Transcript 手足口病流行病和病毒学特征

人肠道病毒简介和分类
人肠道病毒
人肠道病毒发现的历史
• 脊髓灰质炎病毒 ：通过将标本接种至猴子体内 ，
1909年首次鉴定出该病毒，1949年，利用细胞培养
的方法增殖病毒，为疫苗的研制奠定了基础。
• 柯萨奇病毒：1948年在美国纽约Coxsackie镇，将两
名麻痹患儿的标本接种至乳鼠体内，分离出来的一
组病毒定名为柯萨奇病毒。根据它们在乳鼠上产生
的组织病理学变化和在细胞培养上的能力，分为柯
萨奇病毒A组和B组。
• 埃可病毒：1951年在一名无症状的儿童的粪便标本
中分离到，在细胞培养上可以造成致细胞病变，但
对乳鼠和灵长类动物不致病。
• 新肠道病毒：后来，新发现的病毒被按照序号命名
（69~71），最近，已经命名至111型
人肠道病毒型别分类
早期分类
现代分类
血清型
种species
型
脊灰病毒（PV） ⅠⅡⅢ
柯萨奇病毒A组
(CAV)
1-22,24
HEV-A
CAV2-8,10,12,14,16;
EV71,76, 89－91
柯萨奇病毒B组
(CBV)
1-6
HEV-B
CBV1-6; CAV9;
ECHO1-7,9,11-21,24-27，
29-33;
EV69,73-75,7788,93,97,100-111
埃柯病毒(ECHO) 1-7,9,11-21, HEV-C
24-27,29-33
脊灰病毒（PV） ⅠⅡⅢ ,
CAV1,11,13,15,17-22,24,
肠道病毒（EV） 68－71
EV68,70,94
HEV-D
4
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
① CoxA23与ECHO9为同一病毒，已归入ECHO9
② CoxA15与CoxA11为同一病毒，统一命名为CoxA11
③ CoxA18与CoxA13为同一病毒，统一命名为CoxA13
④ ECHO8与ECHO1为同一病毒，统一命名为ECHO1
⑤ ECHO10已归入呼肠孤病毒1型（Reo 1）
⑥ ECHO22和ECHO23被划分为新的病毒属——副肠
孤病毒属，分别重新命名为副肠孤病毒1型和2型
⑦ ECHO28归入鼻病毒1A型
⑧ ECHO34并入CoxA24，为CoxA24的变种
⑨ 鼻病毒87型重新划为肠道病毒68型
⑩ 肠道病毒72型划为肝病毒属中的人甲型肝炎病毒
⑾ 猪水疱病病毒(SVDV)类似于Cox B5型
人肠道病毒的毒粒结构
~30nm
二十面体对称
无包膜
Courtesy of Linda M. Stannard, University of Cape Town, S.A.h
人肠道病毒的流行病学
人肠道病毒传播方式
> 粪-口途径传播: 唾液与粪便
> 呼吸道传播: 空气飞沫
> 接触传播:
人
人
环境因素影响经水传播的病原体
针对 脊灰病毒、NPEV、
轮状病毒、诺如病毒，甲肝
水
洗
直接、间接接触
排毒
盘子
休闲、娱乐
门把手
河流
灌溉
污水处理厂
海产品
海洋
造成人肠道病毒感染与流行的因素
宿主因素：营养、卫生、抵抗力
病毒的种类
侵入易感个体的人肠道病毒量
病毒的毒性强弱
整个族群里含有抗体的个体（群体免疫）
少数研究：特定HLA基因较易出现肢体麻痹症候群
有些研究：新生儿与婴儿易遭受严重的柯萨奇B型 、
ECHO和EV71病毒感染
致病特点
①隐性感染多见，很少引起腹泻，婴幼儿、
免疫力低下的成人易感。
②病毒在机体肠道中增殖，很少引起肠道
症状，是以消化道为原发灶的全身感染。
③不同人肠道病毒可引起相同症状，同一
种人肠道病毒可引起不同临床表现。
④感染过程中形成病毒血症。
人肠道病毒感染的一般致病机制
进入途径
口腔/呼吸道
咽喉及下肠胃道
传播
飞沫、接触、饮食
扁桃体、深层淋巴结、肠道淋巴结
先天性感染
微病毒血症
肝脏、
胰脏、
肾上腺
神经系统
心脏
神经系统
呼吸系统
皮肤及黏膜 肌肉
病毒血症
抗体产生、病毒血症消失，病毒感染症状改善
与人肠道病毒感染相关的疾病
临床特征
• 病毒由口进入胃肠道，潜伏期为3－35天，
一般7－14天。
• 90％的感染为隐性感染
• 约5％出现流产感染
• 1％～2％为非麻痹性脊髓灰质炎或无菌
性脑膜炎
• 仅约0.1%出现永久性弛缓性肢体麻痹
• 极少数发展为延髓麻痹
与人肠道病毒感染相关的疾病
症状
脊灰
麻痹性疾病
+
脑膜炎-脑炎
+
心肌炎
+
新生儿疾病
胸膜痛
咽峡炎
发热性疾病
出血性结膜炎
.
