琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制
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Transcript 琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制
甲氨蝶呤是抗肿瘤常用药物之一,作为一种叶酸还原酶抑制
剂,抑制叶酸还原成四氢叶酸,导致DNA无法复制,从而
在源头上阻止了癌细胞的分裂、增长,达到治疗癌症的作用。
这样的药物的作用机理是什么?
一、目的
1.掌握竞争性抑制的概念、作用机制及特点。
2. 验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制
作用。
二、原理
酶的催化作用与其结构有关,活性中心
内的结合基团先结合底物,催化基团再进行
反应.
如果有物质与底物局部结构相似,也可
被结合基团识别结合, 与底物形成竞争性抑
制作用,这是一种可逆性抑制作用。抑制程
度随抑制剂浓度的改变而改变.
琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延
胡索酸,脱下的氢被受氢体接受。本实验
用亚甲蓝(MB)作为受氢体,亚甲蓝接受
琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯
白(MBH2)。
COOH
CH2
CH2
COOH
+
MB
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COOH
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CH
CH
+
MBH
2
COOH
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丙二酸与琥珀酸分子结构相似,能竞争性
抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色
消退的程度,可以判断丙二酸对琥珀酸脱
氢酶的抑制程度。
本实验采用可逆性抑制剂(丙二酸),
通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组
成的反应体系中使等量甲烯蓝退色反应程度,
从而鉴定丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用。
* 竞争性抑制的特点
(1) I与S结构类似,竞争酶的活性中心
(2) I与E的活性中心结合后,E分子失去催化活性
(3)抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力及
底物浓度;
(4) E既可以结合S也可以结合I,但是不能同时结合两者
当抑制剂浓度较低时
随着抑制剂浓度的增高
当抑制剂浓度高达一定程度
三、材料
1.组织匀浆机、恒温水浴箱。
2.试剂:
0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.4)
1.5% 琥珀酸钠溶液
1% 丙二酸钠溶液
0.02% 亚甲蓝溶液
液状石蜡
四、方法
1、肝匀浆的制备
新鲜猪肝立即剪碎,放于组织匀浆机中,加入
pH 7.4的0.10 mol/L磷酸盐缓冲液,制备成200
g/L的肝匀浆液备用
2、按表操作
配制琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制反应体系,
五、结果
1
2
3
4
5
6
六、思考题
1、简述可逆性抑制的分类及其特点?
2、本实验中液体石蜡起什么作用?
3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动?
4、制备肝匀浆时用磷酸盐缓冲液,可否换用蒸馏水,为什
么?
5、举例你所学过的以竞争性抑制为作用机制的临床药物,
阐述其发挥药效的生化机理。