Transcript 酵母的培养与数量测定

酵母菌的培养与数量的测定
金陵中学
许 峰
一、酵母菌的培养
• 培养基：质量分数为5%的葡萄糖溶液
无菌马铃薯培养液或肉
汤培养液
无菌麦芽汁
培养基的营养要素应包括：碳源、氮源、
水、无机物等
无菌马铃薯培养液
• 材料：马铃薯（去皮）200g，葡萄糖20g，
1000 mL水。
• （1）配制：将去皮马铃薯，切成约2cm2的
小块，放入盛有1000 mL水的水浴锅（能盛
1000 mL水的锅即可，若用烧杯，应注意杯
底受热是否均匀）煮沸30min，注意用玻棒
搅拌以防糊底。30min后，用双层纱布过滤，
过滤时用玻棒引流，取其滤液加糖，再补
足水至1000 mL。
• （2）分装、包扎：将培养液趁热分装到洁
净的试管中，注意不要将培养液沾在试管口
和试管上段，以免引起污染。待分装完毕，
每支试管加塞后把试管扎成捆后，包一层牛
皮纸或双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉
塞。然后用记号笔注明培养基的名称、组别、
日期。取样、计数时所用的1mL刻度吸管和
滴管也分别包纸，以备灭菌。
• （3）灭菌：使用高压蒸汽灭菌锅灭菌。
121℃,100kPa
20min
接种与培养酵母菌
• 接种
菌种来源：保藏的菌种（固体或悬液）
干酵母+葡萄糖溶
液活化
注意无菌操作！
• 培养
恒温箱或恒温水浴锅（28℃），不定期
搅动培养液
二、酵母菌数量的测定
• 显微镜直接计数法：使用血球计数板等计
菌器进行酵母菌的计数。
优点：直观、快速、
操作简单。
缺点：所测得的结
果是死菌体与活菌
体的总和。
取样与滴加培养液
• 取样前需摇匀
• 向计数室添加样品向计数室加样品时，先
将计数室盖上盖玻片，用无菌细滴管沿盖
玻片边缘滴入少量菌液，菌液自行沿边缘
缝隙渗入计数室。计数室要充满菌液，不
能存有气泡。
稀 释
• 小方格内酵母菌数量过多，难以计数，就
要对菌液进行适当稀释后再计数。一般样
品稀释后适宜范围是少于 10 个菌体/每小
格。根据需稀释的倍数，精确算出应加入
的无菌水量，
• 如lmL 菌液欲稀释100 倍，则需向lmL 菌
液中加入99mL 无菌水，而不是加入100mL
无菌水。
计 数
对于压在小方格界线上的酵母菌应取相邻
两边及顶角计数。
染 色
•
美蓝是无毒性染料，碱性条件下，用
美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细
胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还
原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无
色的还原型，因此，具有还原能力的酵母
活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微
弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即
可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
• 如果将染液直接滴在血球计数板上，菌液浓度改
变，无法对实验结果精确计算。
• 正确的做法应是另外制作装片，通过染色对活菌
和死菌加以区分，算出两者比例，进一步换算出
总菌体数中的活菌数。
血球计数板的清洗
•
血球计数板使用结束后，应用清水浸泡、
冲洗，不能用刷子等硬物洗刷，自然晾干
或吹风机吹干后，镜检每个小格中是否存
有污物、残菌，如不清洁，需重新清洗直
至洁净。
无菌操作
•
要防止杂菌污染给实验结果带来影响。
每次抽样检测用到的蒸馏水、玻璃器皿、
滴管等要事先经无菌化处理，血球计数板、
载玻片、盖玻片等必需保持洁净。
•
每次取样观察要规范，实验用过的器材
要清洗干净，需灭菌的器具则一定要灭菌。