Transcript 蛋白质

DNA的粗提取与鉴定
基础知识
提取DNA的方法
1、提取生物大分子的基本思路
选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理
或化学性质的生物大分子
2、生物大分子
主要指蛋白质和核酸
3、提取DNA的基本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性
质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
DNA提取原理
资料一：1 . DNA在不
同浓度NaCl溶液中溶
解度不同
(蛋白质在0.14mol/L中的
溶解度大，在高盐浓度
下溶解度小)
• 2.DNA不溶于酒精，细胞中某些蛋
白质则溶于酒精。
• 资料二:
洗涤剂瓦解细胞膜。动物细胞吸水会
胀破。
• 资料三
1.酶的专一性——蛋白酶水解蛋白质
而不会对DNA产生影响 。
2.蛋白质、DNA热稳定性不同。温度
值为60～80℃，因为该温度值蛋白
质变性沉淀，而DNA不会变性。
资料四:DNA的鉴定原理
• 当鉴定提取出的物质是否是DNA
时，需要使用什么指示剂进行鉴定？
在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现
蓝色。
DNA的鉴定操作步骤
A、B试管中先分别加入物质的量的浓度为2mol/L
的NaCl溶液5ml。
其中A试管加入DNA丝状物，B不加丝状物。
各加入二苯胺4ml 试剂。
沸水中加热5min。
待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化。
实验设计
• 据资料二思考:如何使DNA从细胞里释放出
来得到含有DNA的滤液?
• 利用什么原理可以使动物细胞或植物细胞
破裂?
植物细胞可以加入一定量的食盐和洗涤剂。
动物细胞吸水会胀破。这样能得到含
有DNA的滤液。
食盐和洗涤剂的用途分别是什么?
食盐溶解DNA,洗涤剂溶解细胞膜
实验设计
• 根据资料提供的DNA理化性质，你
能思考提取DNA的基本方法吗？
例：根据蛋白质、DNA热稳定性不
同。温度值为60～80℃，因为该温
度值蛋白质变性沉淀，而DNA不会
变性
• 方案一：
将滤液放在 60～67℃的恒温水浴箱中保温
10～15min，注意严格控制温度范围，使 蛋白质
沉淀而DNA 分子还未变性，可以将DNA与
蛋白质分离。
根据资料一思考
• 1.DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度有何特点？要
使DNA溶解，需要使用什么浓度？要使DNA析出，
又需要使用什么浓度？
在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度
可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析
出。
在溶解细胞中的DNA时，通常可
选用2mol/LNaCl溶液；将DNA分子析
出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中
缓慢注入蒸馏水，以稀释NaCl溶液。
如何利用这一性质设计提取方案
• 方案二：通过控制 NaCl 的浓度去除蛋白质
30mL滤液＋2mol/NaCl40mL→同方向搅拌，
DNA溶解→加入蒸馏水
0.14mol/NaCl→DNA析出→过滤得到过滤
物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNANaCl溶解液
采用DNA不溶于酒精的原理，可以达
到什么目的？
将DNA和蛋白质进一步分离。
• 方案三：
直接向滤液中加入 嫩肉粉（木瓜蛋白酶）
，
反应10～15min，嫩肉粉 中的 蛋白酶
能够分解蛋白质。
此方案利用了酶的什么特性？
专一性
交流
•
•
•
•
1.动物组织和植物在提取方法上有什么不同?
为什么?
2、用同样的方法提取时,哪种材料较好?
3、用同种材料同样方法时洗涤剂与NaCl比
例不同，有没有影响？
• 4．用玻璃烧杯和塑料烧杯哪种效果好？
• 5、你有什么疑惑吗？或者有更好的建议？？
结果分析与评价
1、你提取出了白色丝状物吗？用二苯胺鉴定的结果
如何？
2如果鉴定结果不出现蓝色,讨论可能是什么原因.
3、你能分析出粗提取的DNA可能含有哪些杂质吗？
4.哪些因素会影响实验效果?
• 从核DNA数目来看，猪38条，鸡78条，哺
乳动物血0条，猕猴桃58条，洋葱16条，香
蕉 33条，菠菜12条，大肠杆菌1条。你能
分析你的实验结果吗？
1.在DNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯
中加入蒸馏水的作用是( )。
A.稀释血液、冲洗样品
B.使血细胞破裂、降低NaCl浓度使DNA析出
C.使血细胞破裂、增大DNA溶解量
D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNA
答：B
2.实验中NaCl的物质的量浓度为2 mol／L和
0.14 mol／L对DNA有何影响?
答：前者是溶解DNA，后者是使DNA析出
3.DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成(
)
A.砖红色 B.橘黄色 C.紫色 D.蓝色
答：D
4.提取鸡血中的DNA时，为什么要除去血液
中的上清液?
答：DNA的提取，关键是对杂质的去除，由于
上清液是血液中的血浆部分，不含DNA，所以
要除去上清液(含有蛋白质)。