Transcript Experimentální diagnostické a terapeutické metody

Experimentální diagnostické a
terapeutické metody
MUDr. Jana Kayserová
Ústav imunologie 2.LF UK, Praha-Motol
Nové metody v imunologii
•
•
•
•
•
Screening onemocnění
Diagnóza
Upřesnění diagnózy (různé typy onemocnění)
Predikce onemocnění
Terapie – individuální podání nebo rozšíření spektra indikací
•
•
•
•
Primární imunodeficity
Alergická onemocnění
Autoimunitní onemocnění
Nádorová onemocnění
Genová úroveň
• Mutace v genech zapojených do imunitních
pochodů
• Gata-2 – MonoMac syndrom deficience dendritických buněk,
monocytů a B buněk a leukémie
• TREC/KREC – screening SCID
Cossu Italian Journal of Pediatrics 2010
Borte Blood 2012
TREC - T cell receptor excision circle
KREC - kappa-deleting recombination excision circle
TREC/KREC
1000000
control blood
SCID blood
J.L. PB 3/14
J.L. BM 3/14
KREC
100000
J.L. PB 2013
10000
1000
100
100
1000
10000
TREC
TREC - T cell receptor excision circle
KREC - kappa-deleting recombination excision circle
100000
1000000
• Sérum
– autoprotilátky – vzácná autoimunitní onemocnění
– CRD – komponentová diagnostika u alergických
onemocnění
• Buněčné subpopulace
– Základní lymfocytární subpopulace
– TH17, Tregs, podtypy B lymfocytů, specifické T
lymfocyty, DC
Autoprotilátky
• Stanovení v séru a dalších tekutinách (likvor,…)
• Diagnostika a monitoring průběhu onemocnění
• Autoimunitní encefalitidy
– Příběh Kačenky, která se po roce probudila
(NMDA-R encefalitida)
– Nejdříve postupně všechny linie standardní léčby (IVIG,
kortikosteroidy, cyklofosfamid, eliminační metody –
plasmaferéza – bez efektu
– Použití experimentální biologické léčby (anti-CD52 –
alemtuzumab)
Biologická léčba
• Monoklonální protilátky
• Rozšíření spektra indikací
– Anti-CD20 (rituximab)
• SLE, lymfomy, vaskulitidy
x
atopická dermatitida
– Anti-CD52 (alemtuzumab)
• Chronická CLL, RS
x
autoimunitní encefalitida,
vaskulitida nezařazená
Komponentová diagnostika
•
•
•
•
•
Moderní „in vitro metoda“, umožňující stanovení přecitlivělosti časného typu vůči
přesně definovaným molekulám, které jsou v příčinné souvislosti s alergickým
onemocněním
Produkce specifických IgE protilátek proti 1 epitopu alergenu
Upřesnění a zkvalitnění diagnostiky alergie (nepracujeme se směsí, ale se známou
a přesně definovanou molekulou)
Konstantní kvalita
Amplifikovatelnost
Adam a Hana měli oba posledních 5 let těžkou pylovou alergii v období únor-červen
SPT
ALERGEN
ADAM
HANA
bříza
5/10
5/11
trávy
5/10
5/10
Alergenové komponenty
IgE
EXTRAKT
ADAM
HANA
bříza
15,0kU/l
8,5kU/l
trávy
6,3kU/l
11,3kU/l
ADAM
HANA
Bet v 1 (PRP 10)
10,1
< 0,1
Bet v 2 (profilin)
< 0,1
6,3
5,2
< 0,1
Phl p 1
< 0,1
7,3
Phl p 5
< 0,1
< 0,1
5,8
< 0,1
Bet v 4 (polcalcin)
Phl p 7 (polcalcin)
Adam: alergie na pyl břízy - léčba SAIT na pyl břízy
Hana: alergie na pyl trav - léčba SAIT na pyl trav
Buněčná úroveň – kvantitativní deficity
• Buněčné subpopulace
– Základní lymfocytární subpopulace
– TH17, Tregs, podtypy T a B lymfocytů
– Využití hlavně při diagnostice primárních imunodeficiencí
CD 4
SSC
SSC
CD 25
Regulační T lymfocyty
CD4+25+FoxP3+
lymfocyty
FSC
CD 3
CD 8
- Diagnostika - Nepřítomnost Treg u primárního imunodeficitu IPEX
- mutace v genu pro FoxP3 (transkripční faktor pro Treg)
- Zvýšeny u nádorových onemocnění – stanovení se využívá při indikaci
cyklosfosfamidu před imunoterapií v klinických studiích
- Experimentální stanovení u autoimunitních onemocněních - sníženy
FoxP3
Cytometrická analýza - Strategie „gatování“
Th17 lymfocyty
CD4+IL-17+ lymfocyty
- Diagnostika HyperIgE sy- mutace pro
transkripční faktor STAT-3
- STAT-3 je hlavní transkripční faktor
Th17 lymfocytů
- Vysoce zvýšené u chronické
granulomatózy
0,1
HyperIgE sy
HyperIgE sy
0,7
Zdravá kontrola
Subtypy B lymfocytů
CD19+ lymfocyty
- Diagnostika CVID a dalších B buněčných
imunodeficitů
Vlková J Immunol 2010
Funkční poruchy
• Nekontrolovatelná
sekrece IL-1
autoinflamatorní sy
– Stanovení IL-1beta v séru
– Terapie: blokáda IL-1 =
antagonista IL-1 receptoru
(Anakinra)
• Náchylnost k určitým infekčním agens
• Deficience TLR receptorů
IRAK4, MyD88 – pneumokokové infekce
TLR 3 – herpetické encefalitidy
Stanovení produkce
prozánětlivých cytokinů
(IL-1beta, IL-6, atd.)
po stimulaci mononukleárních
buněk agonisty
jednotlivých TLR receptorů
– Deficience IFNgama nebo jeho receptoru
• Mykobakteriální infekce
• Stanovení produkce IFNgama, IL-12, IL-23
Aktivní buněčná imunoterapie
• Dendritické buňky
– Terapie nádorových onemocnění (DCVAC – ca prostaty, ovarii)
– Terapie autoimunitních onemocnění (tolerogenní DC) – T1D, RA
• CMV-specifické T lymfocyty
– Pacienti se SCID jsou ohroženi CMV infekcemi
– Reaktivace CMV po HSCT
– Stanovení efektorových T lymfocytů, které zajišťují dlouhodobou
ochranu před CMV reaktivacemi
– Adoptivní transfer od příbuzných Tx pacientů
Závěr
• + Experimentální metody vedou k přesnější
(někdy i rychlejší) diagnostice onemocnění
nebo jeho podtypu a k možnostem specifické
léčby s minimálními nežádoucími příznaky
• - Postupy nejsou standardizované