呼吸系统感染
+
不明原因发热
+
糖尿病/胰腺炎
-
Cox A
+
+
+
+
+
+
+
+
-
Cox B
+
+
+
+
+
+
+
+
+
Echo
+
+
+
+
+
+
+
-
引起的疾病
• 麻痹性疾病
•
•
•
•
– 脊灰病毒是最常见的引起麻痹性疾病的病原体，但
其它病毒有时也可引起，如肠道病毒 71型（EV71）
无菌性脑膜炎 – 所有人肠道病毒都可以引起, 尤其常见于
5岁以下儿童；
脑炎
–典型或者不典型的脑炎可能伴有脑膜炎症状．大 部
分病例恢复后不留后遗症；
“不明原因”发热 – 由A组柯萨奇病毒（Cox A16）和EV71引起，但
B组柯萨奇病毒和某些埃可病毒也经常造成暴发；
咽峡炎 – 由 A组柯萨奇病毒引起；
• 传染性胸膜痛(博恩霍尔姆氏病 ，Bornholm disease)
•
– 通常由B组柯萨奇病毒引起；
人肠道病毒病例死亡时间
早期死亡
死
亡
机
率
晚期死亡
呼吸衰竭
心衰竭
天
1
2
神经系统损伤
脑死亡及
中枢衰竭
3
4
5
6
14
>28
人肠道病毒感染后的病程
粪便
咽拭
CSF
0
8
病毒分离
16
24
粪便
双份血
血清
抗体
传染性
粪-口
2 - 7 (10)
天
临床特征
0
感染
8
天
16
24
手足口病
5
1
2
无皮疹的手足口病重症病例
3
4
手足口病皮疹分布
1. 颊粘膜和手指; 2. 手掌 ；3. 足底 ； 4. 唇粘膜； 5.咽峡炎
手足口病
Hand-foot-mouth Disease, HFMD
一.
二.
三.
四.
五.
六.
七.
八.
九.
HFMD引起关注的原因
HFMD的定义和相关病毒病原
HFMD的标本的采集
中国HFMD实验室网络的初步建立和运转
中国大陆HFMD流行、现状和趋势
中国大陆2008年-2009年HFMD 的病原谱
分子流行病和血清流行病
HFMD病理特征
HFMD预防和治疗
阜阳手足口病
“阜阳13例不明原因肺炎死亡病例”
“疫情概况”
•
•
•
•
•
病例高度散发
不具有传染性，可能为感染性疾病
只在一例中发现疹子
以“重症肺炎”为主要临床表现
病情进展迅速，
大部分入院几小时-2天
死亡
• 病因不明
图3. 2008 年3月1日至5月9日阜阳市HFMD病例数
HFMD引起关注的原因
1.阜阳聚集死亡病例和较多重症病例的出现
2.发病到死亡进展迅速，引起社会恐慌
3.临床上无特效药物,重症的早期预警存在
一定难度
4.对疫情的扩散无有效的控制手段,无疫苗
5.第38种法定传染病
阜阳不明原因肺炎死亡病原学鉴定
4月18，中国CDC组织专家组
分析判定病原和实验室检测方向为=HEV71
流行病学
实验室检测
证实4月23日
EV71是此次疾病的主要致病原
临床资料
从3月 23至4月29阜阳市死亡病例 (共22例)
确认 EV71为致病原
早期死亡病例
15
15例死亡病例的临床症状
临床症状
病例数
比例（%）
发热
呼吸急促
口唇紫绀
粉红色泡沫痰
咳嗽
呕吐
肌阵挛
手足部皮疹
卡他性鼻炎
颈项强直
15
14
12
9
7
8
3
6
2
2
100
93.3
80.0
60.0
46.7
53.3
20.0
40.0
13.3
13.3
27
阜阳重症和轻症病人的咽拭子EV71核酸阳性率
HFMD病例EV71核酸检测
病例
类型
病例数
轻症
重症
阳性数
阴性数
阳性率
158
147
11
93.04%
16
13
3
81.25%
阜阳2008年3月1至5月9日不同年龄组的HFMD病例
 90%以上病例为5岁以下儿童
EV71为阜阳2008年HFMD爆发的绝对优势血清型
二. HFMD的定义和相关病毒病原
HFMD的定义
HFMD是由多种肠道病毒引起的一种儿童常见
传染病，是我国法定报告管理的丙类传染病
大多数患者症状轻微，以发热和手、足、口
腔等部位的皮疹或疱疹为主要临床症状。
少数患者可出现无菌性脑膜炎、脑炎、急性
弛缓性麻痹、神经源性肺水肿和心肌炎等，
个别重症患儿病情进展快，可导致死亡。
手足口病预防控制指南（2009版）
人肠道病毒（HEV71）的毒粒结构
~30nm
二十面体对称
无包膜
Courtesy of Linda M. Stannard, University of Cape Town, S.A.h
HFMD的相关病毒病原
 病原: HFMD可由20多种肠道病毒所引起，其中包括柯萨奇病毒、埃
可 病毒和肠道病毒新的血清型。CoxA组的16、4、5、7、9、10等型,
CoxB组的2、5等型, 以CoxA16 和EV71最为常见。
 传播途径:
粪-口途径传播: 唾液与粪便;
呼吸道传播: 空气飞沫;
接触传播
 疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。

HFMD为全球性传染病，多发生于5岁以下的婴幼儿, 在全球广泛分
布，无明显的地域分布, 但近年EV71在东南亚几个国家或地区流行, 引
起较多的重症和死亡病例。
CoxA16
