Specialfärgningar

Cecilia Ottosson Laboratoriemetodik, grundläggande vt14 Biomedicinska analytikerprogrammet, inr laboratoriemedicin

• Cellular pathology - kap 7, 8, 9 och 14 - repetition kap 6

Litteratur

Specialfärgningar

• Komplement till H&E - påvisa närvaro/frånvaro av en viss typ av molekyler - var på vävnaden är de lokaliserade?

- färgningar/histokemiska färgningar • Histokemi (vävnadskemi) - lokalisering av olika ämnen i cellerna - synligt i mikroskopet - olöslig produkt - känsliga metoder - detektion på plats

• Positiv kontroll - test av metoden - bakgrund - så likt det som ska studeras - simultant med provet • Negativ kontroll

Kontroller

Färgning av bindväv

• Kollagen och muskel -Trikromfärgning regel: en mindre molekyl kommer att penetrera och färga in vävnaden, men när en större molekyl kan penetrera samma vävnad kommer den att ersätta den mindre molekylen • Retikelfibrer - Silverimpregnering - Argyrofil reaktion

Masson trikrom

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Järnhematoxylin 3. Ponceau Syrefuchsinlösning 4. Phosphomolybdic/ phosphotungstic syra 5. Anilinblå/Light green 6. Dehydrering och montering Kärnor Muskel, röda blodkroppar Kollagen svarta röda blå/grön

Van Gieson

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Weigerts hematoxylin 3. Van Gieson (pikrinsyra och syrefuchsin) 4. Dehydrering och montering Kärnor Muskel, röda blodkroppar Kollagen svarta gula röd

Gordon and Sweets

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Syrahaltig kaliumpermanganat 3. Oxalsyra 4. Järnalun 5. Silverlösning 6. Formaldehyd 7. Guldklorid 8. Natriumtiosulfat 9. Dehydrering och montering Retikelfibrer svart

Färgning av kolhydrater

• Påvisandet av polysackarider - ex glykogen

Färgning av kolhydrater

• PAS (Periodic Acid Schiff) - perjodsyra – klyvning av kol-kol bindningen  aldehyder - Schiffs reagens

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Perjodsyra 3. Schiffs reagens 4. Harris hematoxylin 5. Dehydrering och montering

PAS

PAS-positiv material Kärnor magenta blålila

Färgning av kolhydrater

• AB (Alcian Blue) - sura mukoplysackarider - katjon färg → binder till negativt laddade grupper - differentiering: pH 1 el pH 2,5 • AB-PAS (PAS-AB) - differentiering mellan neutrala och sura mukopolysackarider - sura mukopolysackarider – AB- färgning - neutrala mukopolysackarider – PAS-färgning - AB före PAS • PAS-Diastas - differentiering mellan glykogen och andra mukosubstanser - diastas (α-amylas) bryter ner glykogenet till glukos

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Alcian blå-lösning med önskat pH 3. Neutral rött 4. Dehydrering och montering

AB

Sura muciner Kärnor blåa röda

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Alcian blå 3. Perjodsyra 4. Schiffs reagens 5. Harris hematoxylin 6. Dehydrering och montering

AB-PAS

Sura muciner Neutrala muciner Blandning Kärnor blåa röda lila blålila

PAS-Diastas

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Ett snitt i diastaslösning, ett snitt i avjoniserat vatten 3. Perjodsyra 4. Schiffs reagens 5. Harris hematoxylin 6. Dehydrering och montering Glykogen Kärnor magenta i det obehandlade snittet, saknas i det behandlade snittet blålila

Färgning av fettceller

• Fryssnittning • Lysokrom-metod - hydrofoba färger – löslig i fettcellerna • Neutrala lipider – flytande/halvfast form vid RT • Kolesterol – kristalliserad vid RT  (150° C) färgning vid smältpunkten • Fosfolipider – fosfatgrupp, görs mer hydrofila, ej med lysokrommetoder

• • Neutrala lipider Hydrofobisk färg 1. Oil Red O 2. Harris Hematoxylin 3. Montering med vattenbaserad monteringsmedel

Oil Red O

Fettceller Kärnor röda blålila

Sudan Black

• • Kolesterol och fosfolipider basisk färg 1. Bromlösning 2. Natrium metabisulfit 3. 70 % Etanol 4. Sudan Black 5. 70 % Etanol 6. Carmalum 7. Montering med vattenbaserad monteringsmedel Neutrala lipider, fosfolipider och kolesterol Kärnor blå-svarta röda

Färgning av enzymer

• Fryssnitt/utstryk • Enzymer - hydrolaser - oxireduktaser • Substrat  primär reaktionsprodukt (PRP) • PRP + kemiskt ämne  slutlig reaktionsprodukt (SRP) • SRP – olöslig (precipitat)

Färgning av enzymer

• Hydrolaser – fosfataser - Gomoris sura fosfataser - Metallprecipitering - substrat: natrium  -glycerolfosfat - PRP: natriumfosfat - SRP: natriumfosfat + bly eller kalcium visualisering med vätesulfid – svart fällning • Oxireduktaser - peroxidaser - substrat: H 2 O 2 - PRP: O 2 - SRP: O 2 + kromogen (ex DAB) färgomslag (brun om DAB)

Färgning av pigmenter

•

Artefaktspigmenter

•

Exogena pigmenter

•

Endogena pigmenter

Perls reaktion

• Hemosiderrin (järn) 1. Avparaffinering och rehydrering 2. HCl/Kaliumferrocyanid 3. Neutral Red 4. Dehydrering och montering Hemosiderrin Kärnor blå röda

Masson-Fontana

• • Melanin, argentaffina granula Argentaffin reaktion 1. Avparaffinering och rehydrering 2. Silverlösning 3. Natriumtiosulfat 4. Neutral Red 5. Dehydrering och montering Melanin Kärnor svart röda

Färgning av mikroorganismer

• Formaldehydfixerad material • Bakterier • Svamp • Virus • Parasiter

Gramfärgning

• • Bakterier Cellväggens tjocklek 1. Avparaffinering och rehydrering 2. Kristallviolett 3. Jodlösning 4. Aceton 5. Neutral Red 6. Dehydrering och montering Grampositiva Gramnegativa blåa röda

Ziehl-Neelsen

• • Syra-fasta organismer (tuberkulosbakterien) Fettrik cellvägg 1. Avparaffinering och rehydrering 2. Karbolfuchsin 3. HCl-alkohol 4. Metylenblått 5. Dehydrering och montering Syra-fasta organismer röda Bakgrund blå

Grocott

• • Svamp Argentaffin reaktion 1. Avparaffinering och rehydrering 2. Kromsyra 3. Natriumbisulfit 4. Metenamin silverlösning 5. Guldklorid 6. Natriumtiosulfat 7. Light green 8. Dehydrering och montering Svamp Bakgrund svart grön

• •

Helicobacter pylori

Romanowsky 1. Avparaffinering och rehydrering 2. S-Giemsa 3. Dehydrering och montering

S-Giemsa

Helicobacter pylori

blåa

Färgning av Amyloid

• Onormal protein • Många former - olika metoder - jod/svavelsyra - metylviolett - Kongo rött

1. Avparaffinering och rehydrering 2. Harris hematoxylin 3. Kongo rött 4. Dehydrering och montering

Kongo rött

Amyloid i polarisationsmikroskop Kärnor rosa-rött äppel grön blålila