Transcript Alteraciones del Gen IK2F1

ALTERACIONES DEL GEN IKZF1
(IKAROS) EN LA LEUCEMIA
LINFOBLÁSTICA AGUDA
Inés Gómez Seguí
Mayo 2010
Ikaros en LLA
IKAROS
IKZF1
AIOLOS
HELIOS
Locus 7p12
FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN
DE LA FAMILIA DE DEDOS DE
ZINC KRUPPLE-LIKE
Alteraciones genéticas en LLA
IKZF1 (Ikaros Zinc Finger 1)
- Proteina de unión al ADN que actúa como factor de
transcripción
Ikaros en LLA
IKZF1 (Ikaros Zinc Finger 1)
- Estructura y dominios funcionales
NH2
NH2
NH2
NH2
SUBDOMINIO
ACÍDICO
-COOH
-COOH
SUBDOMINIO
HIDROFÓBICO
- Máxima actividad si coopera el subdominio hidrofóbico
Ikaros en LLA
IKZF1 (Ikaros Zinc Finger 1): Isoformas
Isoformas
largas
con capacidad
de unión al
ADN
Isoformas
cortas
o inhibidores
dominantes
negativos
Ikaros en LLA
IKZF1 (Ikaros Zinc Finger 1)
- Regulación por homo y heterodimerización, además
de splicing alternativo
HOMODÍMEROS
ISOFORMA
ISOFORMA
ACTIVA
+ ACTIVA
(LARGA)
(LARGA)
ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL
POTENCIADA
HETERODÍMEROS
ISOFORMA
INACTIVA
(CORTA)
ISOFORMA
+ ACTIVA
(LARGA)
SIN ACTIVIDAD
TRANSCRIPCIONAL
Ikaros en LLA
IKZF1 (Ikaros Zinc Finger 1): Función
FACTOR DE
TRANSCRIPCIÓN
Ratón con
infraexpresión
Bloqueo madurativo en
el estadío linfoide pro-B
ONCOGEN
Mutación
heterocigota
dominante-negativa
Neoplasia T agresiva
(ratón)
GEN SUPRESOR
DE TUMORES
Infraexpresión de
isoformas largas
leucemia
Kirstetter P et al. Eur J Immunol.2002;32: 720-730.
Winandy S et al. Cell. 1995; 83: 289-299.
Tonnelle C et al. Blood 2001; 98: 2673-2680.
Ikaros en LLA
Ikaros en neoplasias hematológicas
TABLA de Rebollo pag 173
Tomada de Rebollo et al. Immunol Cell Biol. 2003
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
Frequency of recurring DNA copy number abnormalities in ALL
DELECIONES DE IKZF1
- 84% de LLA-Phi+
- 11% LLA-B Phi- Expresión de Ik6 sólo en
los casos con deleción de los
exones 3 al 6.
Mullighan et al. Nature 2008
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
- Estudios en LLA-B BCR-ABL+ del adulto
n
Iacobucci. Blood 2008
47
Iacobucci. Haematologica 2008 46
Iacobucci. JCO 2009
83
Iacobucci. Blood 2009
106
Ik6 del IKZF1
92%
59%
37%
63%
42%
75%
RT-PCR
- Hipótesis inicial: splicing alternativo
CNA
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
Deleciones: - completas: del locus 7p12 o monosomía 7.