• 1957年在加拿大首次报告，新西兰Seddon于1957年最
早加以描述，1958年加拿大Robinson从患者粪便和咽
拭中分离出CoxA16，同时患者血清抗体有四倍增长,初
步查明CoxA16为本病病原；
• 1959年提出HFMD命名，HFMD在全球广泛流行，无明显
的地域分布。
–发热, 不适, 咽喉肿痛, 口腔、手、脚侧面及掌心、
屁股出现小泡
• 传染性极高
• 病程约1周
肠道病毒71型（enterovirus 71，EV71）
1972年EV71在美国被首次确认，1974年Schmidt等首次发表从美
国加利福尼亚州20例具有中枢神经系统症状患者（1969~1973年
）中分离到EV71。
随后，世界上众多国家都有EV71流行的报道。EV71感染可引起
HFMD、疱疹性咽峡炎、无菌性脑炎、脑干脑炎和脊髓灰质炎样
麻痹，但更多情况下是产生隐性感染。同脊灰病毒相似，EV71
对脊髓前角细胞具有一定的组织嗜性，是最常见的引起急性迟
缓性麻痹（acute flaccid paralysis，AFP）的非脊灰肠道病
毒（non-polio enterovirus，NPEV）。
EV71潜伏期一般为3－7天,感染EV71后，患者发病1~2周内可自
咽部排出病毒，从粪便中排毒可持续至发病后3~5周。
疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。
36
三. 标本采集
粪便标本
咽拭子标本
血清标本
脑脊液标本
疱疹液标本
尸检标本
肛拭子标本
标本采集注意事项
 用于病毒分离的标本包括粪便、咽拭子和疱疹液
 如果患者出现神经系统症状，应该采集脑脊液标本。
 在手足口病的实验室诊断中，从疱疹液或脑脊液中分离
病毒具有很高的诊断意义。
 用于采集咽拭子的无菌拭子要放在适当的保存液中，如
病毒保存液。
 为了保证检测结果的准确性和有效性，标本应在病例发
病后尽早采集，尽快检测。
 不能立即检测的标本应冷冻保存。
 对于血清学诊断，急性期血清应该在发病后尽早采集，
恢复期血清在发病2-4周后采集。
细胞系
•
•
•
•
RD细胞，来源于人横纹肌肉瘤细胞
HEp-2细胞，来源于人喉癌上皮细胞
Vero细胞，来源于非洲绿猴肾细胞
可联合使用RD和HEp-2，或者RD和Vero
细胞系进行肠道病毒的分离。
• 联合使用RD、HEp-2和Vero细胞，有助
于提高肠道病毒检出率。
Progression of CPE: EV71 in RD-A Cell lines
EV71在RD-A细胞上产生病变的过程
四. 中国HFMD实验室网络的初步
建立和运转
Heilongjiang
Jilin
Liaoning
Neimeng
Xinjiang
Beijing
HebeiTianjing
Ningxia
Qinghai
Shanxi
Shaanxi
Shandong
Henan
Xizang
Sichuan
Chongqing
Hubei
Hunan
Jiangsu
Anhui
Jiangxi
Shanghai
Zhejiang
Guizhou
1
2
Fujian
Yunnan
1.国家实验室
Guangxi Guangdong
2. 31个省级实验室
3
Hainan
3.部分地市实验室
Taiwan
中国HFMD实验室网络的初步建立和运转
 HFMD实验室网络标准化技术的建立及应用

操作规程的制定，包括：
标本的采集和运输
从临床标本直接进行EV71和CVA16V RT-PCR鉴定
EV71和CVA16 的Real-time PCR鉴定
EV71和CVA16 VP1全长的RT-PCR扩增
用RD/HEp-2细胞分离EV71和CVA16
EV71-IgM抗体的检测
 建立了中国HFMD相关病原毒株库和数据库
 培训: 2008年4月初在郑州，12月在杭州，2009年7月在青岛分别举办
了HFMD实验室检测技术培训班；2009年4月7-10日在北京举办了发热出
疹症侯群检测和监测技术培训班，2010年深圳HFMD实验室网络培训班
中国肠道病毒三级实验室网络
1
国家实验室
 肠道病毒分离物基因分型,血清流行病学检测,诊
断方法建立
 质量控制
 对省级实验室提供技术支持
31个省级实验室
部分地市级实验室
RT-PCR, Real time PCR和 IgM检测。
肠道病毒分离和鉴定
对地级实验室的质量控制
 对地级实验室提供技术支持
 RT-PCR, Real time PCR和 IgM检
测。负责 采集标本 ，
手足口病的实验室检测流程见下图：
待检标本
EV71或CA16IgM或测双份血
清中和抗体滴度
RT-PCR
Real time RTPCR
检测病毒核酸
病毒分离
无CPE
基因定型
CPE阳性
中和定型
常规实验
RT-PCR
基因定型
补充实验
肠道病毒
非肠道病毒
关键诊断技术和监测技术
HFMD检测、监测技术和标准的建立及应用
建立多种HFMD诊断方法
 诊断RT-PCR: 从临床标本直接进行检测
