Transcript Regenerace a organogeneze

Možnosti regenerace in vitro
– zdroje explantátů
• Gamety (androgeneze, gynogeneze)
• Embrya (embryokultury x embryogeneze)
• Semena
– (kalusové kultury z endospermu nebo megagametofytu)
– Embryogeneze na zygotických embryích
• Klíční rostliny (dělohy, hypokotyl, listy, kořeny)
• Meristémy (apikální, axilární)
• Diferencované orgány dospělých rostlin (listy,
kořeny, lodyhy – nody)
postup regenerace in vitro
orgánové kultury
Společné pro in vitro kultury
• 1/ izolace explantátu (primární kultura)
• 2/ proliferace, multiplikace (pasážování)
• 3/ rhizogeneze
• 4/ aklimace
EXPLANTÁTY Z KLÍČNÍ ROSTLINY
epikotyl
děloha
hypokotyl
Kmín (Krens,2003)
Organogeneze
KALUS
přímá
nepřímá
Kalus - dediferencované pletivo
• ránový obrana organismu
• neorganogenní (neembryogenní)
produkce metabolitů, studium
• organogenní
(prýtykořeny) selekce, mikropropagace
• embryogenní
(somatické embryo SE rostlinka) selekce,
mikropropagace (nebezpečí vzniku chimér)
Kalus regenerovaný na
hypokotylu hrachu
Přímá organogeneze - (nižší riziko mutací) :
• rychlé namnožení nových odrůd
(podstatné zvýšení množitelského koeficientu,
urychlení šlechtitelského procesu) (brambory
klasicky 1: 5 -10, mikropropagace 1: 500000)
• vzdálená křížení
• šlechtitelsky cenné mutace
• množení těžko množitelných kultur (rododendrony
apod.), cenných jedinců, vzácných druhů
Přímá organogeneze
Adventivní meristémy diferenciují na listech, lodyhách
nebo částech květu
Kmín (Krens,2003)
Nepřímá organogeneze - využití:
selekce
• využití přirozené somaklonální variability
• selekční tlak
• mutageneze
• (transgenoze)
Organogeneze Ch. rubrum
(Flores, 2004)
Nepřímá organogeneze na
segmentech hypokotylu
cukrové řepy (Jacq et al,
1992)
1/ indukce kalusu (a,c, d)
2/ regenerace prýtů (e)
AUX:CK
3) zakořenění (f)
bez RR nebo s IBA
4) aklimace (g)
Jak můžeme ovlivnit
způsob regenerace
CK: AUX
v indukci procesů
diferenciace a dediferenciace
koncentrace cytokininu
auxinu
tvorba kořenů na řízcích
tvorba buněčné suspenze
somatická embryogeneze
iniciace tvorby kalusu
indukce adventivních pupenů
proliferace prýtů
Způsoby hodnocení a
dokumentace kultur
*
V určitém časovém
odstupu (pasáž)
• Počet kontaminovaných/
rostoucích/nerostoucích kultur (1. Týden)
• Měření přírůstku prýtů, kořenů, kalusu (*)
• vážení - nárůst hmotnosti (*)
• počítání regenerovaných prýtů (koeficient
množení), buněk (*)
• hodnocení životnosti (*)
• mitotický index (*)
A to je pro dnešek konec teorie
Máte k tomu nějaké dotazy?