Transcript 实验酪蛋白的制备

实验 酪蛋白的制备
生物药学
目的
• 1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。
• 2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。
原理
• 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约
为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合
物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最
低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白
就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂
类杂质后便可得到纯酪蛋白。
材料、试剂与器具
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（一）材料
新鲜牛奶
（一）试剂
1、95%乙醇
1 200mL
2、无水乙醚
1 200mL
3、0.2mol/L pH4.7醋酸——醋酸钠缓冲液
300ml
先配A液与B液
A液：0.2mol/L醋酸钠溶液 称NaAC·3H2O 54.44g，定容至2000ml。
B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优 纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至
1000ml。
取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。
4、乙醇——乙醚混合液
乙醇：乙醚=1 ：1（V/V）
（二）器具
1、离心机
2、抽滤装置
3、精密pH试纸或酸度计
4、 电炉
5、烧杯
6、温度计
操作步骤
• （一）酪蛋白的粗提
• 100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、
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pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。
将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000 r /min）。弃
去清液，得酪蛋白粗制品。
（二）酪蛋白的纯化
1、用水洗涤沉淀 3次，离心10分钟（3 000r/min），弃去上
清液。
2、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移
至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用
乙醚洗沉淀2次，抽干。
3、将沉淀摊开在表面 上，风干；得酪蛋白纯品。
（三）准确称重，计算含量和得率。
含量：酪蛋白g/100 mL牛乳（g%）
式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。
注意事项
• 1、由于本法是应用等电点沉淀法来制备蛋白质，
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故调节牛奶液的等电点一定要准确。最好用酸度
计测定。
2、精制过程用乙醚是挥发性、有毒的有机溶剂，
最好在通风橱内操作。
3、目前市面上出售的牛奶是经加工的奶制品，不
是纯净牛奶，所以计算时应按产品的相应指标计
算。
实验报告
• 1、根据实际操作，以流程图形式总结酪蛋
的制备方法。
• 2、合理分析实验所得率
思考题
• 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？
• 2、试设计另一种提取酪蛋白的方法？