待检标本
测双份血清
中和抗体滴度
RT-PCR
Real time RTPCR
病毒分离
 基因型鉴定RT-PCR：VP1全长
基因定型
 用RD/HeP2细胞分离肠道病毒标准程序（SOP）
 磁珠法自动化提取咽拭子和粪便标本中肠道病毒核酸
无CPE
CPE阳性
 基于颜色的等温扩增技术（LAMP）检测EV71和CA16核酸
 nRT-PCR自动化工作站检测EV71、CVA16和肠道病毒核酸
 rRT-PCR单通道快速检测肠道病毒
 rRT-PCR单通道快速检测EV71病毒
中和定型
常规实验
RT-PCR
基因定型
补充实验
肠道病毒
非肠道病毒
 rRT-PCR单通道快速检测CA16病毒
 rRT-PCR双通道快速检测肠道病毒和EV71病毒
 rRT-PCR双通道快速检测EV71病毒和CA16病毒
 rRT-PCR三通道快速检测肠道病毒、EV71病毒和CA16病毒
 EV71和CA16血清中和抗体检测方法（微量细胞中和试验）
 环境污水中肠道病毒提取、纯化和检测技术
相关检测方法应用于HFMD爆发的诊断和鉴别
诊断，满足了不同层次省、地市和县级医疗卫
生机构开展HFMD实验室检测和监测的迫切需
要
贝尔公司使用我们研制的核心技术研制了ELISA
检测血清中EV71-IgM抗体试剂盒：第一个获得
药监局文号
实验室诊断方法
• 病毒分离鉴定
• 病毒核酸的检测
普通RT-PCR
荧光定量RT-PCR
• 血清学检测
急性期/恢复期血清中和抗体滴定
ELISA法检测血清IgM和IgG
手足口病的实验室检测
手足口病的诊断一般是通过采集适当的临床标本
后进行基因检测、抗原检测、血清学抗体检测、病
毒分离和病毒鉴定。
很多血清型的肠道病毒能引起手足口病，不同细
胞系对不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同时
期肠道病毒的流行株也不同。
通常用于肠道病毒分离的细胞系为RD、HEp-2、
Vero等，联合使用上述的两种或更多细胞有助于分
离到更多的肠道病毒。
质量控制
31个省级网络实验室骨干标准化操作技术培训
 各网络实验室负责培训地市实验室骨干
 标本采集的时间分布、数量和质量的定期核查
 职能考核(血清、核酸）
 标本复核(血清、核酸）
 实验室现场督导和认证
 临床、流行病和实验室信息管理
 质量保证

质量保证
 省级统一核酸检测方法
统一病毒分离方法
(提供用于病毒分离的细胞系RD,HeP2等)
试剂盒（或方法学）的评价
使用组合标本或核酸评价所使用的试剂盒
仪器校对
生物安全柜：每年一次
加样器：每3－6个月一次
温度监测（培养箱）
 标准操作规程（SOP） ：
血清学
细胞培养、病毒分离
PCR，RT-PCR，Real time PCR
 记录
电子版和实验记录本
 标本和病毒的储存
 专家组对本实验室的认证评估
病毒疾病常出现的阴性结果分析
> rRT-PCR和病毒培养：
> 血清抗体：
- 标本采集时间过早或太迟
- 血清标本采集时间不对
- 标本采集部位错误
- 非特异性抑制物质干扰
- 标本采集技术不过关
- 抗体反应微弱：抗原变异
- 标本保存不好
- 病毒或病毒株选择错误
- 病毒培养细胞株选择错误
- 检测方法错误
- 实验室质量控制
- 实验室质量控制：
- 其他
- 其他
发热伴出疹症候群
肠道病毒（HEV71，CA16）
登革热病毒
伤寒、副伤寒
发热伴出疹，发热≥37.5℃，
持续一天以上，
伴有全身或局部的皮肤或粘膜出疹。
链球菌
伯氏疏螺旋体（莱姆病）
其它
水痘
麻疹、风疹、
B19
麻疹病毒感染体液免疫过程
必要日期:
最后接种日期
出疹日期
出生日期
10
IgG
Relative levels of8
antibody
6
4
IgM
virus excretion
IgM sensitivity
~70%
2
0
-21
-14
-7
Infection
0
Rash
onset
7
14
21
28
35
42
Days after rash onset
用于IgM抗体检测的血清标本要在初次接触病人时马上采集，以及出疹后28天内采集
用于病毒分离的标本,需出疹５天内采集咽拭子或尿液
五. 中国大陆HFMD流行、现状和趋势
• 1981年，我国在上海首次报道了HFMD病例
• 1987年在中国分离到EV71
• 早期发现的手足口病的病原体主要为Cox A16型。此后，EV 71感
染与Cox A16感染交替出现，成为手足口病的主要病原体。
• 我国80年代流行的手足口病病原以Cox A16为主；1998以来，各地
报道的手足口病病原以EV71型和Cox A16交叉流行或同时流行为主。
• 1995年以来，我国陆续在武汉、深圳、上海、重庆、山东和安徽
等地的HFMD患者中分离到EV71病毒。
• 2007年，山东发生了手足口病爆发流行，累计报告HFMD病例39，
606例，其中14例病例死亡。实验室检测发现EV71是引起山东临沂
