Transcript 红细胞比容

实验二 红细胞比容测定
红细胞脆性的测定
血红蛋白测定
一、红细胞比容测定
目的 掌握红细胞比容的测定方法。
原理 将定量的抗凝血灌注于带刻度玻璃管中，定时、定速
离心后,有形成分和血浆分离，上层呈淡黄色的液体是血
浆，中间很薄一层为灰白色，即白细胞和血小板（或栓细
胞），下层为暗红色的红细胞，彼此压紧而不改变细胞的
正常形态。根据红细胞柱及全血高度，可计算出红细胞在
全血中的容积比值，即为红细胞比容（压积） 。
离心后血液分层
layer after blood centrifugated
方法与步骤
温氏分血管比容法
• 用带有长注针头的注射器，取抗凝血将其插入分
血管的底部，缓慢放入，边放边抽出注射针头，
使血液精确到10 cm刻度处。
• 离心：将分血管以3000 r/min离心30 min，取出
分血管，读取红细胞柱的高度，再以同样的转速
离心5 min，再读取红细胞柱的高度，如果记录
相同，该读数的10倍即为红细胞比容（容积百分
比）。
[注意事项]
• 选择抗凝剂必须考虑到不能使红细胞变形、
溶解。本实验采用柠檬酸钠抗凝。
• 血液与抗凝剂混合、注血时应避免动作剧
烈引起红细胞破裂。
• 温氏分血管内壁要充分干燥。血液进入毛
细管内的刻度读数要精确，血柱中不得有
气泡。
三、血红蛋白的测定
• 目的
掌握用比色法测定动物的血红蛋白的含量。
• 原理 血红蛋白的颜色常与氧的结合量多少有关。
但当用一定的氧化剂将其氧化时，可使其转变为
稳定、棕色的高铁血红蛋白，而且颜色与血红蛋
白（或高铁血红蛋白）的浓度成正比。可与标准
色进行对比，求出血红蛋白的浓度，即每升血液
中含血红蛋白克数（g·L-1）。
方法与步骤
沙里氏血红蛋白计测定
•
沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁
血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。
•
沙里血红蛋白计 主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方
形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧
为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含
血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白
相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，
从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此
一般采用绝对值来表示。
具体测定方法如下：
①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度
管内,(约加到管下方刻度”2”或10%处)。
②用微量采血管吸血至20μl，仔细揩去吸管外
的血液。
③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，
再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以
免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐
酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血
红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。
④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。
⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光
和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，
并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进
行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色
一致为止。
⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中
所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽
出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液
凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血
液中含血红蛋白克数（g·L-1）。
【注意事项】
•
血液要准确吸取20 μl，若有气泡或
血液被吸入采血管的乳胶头中都应将
吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法
是：先用清水将血迹洗去，然后再依
次吸取蒸馏水、95%酒精洗涤采血管
1～2次，使采血管内干净、干燥。