.557
0.820073095
Biji kopi matang ekstraksi 12 jam
0.69
3.587
0.807638695
Biji kopi mentah ekstraksi 6 jam
0.65
3.57
0.817927171
Biji kopi mentah ekstraksi 9 jam
0.64
3.58
0.82122905
Biji kopi mentah ekstraksi 12 jam
0.62
3.54
0.824858757
Biji kopi jemur ekstraksi 6 jam
0.45
3.67
0.877384196
Biji kopi jemur ekstraksi 9 jam
0.46
3.637
0.873522134
Biji kopi jemur ekstraksi 12 jam
0.63
3.47
0.818443804
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Hasil dan
Pembahasan
Faktor kapasitas (K’)
Eluen 80 Metanol : 20 asetonitril
Sampel Ateng Super
t0
t retensi
Faktor kapasitas (K)
Kulit kopi ekstraksi 6 jam
0.12
2.027
0.940799211
Kulit kopi ekstraksi 9 jam
0.12
2.023
0.940682155
Biji kopi matang ekstraksi 6 jam
0.13
2.02
0.935643564
Biji kopi matang ekstraksi 9 jam
0.12
2.027
0.940799211
Biji kopi matang ekstraksi 12 jam
0.13
2.023
0.935739001
Biji kopi mentah ekstraksi 6 jam
0.18
2.787
0.935414424
Biji kopi mentah ekstraksi 9 jam
Biji kopi mentah ekstraksi 12 jam
Biji kopi jemur ekstraksi 6 jam
0.12
0.11
2.013
2.023
0.940387481
0.945625309
0.11
2.01
0.945273632
Biji kopi jemur ekstraksi 9 jam
0.12
2.023
0.940682155
Biji kopi jemur ekstraksi 12 jam
0.11
1.993
0.944806824
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Kesimpulan
Panjang gelombang maksimum yang diperoleh untuk asam
klorogenat, asam askorbat dan kafein dengan
spektrofotometri UV/Vis adalah 325 nm, 268 nm, dan 272
nm.
Pemisahan yang paling baik untuk kafein adalah dengan eluen
methanol : asetonitril (80 : 20). Waktu retensi kafein dengan
eluen tersebut adalah 2.8 menit.
Asam askorbat dan asam klorogenat tidak ditemukan
pemisahan yang baik pada kedua variasi eluen tersebut.
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Daftar Pustaka
 Fujioka.K, T. Shibamoto. Chlorogenic Acid and Caffine Contents inVarious




Commercial Brewed Coffees. Food Chemistry. ScienceDirect. 2008
Harvey, david. 2000. Modern Analytical Chemistry. 1 st ed. Singapore. Page
212
Duarte, Giselle S, Antonio A. Pereire, Adriana Farah. Chlorogenic Acids
and Other Relevnt Compounds in Brazilizn Coffees Processed by Semi-Dry and
Wet Post-Harvestung Methods. Food Chemistry. ScienceDirect.2009.
H.-D. Belitz · W. Grosch · P. Schieberle. Coffee,Tea, Cocoa. Food
Chemistry. Springer 2009
Maria, De. L. C. Trugo,* R. F. A. Moreira. SimuItaneous determination of
total chlorogenic acid, trigonelline and caffeine in green coffee samples by high
performance gel filtration chromatography. Analytical Nutritional md
Comical Methoda Sectton. Food Chemlet5ry2 (1995) 447 – 449
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010
Terima Kasih
Seminar Tugas Akhir, 27 Mei 2010