HFMD的主要病原，同时还检测到Echo3 和/或 CVA16。
• 2008年- 2010年7月:中国大陆出现CoxA16 和EV71 共循环引起手
足口病爆发, 部分地区以EV71为绝对优势型别, 少数以CoxA16 为
优势型别，同时还有其它肠道病毒循环引起的手足口病。
亚太地区HFMD暴发
1997
Malaysia
34 deaths
Taiwan
78 deaths
Various
4 deaths
Australia
29 severe cases
Taiwan
9 deaths
Singapore
7 deaths
Taiwan
41 deaths
Malaysia
4 deaths
Japan
HFMD epidemic
Canada
City outbreaks
Taiwan
58 deaths
Australia
44 severe cases
Taiwan
30 deaths
Malaysia
HFMD epidemic
Taiwan
8 deaths
China (Macao)
at least 1 death
1998
JAPAN
CHINA
1999
2000
2001
2002
INDIA
Taiwan
BURMA
Hong Kong
LAOS
VIETNAM
THAILAND
PHILIPPINES
CAMBODIA
Palawan
2003
2004
2005
China (Beijing)
>5cases/day
Taiwan
5 deaths
USA
City outbreak of HFMD
UK
Schools closed
Singapore
15247 HFMD cases
Malaysia
Schools & Playgrounds closed for 2 weeks
Singapore
>15000 cases with school closures
China
>80,000 cases, 17 deaths
Singapore
>20,000 cases
Singapore
>17,000 cases to date with school closures
Taiwan
~200,000 cases, 10 deaths confirmed (17)
China
>175,000 cases, 44 deaths
Vietnam
> 2,000 cases?, 11 deaths
2006
Brunei
MALAYSIA
Halmahera
SINGAPORE
Borneo
New
Guinea
INDONESIA
Java
Bali
Sumba
2007
2008
AUSTRALIA
EV71毒株各个基因型/亚型流行的地理和年代分布
基因型
流行地区
流行时间
A
美国
1970
B1
美国、澳大利亚、中国台湾、匈牙利、保加
利亚、日本
1972~1987
B2
美国、
1981~1987
B3
马来西亚、澳大利亚、新加坡
1997~1999
B4
马来西亚、新加坡、中国台湾、日本
1997~2002
B5
马来西亚
2003
C1
美国、澳大利亚、马来西亚、新加坡、越南
、泰国、日本
1986~2005
C2
美国、澳大利亚、日本、中国台湾、
1995~2002
C3
中国、韩国
1997、2003
C4
中国、越南、日本、中国台湾
1998~2007
C5
越南
2005
传染病疫情网络数据库统计分析
中国大陆手足口病报告人数
• 2008年：报告489073例
– 发病率为37.01/100,000
– 重症病例1165例 ，占报告病例数的 0.24 %
– 死亡126例，病死率 0.26‰
70000
100
60000
病例数
发病率
60
40
20
10000
0
地区
0
西藏
青海
四川
河南
江西
重庆
贵州
新疆
甘肃
云南
陕西
内蒙古
辽宁
山东
宁夏
黑龙江
江苏
吉林
河北
湖南
湖北
安徽
福建
山西
广西
广东
天津
浙江
海南
上海
北京
传染病疫情网络数据库统计分析
80
30000
20000
发病率（1/10万）
120
40000
病例数
2008年全国各省手足口病病例数及发病率
50000
2008年全国手足口病病例发病及死亡时间分布
200000
45
180000
40
发病例数
死亡例数
160000
30
120000
25
100000
20
80000
15
60000
10
40000
20000
5
0
0
1月
2月
3月
4月
5月
6月
月份
传染病疫情网络数据库统计分析
7月
8月
9月
10月
11月
12月
死亡例数
发病例数
140000
35
2010年手足口病地区分布
• 发病数
• 发病率
2010年部分重症及死亡病例年龄、性别分布特点
重症病例
死亡病例
病例数
22975
781
男女性别比
1.91
1.97
3岁及以下（%）
82.04
88.97
5岁及以下（%）
96.64
98.59
最小年龄
不足1月
1个月
最大年龄
31岁
10岁
六.
