Transcript Inoculación de fitopatógenos
Inoculación de fitopatógenos Curso: Diagnóstico de enfermedades vegetales.
Ing. Agr. Vivienne Gepp, MSc.
6 de mayo de 2011
Objetivos • Conocer las principales técnicas que se usan para inocular hongos, bacterias, virus y nematodos fitopatógenos.
Esquema de la clase
PARTE TEÓRICA
• Inóculo, calidad y cuantificación.
• Métodos de inoculación de hongos, bacterias, virus y nematodos en hojas, raíces, tallo, frutos.
PARTE PRÁCTICA
• Inoculación
LUEGO DE LA CLASE
• Observación, análisis e informe de resultados
Inóculo • Hongos: – – – trozos de micelio esporas esclerotos • Bacterias: – unidades formadoras de colonias (UFC) • Virus: – partículas en macerado, buffer, etc.
• Nematodo s: – larvas, huevos, quistes
Calidad del inóculo • Viable – en activo crecimiento (micelio, bacterias), esporas capaces de germinar • Homogéneo: – siembra de hongo en centro de placa vs. suspensión de esporas • “Acostumbramiento a crecer en medio de cultivo” – pérdida de patogenicidad (Ralstonia) o de producción de esporas (Septoria, Cercospora)
Cuantificación del inóculo • Hematocitómetro • Turbidez • Unidades formadoras de colonias
Cuantificación del inóculo en hematocitómetro Rayado Neubauer: • 2 porciones c/u con 9 cuadrados principales de 0,1 mm 3 • divididos en 16 cuadrados menores de 0,05 mm 3
Cuantificación de inóculo • Turbidez - bacterias – Escala de McFarland: BaCl 2 + H 2 SO 4 – Densidad óptica: colorímetro o espectrofotómetro a 450 – 650 mµ
Cuantificación de inóculo • Recuento de colonias unidades formadoras de colonias (UFC)
Inoculación al follaje • Penetración por estomas o epidermis - mayoría penetra en 24 hs. en condiciones adecuadas de humedad y 20 24ºC • Métodos: 1.
• • • • pulverización: 0,5% Tween o 0,1% jabón cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.
Métodos de inoculación al follaje 1.
pulverización: • 0,5% Tween o 0,1% jabón • cereales: 1º frotar hoja con dedos mojados para que se mojen mejor • 0,5% gelatina o 0,1-0,2% agar – adhiere esporas y mantiene humedad • aceite dispersa esporas, mantiene humedad. Oidios pierden infectividad.
Métodos de inoculación al follaje 2. espolvoreo con talco • royas: humedecer hojas 1º (aspersión) • oidios – seco 3. rozar o colocar hojas esporuladas sobre sanas (previamente rociadas) 4.
inmersión en suspensión de inóculo
Métodos de inoculación al follaje 4.
infiltración 5. colocar trozo de micelio
Métodos de inoculación al follaje
Inoculación de virus
Plantas indicadoras • Tabaco, pepino,
Chenopodium quinoa
, etc.
– Sin síntomas – Lesiones locales – Síntomas sistémicos
Plantas indicadoras
Transmisión mecánica 1. Macerado de planta enferma 2. Abrasivo (carborundum) 3. Planta sana = Transmisión “por jugos”
Transmisión por pulgones
Transmisión por propagación vegetativa • tubérculos, bulbos, estacas, etc.
• injerto An overview of the paintings of Christina Brodie http://www.microscopy uk.org.uk/mag/indexmag.html?http://www.microscopy uk.org.uk/mag/artnov05/cbpaint.html
Inoculación al suelo o raíces • efecto del suelo: microflora conducente o supresivo reducir variación sin suelo • humedad muy alta para Pitáceas, • + síntomas a > temp. hasta 28ºC en gral.
• Métodos: – infestación de suelo – hidroponia – “cut and dip” – inoculación sin herir raíces (tubos en suelo)
Inoculación al tallo o rama • Generalmente con heridas • Corte longitudinal – inocular inmediatamente – cubrir para evitar deshidratación. (gel, algodón mojado) • Patógenos vasculares
Inoculación al tallo o rama • Patógenos vasculares: – axila - pinchar a través de gota o con aguja o escarbadiente contaminado.
– inyección al tallo – evita stress de transplante
Inoculación en órganos carnosos • Pinchazo • Sacabocado • Corte
Condiciones ambientales Antes de inocular: • Patógenos que penetran por estomas • Patógenos que penetran por heridas • Virus
Condiciones ambientales Post inoculación: • Humedad para bacterias y hongos – factor más importante • Virus
BIBLIOGRAFÍA
• DHINGRA, O.D.; SINCLAIR, J.B. 1985. Basic plant pathology methods. • FRENCH, E.R. y HERBERT, T. 1980. Métodos de investigación fitopatológica. • KIRÁLY, Z. 1970. Methods in plants pathology with special reference to breeding for disease resistance. • LELLIOTT, R.A.; STEAD, D.E. 1987. Methods for the diagnosis of bacterial diseases of plants. • THE COMMONWEALTH MYCOLOGICAL INSTITUTE. 1968. Plant pathologist's pocketbook.