Transcript ppt - Биокласс Московской гимназии на Юго–Западе №1543
Российский Кардиологический Научно-производственный Комплекс.
Институт экспериментальной кардиологии.
Московская гимназия на Юго-Западе № 1543.
Методы диагностики причин возникновения тромбоцитопении.
Даниил Халангот.
Научные руководители: Антонова Ольга Александровна Хаспекова Светлана Георгиевна Москва 2012
Что такое тромбоцитопения?
• • Тромбоцитопения - состояние, характеризующееся снижением количества тромбоцитов в крови ниже 150·109/л Причины возникновения: повышенное разрушение тромбоцитов, сниженная продукция тромбоцитов в костном мозге и повышенная секвестрация (неспецифическое задержание тромбоцитов в селезенке).
Виды тромбоцитопений
.
• • • • • • • •
Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура (ИТП) Неонатальная аллоиммунная ТП Неонатальная трансиммунная ТП Псевдотромбоцитопения.
Гаптеновые ТП Лекарственные ТП Тромбоцитопении, ассоциированные с вирусной инфекцией Рефрактерность к переливанию тромбоцитов
Гликокалицин
• Гликокалицин (ГК) представляет собой крупный (молекулярная масса 125 кД) внеклеточный протеолитический фрагмент одного из главных мембранных белков тромбоцитов — гликопротеина lb.
Задачи и цели.
1.
2.
3.
4.
5.
Освоить метод лабораторной диагностики, позволяющий определить концентрацию растворимого гликокалицина, как метода определения пролиферативной функции мегакариоцитов.
Освоить метод лабораторной диагностики, позволяющий определить уровень тромбоцитассоциированных антител.
Освоить метод лабораторной диагностики, позволяющий определить уровень аллоиммунных антител против антигенов на поверхности тромбоцитов.
Сравнить полученные результаты анализа крови пациентов с тромбоцитопенией разного генеза и у здоровых доноров.
Охарактеризовать практическое значение методов для современной клинической диагностики.
Материалы и методы.
• • • В работе были исследованы следующие методы: Радиоиммунный метод (РИА) для определения тромбоцит-ассоциированных антител (ТААТ).
Иммуноферметный анализ (ИФА) для определения сывороточных антител (сАТ) “Сэндвич” – ИФА для определения гликокалицина
“Сэндвич” ИФА для определиния гликокалицина
Определение ТААТ IgG с помощью прямого РИА.
Определение сывороточных антитромбоцитарных антител с помошью непрямого ИФА
• • • • 1. Прикрепление тромбоцитов отца/матери к пластику 2. Инкубация тромбоцитов отца/матери с исследуемой сывороткой 3. Добавление Рох-АТ 4. Добавление хромогенного субстрата.
Результаты.
• • • Был проведен «сэндвич» ИФА для определения концентрации гликокалицина, чтобы убедиться в иммунном генезе тромбоцитопении. РИА, чтобы выяснить количество ТААТ. ИФА на адсорбированных тромбоцитах для определения аллоиммунной тромбоцитопении.
8 9 10 № 1 2 3 4 5 6 7 Кол-во тромбоцитов (тыс/мкл) 488 282 16 150 2 70 277 0 41 180 ТААТ (в % от контроля/норма до 200%) Гликокалицин (Мкг/мкл) 140 1,9 180 400 1,6 2,4 300 340 320 3,0 0,6 1,4 120 1,3 280 430 180 1,2 1,4 1,5 Диагноз Здоров/контроль Здоров/контроль ИТП ИТП ЛПЗ Неонатальная аллоиммунная тп. (ребенок) Неонатальная аллоиммунная тп. (мать) Трансиммунная тп. (ребенок) Трансиммунная тп. (мать) Псевдотромбоцито пения.
Тестирование плазмы матери и отца методом ИФА на наличие антител к тромбоцитам
1.2
1.0
0.8
0.6
0.4
0.2
0.0
-0.2
0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125
Титр, шаг в два
0.25
0.5
1
мать отец контроль
2 4 Время после забора крови (ч) 0 ЭДТА WBC (тыс.) 9.81
10.2
11.1
Результаты пациента №10
Plt (тыс.) 180 140 120 MPV (у.е) 8.5
9.1
9.5
цитрат Na WBC (тыс.) 9.8
9.8
9.8
Plt (тыс.) 179 181 175 1 2 3 MPV (у.е) 8.7
8.6
8.6
4 цитрат Na ЭДТА 0ч ЭДТА 2ч ЭДТА 4ч
Выводы.
• Представленные в работе методы позволяют диагностировать пациентов без болезненного вмешательства, например, пункций костного мозга.
Сниженное концентрация гликокалицина в крови указывает на недостаточную пролиферацию тромбоцитов в костном мозге.
Повышенное количество ТААТ является признаком иммунного происхождения тромбоцитопении.
При неонатальной аллоиммунной ТП антитела матери действуют против тромбоцитов в плазме отца (которые идентичны тромбоцитам детей).
Измерения лучше всего проводить сразу после забора крови, чтобы избежать образования агрегатов в ЭДТА.
Благодарю:
• • • Ольгу Александровну Антонову и Светлану Георгиевну Хаспекову за активную помощь в проведении работы.
Парнеса Евгения Яковлевича за рецензию на данную работу.
Глаголева Сергея Менделевича за предоставленную возможность провести научную работу.