HFMD 的病原谱
中国大陆2008年-2010年8月15日
病原学
重症病例（1165例） ：
350
90
unconfirmed
80
other EV
70
EV71
60
200
Cox A16
50
150
EV71 percent of lab-confirmed %
40
81.59％
250
30
100
20
50
10
0
0
4
case number
 EV71 占 实验室确
96.43％
6
7
8
9
10
11
12
month
死亡病例（126例） ：
诊的死亡病例的
5
200
100
180
90
160
unconfirmed
80
140
otherEV
70
120
EV71
60
100
Cox A16
50
EV71 proportion of all lab-confirmed %
40
80
60
30
40
20
20
10
0
0
4
5
6
7
8
month
9
10
11
12
EV71proportion of labconfirmed％
诊的严重病例的
100
300
case number
 EV71 占 实验室确
400
EV71proportion of confirmed％
阐明了手足口病的病原构成比例（2008）
中国大陆2008年HFMD 的病原谱
Viral etiology of HFMD in China
表1. HFMD患者临床标本的肠道病毒分离率和构成
Table1A. Isolation rate of HEV from Clinical samples of HFMD Cases
samples
HEV71
CVA16
4,769
790 (16.6%)
214 (4.5%)
Others
75 (1.6%)
表2. HFMD患者临床标本的肠道病毒PCR检出率和构成
Table1B. PCR positive rate of hev from Clinical samples of HFMD Cases
samples
18,153
HEV71
4,636(25.5%)
CVA16
1,092 (6.0%)
Others
1740 (9.6%)
病原学
阐明了中国大陆HFMD病原谱构成
2009年
实验室
确诊率
（%）
EV71(%)
CoxA16（%）
其它肠
道病毒（%）
类型
病例数
实验室
确诊数
普通病例
1141792
19351
1.70
40.63
37.55
21.82
重症病例
13811
4133
29.92
80.60
4.61
14.80
死亡病例
354
222
62.72
92.80
1.36
5.86
类型
病例数
实验室
确诊数
实验室
确诊率
（%）
EV71(%)
CoxA16（%）
其它肠
道病毒（%）
普通病例
1775105
63624
3.59
52.66
27.82
19.51
重症病例
27915
13282
48.84
81.6
3.75
14.6
死亡病例
905
645
71.27
92.40
0.78
6.82
2010年
发现绝大部分死亡病例和大部分重症病例是由EV71引起
2010年广西桂林全州县手足口病实验室监测结果
病例数
实验室确诊
数
实验室确诊率
（%）
EV71构成比（%）
其他EV构成比
（%）
普通病
例
4290
20
0.47
75
25
重症病
例
302
86
28.48
72.09
27.91
死亡病
例
10
10
100
80
20
病例
类型
全州县实验室确诊HFMD106例，占报告病例总数的2.31%，其中EV71阳性
77例，占实验室确诊病例的72.64%,其他EV阳性29例，占实验室确诊病例的
27.36%。重症病例中，EV71阳性62例，占实验室确诊重症病例的72.09%
64
组合检测方法-单管检测HFMD病原的构成
Group 1
病毒引物名称
扩增片段长度
肠道通用引物
153
EV71-S\A
263
CoxA 16-S\A
245
CA12
163
CB4
167
CB5
193
CA16
203
CB1
223
CB2
233
CA6
243
CA9
251
CA10
273
CB3
282
CA24
296
CA4
256
发热伴出疹症候群病原谱构成及其流行规律
病原谱
年龄分布
发热伴出疹症候群病毒病原原谱的时间趋势
加强HFMD病原检测和监测的十分必要
掌握手足口病病原谱，特别是EV71感染所占的比例，对分析
判断HFMD疫情导致重症和死亡的比例有重要的科学参考价值。
1. 1998年台湾手足口病暴发疫情中，在48.7%轻症病例中、
75％住院病例中、92％死亡病例中均分离到HEV71。
2. 2007年山东临沂发生了手足口病暴发，有8例死亡病例，
手足口病的病原谱构成中，HEV71约占84%，CVA16约占
16%；2008年当地手足口病病例数仍较高，但病原谱发
生较大的变化，病毒毒株是以CVA16为主（占62％）,并
且没有重症死亡病例。
3. 2008年阜阳手足口病例99％以上是有HEV71引起。
4. 2009年山东菏泽和河南民权HEV71占绝对优势
5. 2010年死亡病例HEV71占绝对优势
七. 分子流行病学和血清流行病学研究
EV71基因组
 基因组为(+)ssRNA，
全长约7400nt；
 经翻译后加工，共编
码11个蛋白；
 其中，VP1~VP4编码
病毒的衣壳蛋白；
VP1蛋白是最主要的衣壳蛋白，具有最多的型特异性中和位点，VP1蛋白编码序列（891nt）被
用于EV的型别鉴定和基因进化分析；
除VP1编码区外，也有学者利用VP4、VP2蛋白的编码序列和5′NTR进行基因分析。但VP1全基
因序列为公认的进行基因特征和进化分析的标准区域，用于EV分子流行病学研究。
病毒基因组含有单一开放读码框架（ORF），感染易感宿主后，基因组翻译产生一个多肽，然
后由蛋白酶水解为4个结构蛋白和7个非结构蛋白，同时中间过程产生4个重要的蛋白前体。
EV71分子流行病学研究的靶基因
Target gene used for EV71 molecular epidemiology
1999年，Brown等根据1970~1998年分离于美国和其
它5个国家的113株EV71的VP1全基因序列，对EV71
首次进行基因型别划分，划分为A、B、C基因型，
核苷酸序列型内差异＜12%，型间差异为
16.5%~19.7%。
根据亲缘性分析，基因型内又进一步划分为不同的
基因亚型：B1-B5，C1-C5
EV71各个基因型/亚型流行的地理和年代分布
Geographic and time distribution of all genotype/subgenotype of EV71
基因型/亚型
Genotype
/subgenotype
流行国家/地区
Country/district
流行年份
Year
A
美国
B1
美国、澳大利亚、中国台湾、匈牙利、保加利亚、
1972~1987
日本
B2
美国、
1981~1987
B3
马来西亚、澳大利亚、新加坡
1997~1999
B4
马来西亚、新加坡、中国台湾、日本
1997~2002
B5
马来西亚、中国台湾、日本、文莱
2003~2008
C1
美国、澳大利亚、马来西亚、新加坡、越南、泰
国、日本、德国、荷兰
1986~2005
C2
美国、澳大利亚、日本、中国台湾、德国、荷兰
C3
中国、韩国
1997、2003
C4
中国、越南、日本、中国台湾、泰国、匈牙利、
奥地利、荷兰，韩国
1998~2010
C5
越南、中国台湾
2005~2007
1970
1995~2008
Genotype of EV71
Circulating in global from
1970~2009
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/1
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/3
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/4
DTID/ZJU-74