- parciales:
exones 3-6 (=Ik6)
~55%
exones 1-6
~30%
otras
Ik6
Ik10
~15%
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
Detección de CNA en todo el genoma de niños con LLA-B
Las deleciones más frecuentes: CDKN2A/B (46%), PAX5
(32%) e IKZF1 (29%)
n
COHORTE ORIGINAL
LLA-B alto riesgo
(excluyendo Phi+, hipodiploide y <1año)
COHORTE DE VALIDACIÓN
riesgo estándar y alto riesgo
221
258
IKAROS
deleciones
Ik6
16 completas
47 parciales 20
Total: 63 (29%)
48 (19%)
Mullighan. NEJM 2009
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
- Asociación con elevada EMR, recaída y evento
adverso, en ambas cohortes
cohorte original
cohorte de validación
IKZF1 WT del IKZF1
p
IKZF1 WT del IKZF1
p
Tasa de recaída (5 años)
25%
73%
<0.001
26%
48%
0.004
Tasa de evento adverso (5 años)
27%
74%
<0.001
28%
61%
<0.001
EMR elevada (día +8 y +19)
43%
62%
0,04
9%
62%
<0.001
- Implicación pronóstica independientemente de BCRABL
- Elevado % de casos sin alteraciones recurrentes (39%
cohorte original y 23% cohorte validación)
Mullighan. NEJM 2009
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
-Iacobucci. LAS DELECIONES DE IKZF1 SON INDEPENDIENTES
DEL REORDENAMIENTO BCR-ABL Y SE ASOCIAN CON UN
PERFIL DE EXPRESIÓN GÉNICA PARTICULAR Y UN PEOR
PRONÓSTICO EN PACIENTES ADULTOS CON LLA-B. 144 LLA
del adulto de novo (106 BCR-ABL+ y 38 BCR-ABL – sin otros
reordenamientos conocidos).
-Volejnikova. LA EXPRESIÓN RELATIVA DE ISOFORMAS DE
IKAROS TIENE VALOR PRONÓSTICO EN LA LLA-PHI NEGATIVA
DEL NIÑO. 94 niños con LLA. Ratio isoformas cortas/funcionales
relacionada con peor pronóstico.
Comunicaciones ASH 2009
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
LAS DELECIONES DE IKZF1 PREDICEN RECAÍDA EN
LAS LLA-B PEDIÁTRICAS UNIFORMEMENTE
TRATADAS
Estudian 34 muestras pareadas de diagnóstico/recaída.
Las deleciones de IKAROS están preservadas en la
recaída, a diferencia de PAX5, CDKN2A y EBF1.
Deleciones (n=13, 38%) relacionadas con menor SLR.
Kuiper. Leukemia 2010
Ikaros en LLA
Ikaros en leucemia linfoblástica aguda
Kuiper. Leukemia 2010
Ikaros en LLA
Validado en una cohorte de 131 niños tratados homogéneamente.
Pacientes de riesgo estándar (n=102) : RR de recaída x12.
Kuiper. Leukemia 2010
Ikaros en LLA
Hipótesis
- Las deleciones de IKZF1 son un evento frecuente en la
LLA-B.
- Un gran porcentaje de estos casos se correlaciona con
la expresión de la isoforma Ik6.
- Implicación pronóstica en el adulto y aplicación al
algoritmo diagnóstico y terapéutico.
Ikaros en LLA
Muestra
- 65 muestras de RNA de adultos con LLA
(50-55 con muestra de DNA)
+ 10 -12 nuevos casos por año
- aproximadamente, 150 niños con LLA + 30 nuevos
casos por año
Ikaros en LLA
Metodología
- Expresión de isoformas cortas: RT-PCR con cebadores
en exón 1 y 7
- Deleciones génicas: (MLPA®)
Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification
gen
IKZF1
CDKN2A/B
PAX5
ETV6
locus
7p12
9p21.3
9p13.2.
12p13.2,
exones
1,2,3,4,5,6,7,8
1,2,4
1,2,5,6,8,10
1,2,3,5,8
Ikaros en LLA
Objetivos
- Determinar la frecuencia de Ik6 en nuestra serie
- Correlación con deleciones génicas de IKZF1
- Determinar su implicación pronóstica
Fondos
- Generalitat Valenciana
Ikaros en LLA
Resultados
B
+
-
1
2
3
4
MVI
Ik1
Ik2
Ik4
Ik6
Ikaros en LLA
Resultados
Ikaros en neoplasias hematológicas
25 casos de LLA-T
Deleciones n=1
Mutaciones n=0
Proteína: localización citoplasmática
INACTIVACIÓN GÉNICA EN NEOPLASIAS B VS.
INACTIVACIÓN FUNCIONAL EN NEOPLASIAS T.
Marcais et al. Leukemia Research 2009