Kültür Vasatının Embriyo Kalitesi ve Başarıya Etkisi
Download
Report
Transcript Kültür Vasatının Embriyo Kalitesi ve Başarıya Etkisi
Doç. Dr. Lale Delilbaşı
Ankara Güven Hastanesi Embriyoloji Laboratuvarı Direktörü
Hücresel Stres
Gelişimin yavaşlaması veya durması
Sitoplazmik fragmantasyon
Anormal genom ve gen transkripsiyonu
Enerji metabolizmasının bozulması
VİABİLİTE KAYBI
Kültür Ortamlarının Bileşimi
Temel inorganik iyonlar
Karbohidratlar
Aminoasitler
Vitaminler
Simple Balanced Salt Solution (Basit tuz solüsyonları, enerji
kaynakları)
Modifiye Earle’s, modifiye Whittingham T6, CZB ve KSOM
HTF, P1,G1
Kompleks Mediumlar (İnorganik tuzlar, enerji kaynakları,
aminoasitler, vitaminler, kofaktörler)
Ham’s F10, Menezo’s B2, B3, MEM, G2
Hypoxanthine......2 hücre bloğu (Loutradis et al, Biol Reprod 1987)
Nikotinamide.......embriyotoksik (Tsai&Gardner, Fertil Steril, 1994)
Vitamin B12.......blastosel inhibisyonu (Kane MT, Jexp Zool, 1988)
Non-esansiyel aminoasitler......blastosist gelişimi (Lane&Gardner,
J.Reprod Fertil, 1997)
IVF Mediumları
SOF medium (Tervit et al, J Reprod Fertil, 1972)
HTF medium (Quinn et al, Fertil Steril, 1985)
G1 ve G2 (Gardner&Lane, Hum Reprod Update, 1997)
İnorganik İyonlar
Potasyum
Klorid
Kalsiyum
Magnezyum
Fosfat
OZMOTİK BASINCI DENGELERLER
Karbohidratlar
Pirüvat
Laktat (D ve L izomerleri)
Glukoz
Membranlarda enzimatik aktivitenin geç gelişmesi
ATP/ADP oranının yüksek olması
Glukoz içermeyen mediumlar (HTF) (Quinn P, J Assist Reprod Genet, 1995,
Quinn et al, Fertil Steril, 1995, Mahadevan et al, Hum Reprod, 1997)
Pirüvat
(mmol/l)
Laktat
Glukoz
(mmol/l)
(mmol/l)
FALLOP
TÜPLERİ
0.32
10.50
0.50
UTERUS
0.10
5.87
3.15
(Gardner et al, ART and Human Blastocysts, 2001)
Aminoasitler
Biyosentetik aktivasyon
Enerji kaynağı
Enerji metabolizması düzenleyicisi
Ozmolit
İntrasellüler pH tamponu
Antioksidan
Şelatör
Aminoasitler
Non-esansiyel aminoasitler
Erken dönem hücresel aktiviteyi destekler
Blastosel formasyonunda etkilidir
Esansiyel aminoasitler
Blastosist formasyonu, ICM’de hücresel artış, blastosist
viabilitesinde artış (Gardner&Lane, Hum Reprod Update, 1997)
Amonyum
Aminoasitlerin 37 C parçalanmasıyla
Embriyoların aminoasitleri metabolize etmesiyle
Embriyoların kendileri tarafından salgılanır
(Gardner&Lane, Biol Reprod, 1993, Nakazawa et al, J Reprod Fertil, 1997, Houghton et al,
Hum Reprod 2002)
Medium: Metabolit havuzunun değiştirilmesi,
evreye özel faktörlerin eklenmesi
Amonyum gibi toksinlerin
uzaklaştırılması
Tek tek veya gruplar
halinde embriyolar
Erken Dönem Preimplante Embriyolar
Düşük biyosentetik aktivite
Düşük O2 tüketimi
Pirüvat
Non-esansiyel aminoasitler
İndividual hücreler
Tek tip hücre
Kompaktlaşma Sonrası Embriyolar
Yüksek biyosentetik aktivite
Yüksek O2 tüketimi
Glukoz
Non-esansiyel ve esansiyel
aminoasitler
Embriyonik genom
Transport epiteli
ICM ve trofoektodermal hücreler
IVF Mediumları
İnorganik iyonlar
Karbohidratlar
Aminoasitler
Vitaminler (Behr et al, Hum Reprod, 1999, McKiernan et al, Hum Reprod, 2000)
EDTA (Gardner&Lane, Hum Reprod, 1998)
Hormonlar
(Wu J-T, Biol Reprod, 1987)
Büyüme faktörleri (Sjoblom et al, Hum Reprod 1999, Kim et al, Fertil Steril,
2001)
Antioksidanlar (Gardiner et al, Biol Reprod, 1998)
Ardışık veya Tek Medium
Erken preimplante embriyolar için tuba uterina
Geç preimplante embriyolar için uterus salgılarını taklit ederler (Gardner DK,
Theriogenology, 1998)
Embriyolar içinde bulundukları ortamdan gereksinimlerini ihtiyaçlarına göre
alırlar (Biggers JD, RBM Online, 2002)
Glukoz
Pirüvat
Aminoasitler
Diğer şekerler
Oksijen
Blastosist
Blastosist
Laktat
Amonyum
0.5 µl medium
Enzimler
Diğer
faktörler
Hormonlar
Oksidatif Stres
Antioksidanlar (lipoat)
İnternal
pH (pHi)
OOSİT
7.4
ZİGOT
7.3
ERKEN
EMBRİYO
7.2
BLASTOSİST
7.4
Medium pH
7.4
Dale et al, Hum Reprod, 1998,
Phillips et al, Hum Reprod, 2000
%CO2
pH
%4.6
7.5
%5.8
7.4
%7.3
7.3
%9.3
7.2
IVF Mediumlarının Kullanılması
Transport
Raf ömrü, saklanması
Hazırlanması
İnkübatörde kalma süresi
Gametlerin inseminasyon öncesi inkübasyon süresi
İnkübatör özellikleri
IVF Mediumlarının Kullanılması
Yağ
Çoklu embriyo kültürü
Medium miktarı
Mediumların Performansı
Embriyo kalitesi
Blastosist gelişim hızı ve morfolojisi
İmplantasyon oranı
Gebelik