Transcript Den histotekniska processen

Den histotekniska processen
Bild från Helander KG. Från patient till mikroskop.
FoU rapport 24. Lund: Studentlitteratur, 1987
Morfologisk cellbiologi, 6 hp, vt 2014
Biomedicinska analytikerprogrammet, inriktning
laboratoriemedicin
Cecilia Ottosson
Kapitel 1-5 i Cellular Pathology
Den histotekniska processen
• Mål: framställa preparat för mikroskopisk undersökning
• Prov: biopsier, px
kirurgisk utskärning
obduktioner
• PAD - patologisk-anatomisk diagnostik
• Krav: god morfologi
hög specificitet
snabbhet
Fixering
• Förhindra autolys
• Förhindra bakteriell påverkan
• Stabilisera vävnaden – skall inte ändra storlek eller form
• Vävnaden skall kunna färgas
• Vävnaden skall vara så likt det levande stadiet som möjligt
• Vara ofarlig, lätthanterlig, prisvärd
Fixering
• Fysikalisk fixering
• Kemisk fixering
• Tid
• Immersionsfixering
• Perfusionsfixering
Fixering
• Formaldehyd
- rutin
Fixering
• Formaldehyd
- R - CH2 – R -
Fixering
• Glutaraldehyd
- elektronmikroskopi
- ej till – enzymhistokemi
immunohistokemi
vissa specialfärgningar
Fixering
• Kvicksilverklorid
• Osmiumtetroxid
• Ättiksyra
• Alkoholer
Fixering
• Sammansatta fixeringsmedel
- ex Zenkers fixeringsmedel
- kvicksilverklorid (fixerar cytoplasman krymper vävnaden)
- ättiksyra (orsakar svällning)
- kaliumdikromat (oxidationsmedel – fixerar fetter)
Fixering
• Faktorer som påverkar fixeringen
- pH
- temperatur
- volym
- vävnadens storlek och täthet (densitet)
Utskärning
• Makroskopisk bedömning
• Utskärning
• Radikalitet - restriktionssnitt
Dehydrering och klarning
• Dehydrering
• Klarning
Inbäddning
• Paraffin
• Orientering
Bilder från Prophet E. Laboratory Methods in Histotechnology. Washington: American Registry of Pathology, 1992
Snittning
• Mikrotomer
• Knivar
• Vinkel
• 3–5 m
Snittning
• Problem vid snittning
Bilder från Prophet E. Laboratory Methods in Histotechnology. Washington: American Registry of Pathology, 1992
Färgning
• Avparaffinering och rehydrering
• Kärnfärgning
• Kontrastfärgning
• Dehydrering och montering
• Översiktsfärgning
• Specialfärgning
Artefakter
• Fixeringsartefakter
• Förlust av material
• Tillförsel av material
• Mekaniska artefakter
Urkalkning
•
Hydroxyapatit
•
Syror
•
Kelatbildare
•
Faktorer som påverkar
•
När är urkalkningen färdig?
Plastinbäddning
• Hårt material
• Tunna snitt
• Elektronmikroskopi
• Akrylplaster
• Epoxyplaster
Fryssnittning
• Snabba svar (15-30 min)
• Material som förstörs
• Is –inbäddningsmedel
• Snabb nedfrysning
• Kryostat (ca -20°C)
• Fixering efter snittning vid snabba svar!
Storsnittning
• ”Stora” preparat