Transcript 多发性骨髓瘤中FISH

FISH 在多发性骨髓瘤中的应用
Edmond S K Ma博士
香港养和医院病理科
BTG 2013
议 程
• 回顾HKS&H的经验
• CG异常：东西方结合
• 诊断应用
BTG 2013
在多发性骨髓瘤中的CG异常
• 常规细胞遗传学30%
• 间期FISH ~ 90%
– Drach J et al Cancer Res 1995; 55: 3854 – 9
• 原因:
– 骨髓血浆细胞比例低
– 浆细胞增殖指数低
– 易位可能是形态的隐藏如t（4；14）（P16；q32）
BTG 2013
预后意义
BTG 2013
预后意义
黑: No 13q-, t(4;14)和
17p- 和 低 B2M
蓝: 阳性的 13q-, No
t(4;14) 和 17p- 和 低
B2M
绿: No 13q-, t(4;14) 和
17p- 和 高 B2M
红: 阳性的 13q-, No
t(4;14) 和17p- 和高
B2M
灰: 任何一个 t(4;14) of
17p-, 和低 B2M
粉: 任何一个 t(4;14) of
17p-, 和高 B2M
Avet-Loiseau et al, Blood 2007; 109: 3489 - 95
国际骨髓瘤工作组共识
•
危险分层（panel2）
Blood 2011; 117: 4696 – 4700
–
细胞遗传学检测染色体13和13q缺失, t(4;14) 和del(17p),
通过FISH检测的 t(4;14), t(14;16) 和 del(17p)
–
重复复发
•
标准的研究工作(panel 3)
Blood 2011; 117: 4701 – 5
–
标准的中期细胞遗传学和 FISH检测：t(4;14), t(14;16) 和
del(17p)
BTG 2013
议程
• 回顾 HKS&H 经验
• CG异常：东西方结合
• 诊断应用
BTG 2013
多发性骨髓瘤中FISH
•
•
•
•
以同一天处理为目标
骨髓涂片检查
如浆细胞＜5%则排除
通过CD138免疫磁珠分选细胞 (Miltenyi Biotec)
– 样品浆细胞＜50%
– 针对> 90%纯度
• 预分析变量：样本充足，新鲜度，浆细胞百分比
BTG 2013
CD138免疫磁珠分类
前
后
BTG 2013
CD138免疫磁珠分选
前
后
BTG 2013
FISH探针
• 13q, t(4;14), 17p, CEP 5/9/15
• t(4;14), t(14;16), 17p, CEP 5/9/15
• 最近的分类
– t(4;14)(p16;q32) (IGH/FGFR3 DF探头 )
– t(14;16)(q32;q23) (IGH/MAF DF探头 )
– TP53/CEP17
– CKS1B / CDKN2C（P18）放大/缺失
BTG 2013
1q的增加：多发性骨髓瘤新的高危CG标记
来源cytocell网站
红 (1q) = CKS1B
绿(1p) = CDKN2C (p18)
Avet-Loiseau H et al, J Clin Oncol 30: 1949 – 52, 2012
BTG 2013
FISH 分析
• 分析至少100细胞
• 两名观察员
• 实验室临界值
– 平均值 + 3SD正常骨髓为参照
• 阳性阈值水平
Ross FM et al 2012; Avet-Loiseau H et al 2012
– 10%：融合或分裂探针
– 20%：数值异常
– 30%：染色体1q增加
– 40%：del（17p）/ p53
BTG 2013
HKS&H数据摘要
• n = 105 例
– 从 2011年4月 – 2012年12月
• 男性: 女性 = 73 : 32
• 中位年龄 = 62 岁 (范围: 42 – 88)
• 中位浆细胞百分比 = 53%
– 范围 5 – 95%
• 细胞分类工作在 44/105 (42%)
– i.e. < 50% 浆细胞
BTG 2013
HKS&H数据摘要
CG异常
频率 (%)
计数
+ve细胞的范围
13q-
24%
5/21
60 – 90%
t(4;14)
16%
17/105
10 – 90%
t(14;16)
3%
2/80
50 – 80%
17p-
6%
6/105
20 – 80%
1q 增加
42%
5/12
40 – 90%
多染色体 5/9/15
36%
31/87
20 – 95%
HKS&H数据摘要
• 次要FISH异常
– 6/17 t(4;14)+ve表现出非典型的（1y1o1g）信号模式
– 多染色体 / 放大 4, 14 或 16
• 常见
– 单体性染色体 / 缺失 17, 4, 14 or 16
• 偶尔
BTG 2013
议程
• 回顾 HKS&H 经验
• CG异常：东西方结合
• 诊断应用
BTG 2013
各研究中FISH异常的频率
超二倍
体
MYC
1q 增加
54.2%
NA
NA
NA
11%
48%
39%
13%
NA
NA
6.8%
34.1%
~20%
NA
NA
18.9%
20.3%
29.7%
NA
NA
NA
34.7%
60.4%
NA
NA
49%
参考
t(4;14) t(14;16) t(11;14) del(17p) del(13q)
Fonseca 2003
