Transcript Resultados de purificación de Proteínas

Septiembre, 2010
Resultados de purificación
de Proteínas (LDH)
a)
b)
c)
d)
Curva estándar
Interpolar valor de peso molecular LDH
Geles de poliacrilamida de cada equipo
Identificar la banda de interés en el gel de su equipo
Instrucciones
 Hacer curva de calibración con los
estándares de peso molecular que se
proporcionan en la siguiente transparencia,
 Calcular los Rfs,
Rf =distancia recorrida de la proteína de interés
distancia total recorrida por el colorante
 Realizar el gráfico del log del peso molecular
vs Rf
PESOS MOLECULARES ESTÁNDAR
Proteínas
KDa
Miosina
250
Fosforilasa B
148
BSA
98
Glutámico DH
64
Alcohol DH
50
Anhidrasa
carbónica
36
Mioglobina
22
Lisozima
16
Aprotinina
6
Cadena B de
insulina
4
Estás proteínas se salen
del gel, ya que migran
más rápido que el
colorante que el azul de
bromofenol, colorante que
usamos de indicador de la
corrida de las proteínas
Curva std de proteínas
Para encontrar en
donde está la banda
de interés se hace
una curva estándar.
2. interpolar el log del
peso molecular y
conocer en que
posición o Rf debe
estar la proteína
1.
Equipos 1 a 4
Equipo 1
Equipo 3
Equipo 2
Equipo 4
Equipos 5 y 7
Equipo 5
Equipo 7
Excelente gel del equipo 6. El gel que
corrieron hoy
Comentarios
 Le falto correrse
pero quedo
precioso, supongo
que las fracciones
menos puras son
las que tienen
bandas de peso
molecular más
alto.
 ¿Qué resina
usaron para la
purificación? Fue
intecambio iónico?
Std
FPA FPB F4 F3
F2
F1
F0
Mi gel
COMENTARIOS:
 Yo use otros estándares
de peso molecular
 Como ven al pasar de
la F2 a la 3 se pierden
proteínas de alto peso
molecular
 Y al pasar al intercambio
iónico perdemos una
banda gorda arriba de
37,
 Mientras que en afinidad
se purifica una banda
preferencial a los 37
kDa de peso molecular
Stds usados en el gel del equipo 6 y el
mío
Reporte


A)
B)
C)
D)
Recuerden que la entrega del reporte será hasta
pasando el puente del 15 y 16 de septiembre.
Y llevará en los resultados:
La concentración de proteína en cada una de las
fracciones obtenidas de la purificación,
El gel de las fracciones (pueden usar otro gel para
comparar lo que ustedes obtuvieron con lo que se
debería de ver),
La curva patrón del estándar del gel con la
predicción de la localización de la proteína y
la actividad total de cada fracción o de las que
alcancemos a medir