DTID/ZJU-62
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/5
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/6
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/8
FY23
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/2
EV71/GDSG/17/2008
EV71/Zhejiang08
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/7
1970～2009年全球EV71的流
行基因型
SD07-1
C4
98~2010
C1
86~08
C5
C3
05~08;
C2
95~08
1235
E2004104-TW-CDC
984
EV71/GDFS/3/2008
SHZH03
CQ03-1
SH-6
N3340-TW-02
SH-17
SHZH98
1M-AUS-12-00
S40221-SAR-00
J115-MAL-01
804/NO/03
S10862-SAR-98
E2005125-TW
2007-07364
03-KOR-00
06-KOR-00
Genotypes still circulate in
Asia-Pacific region.
7F-AUS-6-99
6F/AUS/6/99
ENT/PM/SHA71
2000, Korea;
VIE
ENT/PM/SHA52 71
NUH0075/SIN/08
TW/2086/98
Tainan/5746/98
pinf7-54A
1245a/98/tw
NCKU9822
Tainan/4643/98
Tainan/6092/98
sub strain:BrCr-TR
BrCr
sub strain:BrCr-ts
TW/2272/98
MS/7423/87
A
B1、B2
B2
26M/AUS/4/99
1970, USA
72~87
26M/AUS/4/99 CHO cell-adapted
26M/AUS/4/99 mouse-adapted
97~99
EV71/SAR/SHA66 71
MY821-3-SAR-97
MY104-9-SAR-97
B3
EV71/SAR/SHA63 71
3799-SIN-98
S19841-SAR-03
SB12736-SAR-03
5511-SIN-00
2007-08747
B5
03~08
B4
97~02
UH1/PM/1997 71
EV71/9/97/SHA89
E2002042-TW-CDC
PP37-MAL-01
SB2864-SAR-00
5865/sin/000009
5666/sin/002209
CA16
0.05
分子流行病学-1
轻症、重症和死亡病例分离代表株基因组基因特征分析
国际上首先发现阜阳分离株EV71与CA16间
存在型间重组
VP1
88
95
94
97
83
100
Whole
genome
97
80
97
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/5
98
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/6
93
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/8
99
100
90
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/2
98
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/3
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/4
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/3
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/1
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/10
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/5
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/6
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/8
99
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/2
100
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/9
SD/07/521-27/stool
84
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/7
Shenzhen 03
Shanghai 02-6
Chongqing 03-1
3254-TAI-98-C4
EU131776-N3340-TW-02
Shenzhen 98
Shanghai 02-17
0390-TX-91-C1
999T/VNM/05-C5
2642-AUS-95-C2
KOR-EV71-13-C3
2235-NY-77-B1
MS/7423/87-B2
SB12007-SAR-03-B5
SB2864/SAR/00-B4
EV71 SAR SHA63
100
3799/SIN/98-B3
U22521-EV71-BrCr-A
92
0.01
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/1
98
99
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/4
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/5
95
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/7
95
98
81
EV71-SD07-1
100
98
99
EV71-SH02-6
3D
SHZH98
97
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/1
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/4
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/7
EV71-CQ03-1
100
100 EV71-SH02-6
100
U22522-ev71-MS-7423-87
95
99
81 EV71-SD07-1
EV71-SH02-17
U22521-EV71-BrCr
94
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/8
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/2
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/3
EV71-CQ03-1
98
EV71/Fuyang.Anhui/17.08/6
EV71-SH02-17
97
EV71 SAR SHA63
SHZH98-C4
U05876-CAV16
U05876-CAV16
U22521-EV71-BrCr-A
U22522-EV71-MS-7423-87-B
0.05
▲: fatal cases; ● : mild; ♦ : severe.