(ECOG)
12.7%
4.6%
15.8%
10.7%
Avet-Loiseau
2007 (IFM)
14%
NA
21%
NA
NA
14.9%
5.4%
Huang S-Y 2005
(Taiwan)
Tan 2010
(Singapore)
Lai Y-Y 2012
(China)
Yu H 2011
(China)
HKS&H 经验
IgH基因易位57.6%
NA
NA
NA
22.2%
~50%
NA
NA
45.8%
16%
3%
NA
6%
24%
36%
NA
42%
各研究中FISH异常的频率
超二倍
体
MYC
1q 增加
54.2%
NA
NA
NA
11%
48%
39%
13%
NA
NA
6.8%
34.1%
~20%
NA
NA
18.9%
20.3%
29.7%
NA
NA
NA
参考
t(4;14) t(14;16) t(11;14) del(17p) del(13q)
Fonseca 2003
(ECOG)
12.7%
4.6%
15.8%
10.7%
Avet-Loiseau
2007 (IFM)
14%
NA
21%
NA
NA
14.9%
5.4%
Huang S-Y 2005
(Taiwan)
Tan 2010
(Singapore)
Lai Y-Y 2012
(China)
IgH 基因易位 57.6%
34.7%
60.4%
NA
NA
49%
Yu H 2011
(China)
NA
NA
NA
22.2%
~50%
NA
NA
45.8%
16%
3%
NA
6%
24%
36%
NA
42%
HKS&H 经验
各研究中FISH异常的频率
超二倍
体
MYC
1q 增加
54.2%
NA
NA
NA
11%
48%
39%
13%
NA
NA
6.8%
34.1%
~20%
NA
NA
18.9%
20.3%
29.7%
NA
NA
NA
参考
t(4;14) t(14;16) t(11;14) del(17p) del(13q)
Fonseca 2003
(ECOG)
12.7%
4.6%
15.8%
10.7%
Avet-Loiseau
2007 (IFM)
14%
NA
21%
NA
NA
14.9%
5.4%
Huang S-Y 2005
(Taiwan)
Tan 2010
(Singapore)
Lai Y-Y 2012
(China)
IgH 基因易位 57.6%
34.7%
60.4%
NA
NA
49%
Yu H 2011
(China)
NA
NA
NA
22.2%
~50%
NA
NA
45.8%
16%
3%
NA
6%
24%
36%
NA
42%
HKS&H 经验
Agenda
• 回顾 HKS&H 经验
• CG异常：东西方结合
• 诊断应用
BTG 2013
IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤?
• 女/57 白种人
• 骨病变
• Hb 11.3 g/dL
• WBC 6.7 x 109/L
• 血小板 285 x 109/L
• RFT 正常
• 副蛋白
– IgM-κ 10.4 g/L
IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤?
CD20
CD138
Kappa
PAX-5
BTG 2013
IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤?
• t(11;14) 阳性
• MYD88 L256P 阴性
• 结论
CD20+ IgM 多发性骨髓瘤
细胞周期蛋白 D1
BTG 2013
IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤?
• 女/68 中国人
• 肾病综合症,
肾脏损伤
• IgG-κ
副蛋白增加趋势
• 2010年首次BM:不是多发性
骨髓瘤
外周血
BTG 2013
浆细胞骨髓瘤伴t(11;14)(q13;q32)
• 约占20%多发性骨髓瘤
• 细胞周期蛋白D1 过表达
• 淋巴浆细胞形态（40–50%）
• CD138+ 19+ 20+ PAX5+细胞周期蛋白D1+
• 主要是 IgG型, IgA型 和轻链型骨髓瘤
• 80% IgM型多发性骨髓瘤伴t（11；14）
但CD20-ve相比之下t（11；14）非IgM型浆细胞骨髓瘤
BTG 2013
IgG副蛋白：多发性骨髓瘤还是华氏巨球蛋白血症?
BM
Trephine x
100
BM
Trephine x
600
BTG 2013
IgG 型异常蛋白：多发性骨髓瘤还是华氏巨球蛋白血症
CD20
CD138
Kappa
ISH
Lambda
ISH
BTG 2013
IgM 副蛋白：华氏巨球蛋白血症还是骨髓瘤?
• t(11;14) -ve
TC
• MYD88 L256P +ve
• 结论: IgG WM
BTG 2013
疾病进展
• 男/72 中国人
• 轻链型多发性骨髓瘤
诊断
• 达到CR
• 10个月后浆细胞白血病突然
复发
• 获得 del(17p) 诊断为阴性
复发
BTG 2013
致 谢
• Prof. C S Chim
• Mr. Anthony Wong
• Ms. Candy Wang
• 相关临床医生
BTG 2013