Transcript Kültür Vasatının Embriyo Kalitesi ve Başarıya Etkisi

Doç. Dr. Lale Delilbaşı
Ankara Güven Hastanesi Embriyoloji Laboratuvarı Direktörü
Hücresel Stres
 Gelişimin yavaşlaması veya durması
 Sitoplazmik fragmantasyon
 Anormal genom ve gen transkripsiyonu
 Enerji metabolizmasının bozulması
VİABİLİTE KAYBI
Kültür Ortamlarının Bileşimi
 Temel inorganik iyonlar
 Karbohidratlar
 Aminoasitler
 Vitaminler
 Simple Balanced Salt Solution (Basit tuz solüsyonları, enerji
kaynakları)
 Modifiye Earle’s, modifiye Whittingham T6, CZB ve KSOM
 HTF, P1,G1
 Kompleks Mediumlar (İnorganik tuzlar, enerji kaynakları,
aminoasitler, vitaminler, kofaktörler)
 Ham’s F10, Menezo’s B2, B3, MEM, G2
 Hypoxanthine......2 hücre bloğu (Loutradis et al, Biol Reprod 1987)
 Nikotinamide.......embriyotoksik (Tsai&Gardner, Fertil Steril, 1994)
 Vitamin B12.......blastosel inhibisyonu (Kane MT, Jexp Zool, 1988)
 Non-esansiyel aminoasitler......blastosist gelişimi (Lane&Gardner,
J.Reprod Fertil, 1997)
IVF Mediumları
 SOF medium (Tervit et al, J Reprod Fertil, 1972)
 HTF medium (Quinn et al, Fertil Steril, 1985)
 G1 ve G2 (Gardner&Lane, Hum Reprod Update, 1997)
İnorganik İyonlar
 Potasyum
 Klorid
 Kalsiyum
 Magnezyum
 Fosfat
OZMOTİK BASINCI DENGELERLER
Karbohidratlar
 Pirüvat
 Laktat (D ve L izomerleri)
 Glukoz
 Membranlarda enzimatik aktivitenin geç gelişmesi
 ATP/ADP oranının yüksek olması
 Glukoz içermeyen mediumlar (HTF) (Quinn P, J Assist Reprod Genet, 1995,
Quinn et al, Fertil Steril, 1995, Mahadevan et al, Hum Reprod, 1997)
Pirüvat
(mmol/l)
Laktat
Glukoz
(mmol/l)
(mmol/l)
FALLOP
TÜPLERİ
0.32
10.50
0.50
UTERUS
0.10
5.87
3.15
(Gardner et al, ART and Human Blastocysts, 2001)
Aminoasitler
 Biyosentetik aktivasyon
 Enerji kaynağı
 Enerji metabolizması düzenleyicisi
 Ozmolit
 İntrasellüler pH tamponu
 Antioksidan
 Şelatör
Aminoasitler
 Non-esansiyel aminoasitler
 Erken dönem hücresel aktiviteyi destekler
 Blastosel formasyonunda etkilidir
 Esansiyel aminoasitler
 Blastosist formasyonu, ICM’de hücresel artış, blastosist
viabilitesinde artış (Gardner&Lane, Hum Reprod Update, 1997)
Amonyum
 Aminoasitlerin 37 C parçalanmasıyla
 Embriyoların aminoasitleri metabolize etmesiyle
 Embriyoların kendileri tarafından salgılanır
(Gardner&Lane, Biol Reprod, 1993, Nakazawa et al, J Reprod Fertil, 1997, Houghton et al,
Hum Reprod 2002)
Medium: Metabolit havuzunun değiştirilmesi,
evreye özel faktörlerin eklenmesi
Amonyum gibi toksinlerin
uzaklaştırılması
Tek tek veya gruplar
halinde embriyolar
Erken Dönem Preimplante Embriyolar
 Düşük biyosentetik aktivite
 Düşük O2 tüketimi
 Pirüvat
 Non-esansiyel aminoasitler
 İndividual hücreler
 Tek tip hücre
Kompaktlaşma Sonrası Embriyolar
 Yüksek biyosentetik aktivite
 Yüksek O2 tüketimi
 Glukoz
 Non-esansiyel ve esansiyel
aminoasitler
 Embriyonik genom
 Transport epiteli
 ICM ve trofoektodermal hücreler
IVF Mediumları
 İnorganik iyonlar
 Karbohidratlar
 Aminoasitler
 Vitaminler (Behr et al, Hum Reprod, 1999, McKiernan et al, Hum Reprod, 2000)
 EDTA (Gardner&Lane, Hum Reprod, 1998)
 Hormonlar
(Wu J-T, Biol Reprod, 1987)
 Büyüme faktörleri (Sjoblom et al, Hum Reprod 1999, Kim et al, Fertil Steril,
2001)
 Antioksidanlar (Gardiner et al, Biol Reprod, 1998)
Ardışık veya Tek Medium
 Erken preimplante embriyolar için tuba uterina
 Geç preimplante embriyolar için uterus salgılarını taklit ederler (Gardner DK,
Theriogenology, 1998)
 Embriyolar içinde bulundukları ortamdan gereksinimlerini ihtiyaçlarına göre
alırlar (Biggers JD, RBM Online, 2002)
Glukoz
Pirüvat
Aminoasitler
Diğer şekerler
Oksijen
Blastosist
Blastosist
Laktat
Amonyum
0.5 µl medium
Enzimler
Diğer
faktörler
Hormonlar
Oksidatif Stres
 Antioksidanlar (lipoat)
İnternal
pH (pHi)
OOSİT
7.4
ZİGOT
7.3
ERKEN
EMBRİYO
7.2
BLASTOSİST
7.4
Medium pH
7.4
Dale et al, Hum Reprod, 1998,
Phillips et al, Hum Reprod, 2000
%CO2
pH
%4.6
7.5
%5.8
7.4
%7.3
7.3
%9.3
7.2
IVF Mediumlarının Kullanılması
 Transport
 Raf ömrü, saklanması
 Hazırlanması
 İnkübatörde kalma süresi
 Gametlerin inseminasyon öncesi inkübasyon süresi
 İnkübatör özellikleri
IVF Mediumlarının Kullanılması
 Yağ
 Çoklu embriyo kültürü
 Medium miktarı
Mediumların Performansı
 Embriyo kalitesi
 Blastosist gelişim hızı ve morfolojisi
 İmplantasyon oranı
 Gebelik