0.02
分子流行病学-2
阐明了中国大陆C4基因亚型进化和变异特征
1998~2010，1998年以来中国大陆HEV71分离株均
属于C4基因亚型，说明HEV71 C4基因亚型在中国已
经持续传播至少12年以上。
 国际上首次将C4基因亚型划分为 C4a和C4b，C4a
分枝：2002年以后流行；C4b分枝：2004年之前流行
株；
20072010
C4a与C4b组间差异6.7%，组内差异分别为2.8%、
5.0%；氨基酸序列差异﹤3.4%.
2007-2010的流行株位于进化树的末端。
C4a
-2010
20022009
19982004
C4b
CA16的分子流行病学
• 目前，CA16共分为A, B两个基因型，B基因型
又划分为B1和B2两个亚型。
• A基因型中只有原型株G-10，与B基因型毒株
的VP1序列差异为 27.5 - 30.2%。
• B1与B2亚型间的VP1核苷酸差异~11.8%
• 我国1999年以来CA16毒株均为B1亚型。
分子流行病学-3
CA16的分子流行病学研究1997-2010
国际上首次
将CA16的B1
亚型，划分为
B1a、B1b和
B1c，为追踪
CA16在全球
的分布和传播
来源及路线提
供了重要的科
学数据
人群易感性-1
血清流行病学
全国健康人群回顾性血清流行病学研究（2005）
回顾性血清流行病学研究证实我国
不同地区人群感染水平存在差异，
广东、新疆和云南EV71的感染率
很高，而黑龙江的感染率很低；
EV71
CA16
实验室网络内部质量控制
标本复核
抽检和复核228
份HFMD标本
复核鉴定319株
肠道病毒
现场督导
其它
项目内部现场督
导
细胞质量控
制
课题内部现场督
导
免费提供试
剂、细胞和
毒株
九. HFMD的预防和控制
HFMD主要死因
• 神经系统表现：脑炎和脑脊髓膜炎
为主
• 呼吸循环系统：全部累及。
• 主要死因为：脑疝；肺水肿、出血；
顽固性休克。
防治工作面临的问题和困难
• 在我国传播广泛，会出现持续性流行
• 尚无疫苗和药物预防手段
• 传染源控制措施效率极低，且实施难度大
• 个人卫生和环境卫生措施实施难度大，效
果难以评价
防控措施
• 加强监测
– 了解病原特征及动态变化
– 了解疾病流行强度
– 及时发现聚集性病例，特别是重症和死亡病例聚集现象和苗头，
及时进行调查核实
• 加强重症病例临床管理，努力降低病死数
• 及时总结临床病例管理经验，完善临床病例管理指南
• 加强医务人员培训
• 做好手足口病重症救治设备、药剂贮备
• 加强医院儿科ICU的建设
• 有效开展公众沟通，消除恐慌和不满
防控措施(续）
• 指导托幼机构和学校暴发预防和控制
• 落实个人卫生和环境卫生措施
• 启动晨检、巡检等管理制度
• 指导做好暴发处理（停班和关闭措施）
• 继续做好公众个人卫生和环境卫生知识的宣教
• 不断改进公众沟通策略和技巧
• 加强科技攻关，尽快启动专题研究
• 监测数据的深入分析建模研究
• 感染危险因素和重症危险因素研究
• 血清流行病学研究
84
Acknowledgement 致谢
国家脊灰和国家麻疹实验室全体
中国疾控中心应急办
中国大陆省地市实验室和流行病成员
中国卫生部