Transcript 核酸等温扩增技术（二）

扩增原理
 60—65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在
65℃左右处于动态平衡状态。因此，DNA在此温度下合
成是可能的。利用4种特异引物依靠一种高活性链置换
DNA聚合酶。使得链置换DNA合成在不停地自我循环。
扩增分两个阶段
 第1阶段为起始阶段，任何一个引物向双链DNA的
互补部位进行碱基配对延伸时，另一条链就会解离，
变成单链。上游内部引物FIP的F2序列首先与模板
F2c结合。在链置换型DNA聚合酶的作用下向前延
伸启动链置换合成。外部引物F3与模板F3c结合并
延伸，置换出完整的FIP连接的互补单链。FIP上的
F1c与此单链上的Fl为互补结构。自我碱基配对形成
环状结构。以此链为模板。下游引物BIP与B3先后
启动类似于FIP和F3的合成，形成哑铃状结构的单
链。迅速以3’末端的Fl区段为起点．以自身为模板，
进行DNA合成延伸形成茎环状结构。该结构是
LAMP基因扩增循环的起始结构。
第2阶段
 是扩增循环阶段。以茎环状结构为模板，FIP与
茎环的F2c区结合。开始链置换合成，解离出的
单链核酸上也会形成环状结构。迅速以3’末端
的B1区段为起点，以自身为模板。进行DNA合
成延伸及链置换．形成长短不一的2条新茎环状
结构的DNA，BIP引物上的B2与其杂交。启动新
一轮扩增。且产物DNA长度增加一倍。在反应
体系中添加2条环状引物LF和LB，它们也分别与
茎环状结构结合启动链置换合成，周而复始。
扩增的最后产物是具有不同个数茎环结构、不
同长度DNA的混合物。且产物DNA为扩增靶序
列的交替反向重复序列。
产物检测的原理
电泳分析
荧光检测
浑浊度检测